蜘蛛内共生菌沃尔巴克氏体的研究进展

中国生物防治 C h i n e s e J o u rna l o f B i o l o g i c a l C o n t r o l 2 0 0 7 年 8 月 蜘蛛内共生菌沃尔 巴克氏体的研究进展 王振宇， 杨芸， 彭宇 ( 湖北大学生命科学学院 ， 武汉 4 3 0 0 6 2 ) Re s e a r c h Pr o g r e s s o f S p i d e r S y mbi o n t Wo l b a c h i a WANG Z h e n y u，YANG Yu n，PE NG Yu ( F a c u l t y o f L i f e S c i e n c e s ，H u b e i U n i v e r s i t y ，Wu h a n 4 3 0 0 6 2，C h i n a ) 提要 ： 本文综述 了国内外有关蜘蛛体 内沃尔巴克氏体 的检测方法、 感染情况和其系统发育分 析等方面的研究进展， 并对研究蜘蛛沃尔巴克氏体的科学意义和发展趋势进行 了阐述。 关 键 词 ：沃尔 巴克氏体 ； 蜘蛛；共生菌；生殖调控；系统发育 中图分类号 ： Q 9 5 9 2 2 6 ； Q 9 3 9 3 文献标识码 ：A 文章编号：1 0 0 5 9 2 6 1 ( 2 0 0 7 ) 0 3 0 2 7 4 0 5 沃尔 巴克 氏体 ( W o l b a c h i a ) 是 一类 呈母性 遗传 的细 胞 内共 生菌 ， 在 昆虫纲 、 甲壳 纲 、 蛛形 纲 、 丝状线虫等动物中都有很高的侵染率_ 1 J 。1 9 2 4年 H e r t i g 和 Wo l b a c h E 在尖音库蚊( C u l e x p ip i e n s ) 的生殖组织里首次发现它， 并将其命名为 W o l b a c h i a p ip i e n t i s 。该内生菌通过卵的细胞质传 播并参与多种调控其寄主生殖活动的机制 ， 包括诱导胞质不亲合 、 诱导孤雌生殖、 诱导雌性化、 杀雄 ， 以及增 强雌性 繁殖力 和雄性 生育 力E 6 J 。它们 有 可能是 性别决 定 、 体 内共 生 和物 种 形成 等生物学问题的重要线索 ， 因而使 W o l b a c h i a的研究具有重要的科学意义 。同时 W o l b a c h i n在 生物 防治领域 和遗传 工程领 域 的潜 在 用途也 引起 了广 泛 的兴 趣 1 0 , 1 1 J 。 目前 国 内外 在 W o l b a c h i a的生 殖调 控 、 种 群生 物学 和 系 统发 育 方 面做 了 比较 多 的研 究 ， 但 主要集中在果蝇 、 蚊虫和寄生蜂等昆虫上_ 1 。国内外在蜘蛛上开展 W o l b a c h i n的研究工作 很 少 ， 而 国 内尚无相 关报道 。从世 界范 围来看 ， 有关 蜘 蛛 W o l b a c h i a的研 究正处 于起 步 阶段 ， 因 此 在我 国开展 蜘蛛 W o l b a c h i a的研 究意 义重 大 。本 文综 述 了国际 上有关 蜘蛛 W o l b a c h i a的研 究 进 展 ， 并 提 出在 国内开展蜘 蛛 W o l b a c h i a研究 的构想 。 1 Wo lb a c h ia的分子检测 大多数立克次氏体无法在寄主体外进行培养 ， 所 以很难用传统的微生物学方 法对 W o l b a c h i a进行研究。在以 P C R为基础的分子检测技术出现之前 ， 曾用 D A P I ( 4 ， 6 一 联脒一 2 一 苯基吲 哚 ) 染色法 ， 即用 非特 异性 的 D N A - b i n d i n g 荧光 染料 D A P I 染 色 ， 然 后 利 用荧 光 显微 镜 和 电镜 对 W o l b a c h i a进行 观察 和检测 l 1 6 , 1 7 。随 着 分子 生 物 学 方 法 的快 速 发 展 ， 尤 其是 P C R技术 的发 展 收稿 日期 ：2 0 0 6 0 8 3 0 基金项 目：湖北省教育厅基金重大项 目资助( Z 2 0 0 7 1 0 0 0 2 ) 作者简介 ：王振 宇( 1 9 8 3 一) ， 男 ， 硕士生；*通讯作者， E - m a i l ： p e n g y u h u b u e d u c n 。 27 4 维普资讯 第 3期 王振 宇等 ： 蜘蛛 内共生菌沃尔巴克氏体的研究进展 和分子系统学方法的应用 ， 使 W o l b a c h i a的检测有了重大突破l l 。已有多种不 同的 目的基因 用于 W o l b c h i 0的系统研 究 ， 包 括 1 6 S r D N A C 、 2 3 S r D N A 、 细胞分 裂蛋 白基 因 f t s Z _ I 、 细菌热激 蛋 白基 因 g r o E l 和 细菌表 面蛋 白基 因 w s p l 2 0 J 。这 些 基 因 的应 用 大 大 加 快 了 节肢 动 物 W o 1 b a c h i a的检测和研究 。但是直到 2 0 0 0年 0 h等u 3 J 采用电镜直接观察法和 1 6 S r D N A特异引物扩 增法 ， 首次在棒 络新 妇蛛 ( N e p h i l a c l a v a t a ) 中检测 到 W o l b a c h i a的感 染 。 目前 ， 蜘蛛 W o l b a c h i a的 检测 主要 是 应 用 w s p基 因 的通 用 引 物 8 1 F ( 5 一 T G G T C C A A T A A G T G A T G A A G A A A C 3 ) 和 6 9 1 R ( 5 A A A A A T T A A A C G C T A C T C C A 一 3 ) 进 行 P C R 检 测 2 1 ， 。 w s p基 因是 目前 报 道 的 W o l b a c h i a基 因中进化最快 的， 因而利用它能揭示 W o l b a c h i a更 为详细的系统发育关系。Z h o u 等 。 在 w s p序 列分 析 的基 础上 ， 把 昆虫、 螨和 甲壳类感 染 的 W o l b a c h i a分为 A群 和 B群 ( g r o u p ) ， 并又细分为 1 2个亚群( s u b g r o u p ) 。v a n Me e r 等 J 在 A群中增加了 1 个亚群 ， 在 B群 中 增加 6个亚群 ， 这样亚群数增加到 1 9 个 ， 并针对这些亚群设计了 w s p基因诊断的 P C R特异引 物 ， 建立了 W o l b a c h i a的基因诊断技术。虽然这些引物暂时没有应用到蜘蛛 W o l b a c h i a的研究 中来 ， 但 为蜘蛛 W o l b a c h i a的检测 、 鉴定 和 系统发育 关 系的研究 提供 了极好 的工 具 。 2 蜘蛛 Wo l b a c h i a的感染情况 W o l b a c h i o在 自然界 中的分 布非 常广泛 。研 究表 明 ， 在不 同地 区昆 虫种 类 中有 1 6 一2 2 的感染率 ；陆生等足动物约有 3 5 的感染率l 2 6 ； 使用长 P C R方法发现一些地区节肢动物 种类的感染率高达 7 6 2 。R o w l e y 等 2 l _ 应用 w s p基因通用引物 8 1 F和 6 9 1 R， 调查 了澳大利 亚昆 士兰地 区蜘蛛体 内 W o l b a c h i a的感染 情况 。在被 检测 的 1 0个科 的 2 0种蜘 蛛 中有 1 1 种 被 W o l b a c h i a感染 ， 感染率高达 5 5 ， 其中 B a d u m n a l o n g i n q u a 、 D i a e a c i r c u m l i t a 、 D i a e a s p 3种蜘蛛 中存在复合感染现象 ， 即一种蜘蛛感染至少 2种 W o l b a c h i a 。其后 G o o d a c F e等l_ 2 J 对英国东南部 地 区蜘 蛛体 内 W o l b a c h i a的研究 发现 ， 在被 检测 的 9个科 的 1 2 1 种 蜘 蛛 中有 3 7种感 染 了 W o 1 b a c h i 。 ， 感染率为 3 0 6 ， 其 中皿 蛛科蜘蛛感染 的种类 最多 ， 7 1个种有 3 2种感染 ， 感染率 为 4 5 1 。而狼蛛科 2 0个种中都没有 W o l b a c h i a的感染。说 明 W o l b a c h i a在蜘蛛种群中的分布 很不均匀， 这些不同可能与寄主( 蜘蛛) 的 自身条件、 寄主的行为及 W o l b a c h i a的传播效率有关 。 作者所在实验室采用 P C R方法已检测了武汉地区常见 2 O 种蜘蛛体 内 W o l b a c h i a的感染水平 ， 其中有 7 种感染了 W o l b a c h i a， 并对它们的 w s p基因进行了序列测定( 另文发表 ) 。迄今为止 ， 人们 已在蜘蛛的 1 4个科 、 5 6个种内检测到 W o l b a c h i a ( 表) 。实际上 ， 在自然界中感染 W o l b a c h i a 的蜘 蛛种类 远不 止这些 ， 有待 于我 们对 更多 的蜘蛛进 行 W o l b a c h i a的感 染检 测 。 3 蜘蛛 Wo l b a c h ia的组织分布 研究表明 ， W o l b a c h i a除存在于蜘蛛生殖组织外 ， 还分布于非生殖组织中， 如头、 胸、 腹、 中 肠、 胸部肌肉组织 、 毒腺和丝腺等 ， 。 W o l b a c h i a在寄主组织分布的广泛性 ， 暗示该菌可能还 具有除调控蜘蛛生殖方式以外 的其他功能。 4 蜘蛛 W o l b a c h i a系统发育分析 W o l b a c h i 0属于变形菌门( P r o t e o b a c t e r i a ) 的 a 亚门， 是一种立克次氏体。以 W o l b a c h i a的 w s p 基因序列、 1 6 S r D N A序列和f t s Z序列为基础 ， 建立了 W o l b a c h i a的系统树 ， 可将 W o l b a c h i a分为 A F 6个亚组 ( s u b d i v i s i o n ) 2 8 3 。A亚组和 B亚组 的 W o l b a c h i a共生于昆虫、 螨类和甲壳动物体 2 75 维普资讯 中 国 生 物 防 治 第 2 3 卷 内 ， C亚组和 D亚组 的 W o l b a c h i a共生 于丝状 线 虫体 内 。E亚组 l 鹳 和 F亚组 L 2 9 是 最 近才 提 出 来的。E亚组的 W o l b a c h i 0共生于白符( F o l s o m i a c a n d i d a ) ；F亚组的 W o b a c h i a共生于锥形宽 喙象 甲( R h i n o c y l l u z C O n i c u s ) 、 地 中海木 白蚁 ( K a l o t e r m e s fla v i c o l l i s ) 和锯 白蚁 ( Mi c r o c e r o t e r m e s s p p ) 中， 其分子系统学证据还不够充分 ， 有待进一步证实。O h等_ 3 基于 Z基因序列分析 ， 确定棒 络新 妇蛛 中的 W o l b n c h i 0属 于 A亚组 。R o w l e y等 对感染 蜘蛛 的 W o l b a c h i a的 w s p基 因序列 的研究表明， 绝大多数蜘蛛体内的 W o l b a c h i a和昆虫 、 螨类 、 甲壳动物体 内一样属于 A亚组和 B 亚组 ； 没有 发现属 于线虫感 染 的 c和 D亚组 。但是 蟹蛛科 狩蛛 属 的 D i a e a c i r c u m l i t a 、 D i a e a s p 和 石蛛科 的 D y s d e r 0 e r y t h r i n 0 ， 其体 内 的 W o l b a c h i a与 一种无 花果 小蜂 P e g o s c a p u s g e m e l l u s 体 内的 W o l b a c h i a亲缘关系很近， 而与 A、 B亚组的蜘蛛亲缘关系较远。它们共 同组 成一个新 的亚组 ， 暂时命名为 G亚组。G o o d a c r e 等 2 2 对英 国蜘蛛体 内 W o l b a c h i a的 w s p基因序列的系统发育研 究 ， 进一步证实蜘蛛体内的 W o l b a c h i a属于 A 、 B亚组 ， 没有发现与 G亚组亲缘关系较 近的种 类 。说明 G亚组的确定有待更多的 W o l b a c h i a的 w s p基因序列的测定和分析。 表感染 Wo l b a c h ia的蜘蛛种类 嘲蛛科名 感染的种类 来源 蜘蛛科名 感染的种类 来源 园蛛科A r a n e u s s p 1 2 1 僧帽疣胸蛛 O e d o t h o r a x a p i c a t u s 2 2 L a r n 0 t a b d a 2 1 O e d o t h o r a x 7 c u s 【 2 2 P o e c i l o p a c h y s a u s t r a l a s i a 2 1 O e d o 0 r ( g i b b o s u s l 2 2 j 十字园蛛 A r a n e u s d i a d e m a t u s l 2 2 j 钝瘤胸蛛 O e d o t h o r a x r e t tt , tt s l 2 2 j 丽楚蛛 Z y g ie U a n o t a t a I 2 2 P i ty o h y p h a n m s p h r y g ia n u s 2 2 大腹园蛛 A r a n e u s v e n t r i c o s u s 本文作者 P e p o r a mu m l u d i c mm 【 2 2 J 卡氏毛园蛛 E r io v ix i a c a v a l e r i e i 本文作者 皿双环蛛 P o c a d i c n e mu s j i n c e a 【 2 2 角类肥蛛 L a r i n i o d e s c o r n u t a 本文作者 S i l o m e t o p u s a m b i g u u s 【 2 2 j 漏斗蛛科 T e g e n a r i a d u e l l i c a l 2 2 S i l o m e t o p u s e l e g a n s l 2 2 j 潮蛛科B a d u n ma l o n g i n q u a l 2 1 j S t e m o a y p h a n te s l i c a u s l 2 2 j 石蛛科D y s d e r a e r y t h r in a 【 2 j 亿0 v a g a n s l 2 2 j 皿蛛科柔软指蛛 B a th y p h a n t e s g r a c i l i s 2 2 T r o x o c h r u s c a b r ic 2 2 D ip l o c e p lu d u c r is t a t u s l 2 2 J 前行瓦蛛 kMe 0 a n t i c a 2 2 E n t e l e c a r a fl a y e , l 2 2 J W a l c k e n a e r i a c u l i a r0 2 2 黑微蛛 E r i g o n e a t r a 【 2 2 W a k e n a e r i a o b t u s a l 2 2 齿肢微蛛 E r ig o n e如 枷 P 2 2 幽灵蛛科P h o l c u s p h a l a n g o i d e s l 2 1 j E r i g o n e l o n p a lp l s l 2 2 j 近亲幽灵蛛 P h o l c u s a f n i s 本文作者 E r i g o n e p r o m i s c u a l 2 2 J 跳蛛科H o l o p l a t y s s p p 【 2 1 G o n a t i u m r u b e m l 2 2 J 肖峭科M e t a m e n g e i 2 2 H y p 0 m n t a b it u b e r c u l a t u m 【 2 2 J L e u c a u g e d r o m e d a r i a l 2 l J L e p t h y p h a me s rn i n u t u s 【 2 2 J 棒络新妇蛛 N e p h i l a c l a v a t a 3 ， 本文作者 L e p th y p h a n t e s t e n u is l 2 2 j N e p h i l a p l u m i p e s 2 1 Ma c r a r g u s r 咖 2 2 球蛛科T h e r i d i o n( U n id e n t e d ) 2 2 M e g a l e p t h y p h a n te s c o l l i n u s 【 2 2 j 蟹蛛科D i a e a c i r c u ra l i t a l 2 1 J 乡间侏儒蛛 Me io n e t a r u r e s t r i s 2 2 D i a e a s p 2 1 r e f ， ， n t a n 0 2 2 妩蛛科 膝形涡蛛 Z o s is g e n ic u l a t 2 1 他r e i n e c l a t h r a t 0 2 2 猫蛛科 斜纹猫蛛 O x y o p e s s e r t a t u s 本文作者 N e r e i n e p e h a t a 【 2 2 J 狼蛛科 沟渠 豹蛛 P a r d o s o l a u r a 本文作者 5 蜘蛛 Wo l b a c h ia的研究展望 蜘蛛作 为节肢 动物 门蛛形 纲 的一 大 类 群 ， 迄 今 为 止 ， 全 世 界 报 道有 3 6 1 8属 ， 3 9 1 1 2种 。 2 76 维普资讯 第 3期 王振 宇等： 蜘蛛 内共生 菌沃尔 巴克 氏体 的研究进展 我国地跨东洋和古北两个地理分布区 ， 蜘蛛种类丰富， 其体 内丰富的 W o l b a c h i a资源是世界资 源库的重要组成部分。因此我国学者对这一研究领域的快速切入对全球 W o l b a c h i a的研究和 我 国开发 W o l b a c h i a用 于生物 防治 都具有 重要 意义 。 首先除了少数 的螨类 ， 蜘蛛是螯肢亚门中唯一感染 W o l b a c h i a的种类。所 以利用 w s p基 因 对蜘蛛 体 内 W o l b a c h i a进行 系统 发 育分析 将有 助 于重 建节 肢 动物 门 W o l b a c h i a的进 化历 史 。而 目前只是对蜘蛛 W o l b o c h i a的系统分化作了简单的探讨 ， 确定其属于 A 、 B亚组 ， 其详细 的系统 发 育研 究还是 空 白。我们 可 以利 用 v a n M e e r 等 l 2 设计 的 1 9个 亚 群 的特异 性 引物来 对 蜘蛛 体 内的 W o l b a c h i a进行更详细的分析， 以确定其基本类群。 其次利用蜘蛛为对象研究 W o l b a c h i a的传播方式。虽然垂直传递( 母性遗传) 是 W o l b a c h i a 在宿主种内的基本传递模式_ 3 ， 但有趣 的是 ， 有一些研究表明 W o l b a c h i a在同种宿主的不同个 体或者不同宿主间也有水平传递 。H u i g e n s 等 通过试验证实 ， 当蚬蝶赤 眼蜂 ( T r i c h o g r a m m a k a y k a i ) 的含菌个体和未含菌个体共享 同一食物源时， W o l b a c h i a可由含菌个体传染给未含菌的 同种个体。而且经水平传递的 W o l b a c h i a可在新宿主中垂直传递其后代。We r r e n等l 2 纠 首次报 道 W o l b a c h i o在不同种间的水平传递 ： 金小蜂 N a s o n i a g i r a u h i 与其寄主丽蝇体内都有 W o l b a c h i o， 尽 管这 两种 昆虫 的亲缘关 系较 远 ， 但所 共 生 的 W o l b a c h i a的亲缘关 系非 常接 近 。这 个发 现证 实 W o l b o c h i a在不同种间存在水平传递， 而且显示寄生蜂与其寄主是 W o l b a c h i a种间传递一个 可能的传播机制l 3 。R o w l e y等 l _ 在 3种蜘蛛体内发现的复合感染现象很可能是 W o l b a c h i a水 平传播的结果 。蜘蛛是许多农林害虫的捕食性天敌 ， 其猎物有许多被 W o l b a c h i a感染 ， 例如灰 飞虱 、 螨类 3 和蚜虫 等。它们之间捕食与被捕食 的关系， 可以用来研究 W o l b a c h i a的水 平传播方式。同时蜘蛛被多种寄生蜂寄生l 3 ， 通过两者体内 W o l b a c h i a的 w s p基 因的系统发 育分析 ， 可以为 W o l b a c h i a在寄主和寄生物间的水平传播提供直接 的证据。 最后 在许 多种蜘 蛛 中存 在 着 生 殖 异 常现 象 ， 例 如 在皿 蛛科 的 P i t y o h y p h a n t e s p h r y g i a n u s 、 隆 头蛛科的 S t e g o d y p h u s d u m i c o l a 、 蟹蛛科的 D i a e a s o c i a l 等 中发现的性比异常现象_ 2 ； 在石蛛科 的 D y s d e r a h u n g a r i c 和花 同 蛛科的 T h e o t i m a m i n u t i s s i m u s l 3 9 _ 中发现的孤雌生殖现象。研究者 认 为这些 现象可 能是 蜘蛛 内生菌 W o l b a c h i a的生殖 调节所 导 致 的 ， 但 都有 待于证 实 。在今后 的 工作 中我们 可 以利 用抗 生素 或 高 温 去除 蜘 蛛 体 内 的 W o l b a c h i a， 以研 究 W o l b a c h i a的感 染 是 否 是导 致这些 现象 的真 正原 因 。此 外 ， 还 可 以蜘蛛为 对象 对 W o l b a c h i a研究 的一 些关键 问题作 进 一 步的探究 ， 如 W o l b a c h i a引起诱 导胞质不亲合、 诱导孤雌 生殖的生化和分子机理 ； W o l b a c h i a 是如何广泛分布的? W o l b a c h i a在种内与种间的进化轨迹是怎样的? W o l b a c h i a能否有效地用 于生 物防治 ?等 等 。 现 阶段 ， 我 国开展 蜘蛛 W o l b a c h i a研 究 的主要 目标 包 括 ：( 1 ) 明确 我 国蜘 蛛体 内 W o l b a c h i a 的 s p基 因序 列和其 基本 类群 ；( 2 ) 明确我 国蜘蛛 种 群 中 W o l b a c h i a的感 染 特 点和 生 殖调 控作 用；( 3 ) 明确 W o l b o c h i o在蜘蛛体内的传播方式。要实现上述 目标 ， 应针对我 国蜘蛛的不同地 理种群 ， 采用 w s p基 因分子检测 、 高温或抗生素处理， 以及生态学实验等相结合的方法对 W o l - b a c h i o的感染和生殖调控作用进行研究 。在研究过程中， 应注意各步骤之间的相互关系和 作用。其中 W o l b a c h i a感染的分子检测 、 W o l b a c h i a去除处理以及相关的生态学试 验是分析蜘 蛛 z 6 o c 基本类群、 分布规律、 感染特点和生殖调控作用的技术保障。 目前 ， 我们实验室已 开展 了此 方 面的研究 ， 相 关文章 正在 整理 之 中。 2 7 7 维普资讯 中 国 生 物 防 治 第 2 3卷 参 考 文 献 e r r e n J H，Wi n d s o r D M， G u o L RP ro c R S o c L o n d B J ，1 9 9 5 a ，2 6 2 ： 1 9 7 2 0 4 C 0 r d a u x R，M i c h e 1 S al z a t A，B o u c h o n D J E v o l B i o l l J ， 2 0 0 1 ，1 4 ： 2 3 72 4 3 0 h HW， K i mM G， S h SW， e t a 1 I n s e c t Mo l B i 0 J ，1 9 9 2 ， 5 3 9 5 4 3 B a n d i C ， A n d e o n T J ， G e n c h i C， e t a1 P r o c R S o c L o n d B B io l S c i J ，1 9 9 8 ， 2 6 5 ： 2 4 0 7 2 4 1 3 H e r t i g M P a r a s i t o l o g y J ，1 9 3 6 ， 2 8 ： 4 5 3 4 8 6 B r e e u w e r J A，We r r e n J HN a t u r e l J J ，1 9 9 0，3 4 6：5 5 85 6 0 J u c h a u h P ， R i g a u d T ，M o c q u ar d J P H e r e d i t y l J J ，1 9 9 2 ， 6 9 ： 3 8 23 9 0 V a v r e F ， G i 6 n C ，B o u l e t r e a u MI n s e c t Mo l B i o l l J J ，1 9 9 9 ， 8 ( 1 ) ： 6 7 7 2 1 D v s o n E， K a m a t h M K，H u r s t G D H e r e d i ty l J J ， 2 0 0 2 ， 8 8 ( 3 ) ：1 6 61 7 1 A e s c h i l i m a n n J P E n t o m o p h a g a l J J ，1 9 9 0， 3 5 ： 35 S t o u t h a me r RE n to m o p h a g a l J J ，1 9 9 3 ， 3 8 ：3 6 We l T n J H A r m u R e v E n to m o l l J j ，1 9 9 7 ， 4 2 ： 5 8 76 O 9 宋社吾 ，赵彤 言，董言德 ，等 昆虫学报 J ，2 0 0 2 ， 4 5 ( 5 ) ： 5 7 1 5 7 7 付海滨 ，丛斌 ， 戴秋慧 中国生物防治 J ， 2 0 0 5 ， 2 1 ( 2 ) ： 7 07 3 O N e il l S L ， G i o r d a n o R， C o l b e r t A M E ，e t a1P r o c N a t l A c a d S c i U S A l J J ，1 9 9 2 ，8 9 ： 2 6 9 9 2 7 0 2 K i e g N R，H o l t J GB e r g e y s ， a n u a l o f S y s t e m a t i c B a c t e ri o l o gy l M ， B a l t i m o r e ： Wi l l i a m sWil k i I l s ，1 9 8 4 O N e il l S L ， K a r r T L N a t ure l J J ，1 9 9 0 ，3 4 8 ：1 7 8 1 8 0 R o u s s e t F， B o u c h o n D，P i n t u r e a u B， J u c h a u h P， S o l i g n a c M P r o c R S o c L o n d B l J ，1 9 9 2 ， 2 5 0： 9 1 9 8 M e e r M， Wi t t e v e l d t J ，S t o u t h am e r RI n s e c t Mo l B i o l l J J ，l 9 9 9 ， 8 ； 3 9 9 4 0 8 1 B r a i g H R， Z h o u W，D o b s o n S， e t a1J B a c t e r i al l J J ，1 9 9 8 ， 8 0 ：2 3 7 32 3 7 8 R o w l e y S M，R a v e n R J ， Mc G r a w E A C u r r e n t M i c r o B i o l o gy l J J ，2 0 0 4 ， 4 9 ； 2 0 8 2 1 4 G o o d a c r e S L ， Ma r t i n O Y， T h o m a s C F G， H e w i t t G MM o l e c u l ar E c o l o g y I J J ， 2 0 0 6 ，t 5 ： 5 L 75 2 7 Z h o u W，R o u s s e t F ， O N e i l l S L P ro c R S o c L o n d B l J J ， 1 9 9 8 ， 2 6 5 ： 5 0 95 1 5 v a n Me e t M M M， Wi tt e v e l d t J ，S t o u t h a m e r RI n s e c t M o l B i o l J J ，1 9 9 9 ， 8 ： 3 9 94 0 8 We r r e n J H，Wi n d s o r D WP ro c R S o c L o n d B l J j ，2 0 0 0 ， 2 6 7 ：1 2 7 71 2 8 5 1 B o u c h o n D，R i g a u d T ，J u c h a u