苏云金芽孢杆菌制剂.pdf

ly 中华 人 民 共 和 国 林 业 行 业 标 准 l y / t 1 1 8 1 一 9 5 苏 云 金 芽 抱 杆 菌 制 剂 1 9 9 5 一 0 6 一 2 2 发布1 9 9 5 一 1 2 一 0 1 实施 中华人民共和国林业部发 布 中华人民共和国林业行业标准 ly/ t 1 181 一 95 苏 云 金 芽 抱 杆 菌 制 剂 1 主皿内容与适用范围 本标准规定了苏云金芽袍杆菌制剂产品的技术要求、 检 验方法、 验收规则、 包装、 标志、 贮存和运输。 本标准适用于以苏云金芽抱杆菌( b 1 ) 经工业发酵而制成的苏云金芽抱杆菌制剂。 本标准不适用于加有化学农药的苏云金芽抱杆菌复合制剂。 2 引用标准 g b 1 6 0 1 农药氢离子浓度测定方法 g b 1 6 0 4 农药验收规则 g b 1 6 0 5 商品农药采样方法 g b 3 7 9 6 农药包装通则 g b 5 4 5 1 农药可湿性粉剂湿润性测定方法 h g2 -8 9 6 农药粉剂细度测定方法 3 技术要求 1 剂型 粉剂、 可湿性粉剂、 悬浮剂。 2夕 卜 观 粉剂及可湿性粉剂外观呈灰白色或浅褐色粉末状， 悬浮 剂为棕黄色至褐色稠状液体。 3 生 物指标( 见表 1 ) 表 1 指标名称 指标 粉 剂可 湿 性 粉 剂 悬 浮 剂 一等品二等品一等品二等品 一等品二等品 毒力效价 ( d p i u/ mg ) 1 6 0 08 0 0 1 6 0 0 08 0 0 08 0 0 04 0 0 0 注: d p为de n d rol i mu s p u n c t a t u s 马尾松毛虫) 的缩写. 3 . 4 理化指标( 见表 2 ) 表 2 指标名称 指标 粉剂可湿性粉剂悬浮剂 p h 5 . 0 - 8 . 0 5 . 0 - 8 . 04 . 5 - 6 . 5 顺粒细度 9 8 %过 1 0 0目筛9 5 瑞过2 0 0目筛9 5 叭过 2 0 0目筛 中华人民共和国林业部 1 9 9 5 一 0 6 一 2 2批准 1 9 9 5 一 1 2 一 0 1 实施 1 ly/ t 11 81一 9 5 续表 2 指标名称 指标 粉剂可湿性粉剂悬 浮 剂 含水率， %c 55 密 度， g / c m 0 . 3 - 0 . 6 0 . 3 - 0 . 61 . 1 - 1 . 4 悬浮率( 有效成分) ， %妻 5 05 0 湿润时间， 5( 1 2 0 检验方法 4 . 1采样 按g b 1 6 0 5 进行取样。 4 . 2 感官检验 取样品放于干净的试管中， 以肉眼直接观察其颜色性状。 4 . 3 生物及理化检验 4 . 3 . 1 生物效价测定 4 . 3 . 1 门供试虫种 室内 饲养 的 马 尾 松 毛 虫 ( d e n d r o l i m u s p u n c ta t u s ) , 4 . 3 . 1 . 2 幼虫的饲养 马尾松毛虫幼虫孵出后， 在相对湿度 7 5 %-8 5 %, 温度为2 5 -2 8 c( 当日均温) 的养虫室内饲养， 光 照强度 1 0 0 0 - - 4 0 0 0 i x ， 光照时间 1 6 h / d , 4 . 31 . 2 . ， 幼虫的接入方法 将收有卵块的马尾松枝叶放人直径 1 6 c m、 高 2 0 c m的培养缸内， 上面以 2 层纱布用橡皮圈扎上。 在卵孵化高峰期， 饲养缸内放入新鲜马尾松枝叶， 每 日 用新洁尔灭(c 1 八 0 0 0 ) 消毒过的用具清除虫粪， 并 换上新鲜枝叶 饲养幼虫。当幼虫生长到二至三龄时， 移入养虫笼进行饲养石 养虫笼由4 0 c m x4 5 c mx 4 0 c m的木制骨架构成， 前后两面上窗纱， 左、 右及上面镶上玻璃， 用木板封底。 幼虫生长 7 1 0 天以二龄 幼虫为主; 1 0 - 1 5 天以三龄幼虫为主。 应以 饲养生 理状态一 致的健 康幼虫作为质量检测的供试虫。 4 . 3 . 1 . 2 . 2 蛹的收集 用带橡皮头的 镊子从松枝叶上轻轻取下成熟的蛹茧放人养虫笼内， 使其羽化。 每笼约3 0 头。 4 . 3 . 1 . 2 . 3 成虫的饲养和产卵 将饱含1 0 0 o 葡萄糖溶液的 脱脂棉球 挂入成虫饲养笼中， 供成虫取食， 每天更换一次棉球。 同时放入 2 只2 5 0 m l三角瓶水培的 新鲜马尾 松枝叶， 做为成虫产 卵的 场所。蛹羽化后， 成虫当 天或次晚交配， 历 时 7 h以上即可完成受精作用并产卵。卵期约 7 天左右开始孵化， 7 1 0 天为卵的孵化高峰期。 4 . 3 . 1 . 3 感染方法 称取新鲜马尾松针叶5 g , 授沾供试样品 并晾千后， 放入消毒过的5 0 0 m l 三角瓶中， 用一层纱布将 瓶口 扎上。 同样浸沾燕馏水( 含有。 . 1 % 吐温- 8 0 ) 者作对照。 分别各放入3 0 头供试虫种( 三龄幼虫) . 由 昆虫取食感染， 在 2 8 士1 室温条件下， 经 7 2 h检查幼虫死亡情况。死亡的判断标准以用镊子轻轻触动 无任何反应者判为死亡。 统计死亡率按式( 1 ) ， 如对照有死亡按式( 2 ) 进行校正， 对照死亡率不超过 1 0 %. 4 . 3 . 1 . 4 样品稀释 4 . 3 . 1 . 4 . 1 标准品( 效价1 8 o o o i u/ m g ; 1 6 o o o i u / m g ) 准确称取标准品1 0 0 m g精确到。 . 1 m g ) ， 放入2 5 0 m l装有1 0 粒玻璃珠的 磨口三角瓶中， 然后再 加入准确量取的2 0 m l蒸 馏水( 含。 . 1 %吐温 - 8 0 ) 。 在旋涡振荡器上 振荡1 0 m i n ， 此液为浓度5 m g / m l l y / t 1 1 8 1 一 9 5 的 标 准 母 液， 用1 0 倍 和2 倍稀 释 法 将 标 准 母 液稀 释 成浓 度 为5 0 0 , 2 5 0 , 1 2 5 , 6 2 . 5 , 3 1 . 2 5 , 1 5 . 6 2 5 p g / m l 的六个稀释度。 4 . 3 - 1 - 4 . 2 待测样品 粉剂和可湿性粉剂的 待测样品 参照标准品的配制方法配制感染液。 悬浮剂采用称重法取样并参照 标准品的配制方法配制感染液。或通过预备试验， 估计 l c ” 的范围来选择稀释度， 但不同浓度的试验剂 量不得少于5 个。 4 . 3 . 1 . 5 4 . 3 . 1 . 5 结果统计 计算死亡率及校正死亡率( 用 ab b o t t 公式进行校正) 死亡率( %) = 处理组死虫数 处理组死虫数 +活虫数 水 1 0 0” ” (1) 校正死亡率( %)=对照组生存率 一处理组生存率 对照组生存率 x 1 0 0 。 (2) 4 . 3 - 1 . 5 - 2 l c ,. ( 致死中浓度) 的 计算 将浓度( 剂量) 换成对数值， 死亡率换成机率值， 用最小二乘法的演算公式使用计算器或按编定的 b a s i c计算程序将数据输入微机进行结果运算。生物测定结果运算的计算机程序见附录 a( 参考件) 。 用最小二乘法求供试样品毒力直线回归式， 按式( 3 ) : y = a + b x( 3 ) x x x y 一 x xx xy a 今- n x x 2 一丈 e x ) , ( 4 ) * =n x x y - x x x y n x x 一( fx ) (5 ) 式中: y 死亡率机率值; x-浓度对数值; n剂量的组数， n=5 , 4 . 3 . 1 . 5 . 3 相关系数 r 的计算 人n r 一l x x l y y (6 ) l。 二 xxy 一 ( ix) ( xy) / n (7 ) l x x二x x2 l, .,. = 艺y z ( xx) 2 / n(8 ) ( e y) / n (9 ) 式中: r -相关系数; 九 试 虫 数。 4 . 3 . 1 . 5 . 4 x 检验 通过x 验证l n - p线所得l m的可信性。 x: 值 = ( t一刀 尸 ) 2 n p( 1一 尸) (1 0 ) ly/ t 118 1一 95 式中: 二 观察值; 。 一 昆 虫 数 尸死亡率; n p 死亡率计算值。 求出x 值后查x 表， 证明 这一直线的回归 式是否符合实际情况。 如按自 由度为4 ， 置信度9 5 %, 查x “ 表知x “ 值为9 . 4 4 8 ， 大于所求得的x “ 值， 证明这一直线的回归 式符合实际情况。 4 . 3 . ， . 5 . 5 标准误差和 9 5 %置信限 标准 误差按式( 1 1 ) 计算: s _ 一一 1. . 价 . . ( n) b了 l n w 式中: s m 标准差; b l o - p的坡度; n 试虫数; w 每一机率值的 权系 数。 求出s 。 后即可求出众5 。 的置信限为及. 。 士1 . 9 6 x s m o 4 . 3 . 1 . 5 . 6 检品效价 检品效价按式( 1 2 ) 计算: 检品 效价( i u / m g ) 二 式中i u为国际单位。 4 . 3 . 2 p h值测定 标准品l m . 供试样品 1 c 5 0 x 标 准品效价 ( i u/ m妇 (1 2) 按引用标准g b 1 6 0 1 农药氢离子浓度测定方法中的p h试纸法 进行。 4 . 13 含水率测定 粉剂和可湿性粉剂取样时一次取足， 不得缩分。 取样量不得少于2 0 0 g ， 保存于磨口容器中， 测定时 从中 再称取5 g 样品( 称准至。 . 0 1 g ) , 置于对流的干 操箱中。 在1 1 0 12 烘干4 h 至恒 重， 取出后放入 干燥器中冷却至室温， 取出立即称重。 含水率按式( 1 3 ) 计算: 一 w一g o 二 g , x : 。 。 u 。 式中: w样品的含水率， %r g烘干前样品重， 9 ; g 烘干后样品重， 9 。 在同批同次取样品重复三次， 取其算术平均值， 此值应精确到0 . 1 %0 4 . 3 . 4 细度测定 按hg 2 -8 9 6 进行。 4 . 3 . 5 湿润时间测定 按g b 5 4 5 1 进行。 4 . 3 . 6 密度测定 4 . 3 . 6 . 1 仪器 4 . 3 . 6 . 1 . 1 密度计。 4 . 3 . 6 . 1 . 2 量筒: 5 0 0 ml , 4 . 3 - 6 . 2 操作步骤 在 2 0 的条件下， 将样品沿玻璃棒慢慢地注入清洁干燥的量筒中， 不得使试样产生气泡和泡沫， 拿 l y / t 1 1 8 1 一9 5 住密度计表上端， 将其慢慢地放入试样中， 注意不要接触筒壁。 当密度 计在样品中 停止转动后， 记下液面 上边缘的数据， 精确到 。 . 0 0 1 ， 平行测定三次， 计算平均值， 即为样品的密度。平行测定结果之差不得超 过 0 . 0 0 5 . 粉剂、 可湿性粉剂的密 度测定为物体的重量和其体 积的比值， 即为 样品的密度。 4 . 3 . 7 悬浮率测定 4 . 3 - 7 . 1 仪器和试剂 4 . 3 - 7 . 1 . 1 量简: 2 5 0 m l具塞、 0 和 2 5 0 刻度间距离为 2 0 2 1 . 5 c m, 2 5 0 ml刻度线与塞子底部之间 的距离为4 -6 c m, 4 . 3 . 1 . 1 . 2 吸移管: 长3 0 - 4 0 c m， 内径 0 . 5 c m， 末端内径为。 . 3 c m， 并将其弯成 u形， u形部分不高 于 。 . 5 - 1 . 0 c m， 其管口向上. 4 . 3 . 7 . 1 . 3 秒表、 三角玻瑞瓶( 1 0 0 ml ) , 恒温水浴锅。 4 . 3 - 7 - 1 . 4 标 准 硬水: 以 磅 截钙 计， 具 有3 4 2 p p m硬 度， 其配 制 方 法 按g b 5 4 5 1 中 标 准 硬 水 配 制方 法 进行。 4 . 37 . 2 测定步骤 4 . 3 . 7 . 2 . 1 可湿性粉剂佯品测定步骤 称取样品2 2 0 m 放入 盛有玻璃珠的三角瓶中， 加 入标准 硬水2 7 0 m l ， 用手左右振荡6 0 次， 从中吸 取 2 5 0 ml至 2 5 0 ml , 具塞量简中。 将量简放入3 0 士1 c 恒温水浴中， 当悬浮液温度达 3 0 c时， 将量简盖 好， 拿 起量简先轻轻摇动沉淀物， 然后有规律地以盘筒中部为中心上下颠倒1 5 个来回( 约3 0 s ) . 使呈均 匀的悬浮液， 量简仍放入恒温水浴中， 打开盖子静置3 0 m i n 后， 用吸管以抽气法将量简上部9 / 1 。 的悬 浮液抽出( 在1 5 - 3 0 s 内 完成) 。 抽液过程中吸液管应依附简壁随液面下降而下降， 勿使下部沉淀搅动， 量简内剩下1 / 1 0 部分， 加5 0 m l 标准 硬水， 按4 . 3 . 1 生物效价测定法测定毒力。 4 . 3 . 7 . 2 . 2 悬浮剂 样品测定步骤 样品摇匀后吸取 5 ml - ( 精确到。 . 0 1 ml ) 于 1 0 0 ml三角瓶中， 加入标准硬水4 5 ml ， 用手左右振荡 5 0 次， 从中吸取 2 . 5 m l . 于量简中， 并稀释至2 5 0 ml刻度。将量简放入 3 0 士1 c恒温水浴中， 当悬浮液 温度达3 0 c时， 将徽简盖好， 拿起量简先轻轻摇起沉淀物， 然后有规律地以量简中部为中心上下颇倒 i s 个来回 ( 约3 0 s ) , 使呈均匀的悬浮液。 it 筒仍放 人恒温 水浴中， 打开盖子， 静置3 0 m i n 后， 用吸管以 抽气 法将量简上部9 / 1 0 的悬浮液抽出( 在1 5 - 3 0 s 内完成) 。 抽液 过程中吸液管应依 附简壁随液面下降而 下降， 勿使下部沉淀物 搅动， 量简内 剩下1 / 1 。 部分， 按4 . 3 . 1 生 物效价测定法测定毒力。 4 . 3 . 7 . 3 计算 根据式( 1 4 ) 计算悬浮率: 悬浮率( %) 二 1 1 1 ( c一 q) c (1 4 ) 可湿性粉剂样品: 所取样品的毒力( i u ) 27 0 火 2 5 0 悬浮剂 样品 : 所取样品的毒力( i u) 50 x2 .5( 1 6 ) 式中: q 留在量筒的2 5 m l悬浮液的毒力( i u ) 本法允许偏差， 但三次重复测定结果误差不得超过 2 0 %e 验 收规则 采样 按g b 1 6 0 5 进行。 生产单位的质量检验部门按照产品标准进行检验， 生产单位 应保证出厂产品 均 5 l y / t 1 1 8 1 一 9 5 符合本标准第 3 章质量要求的指标。 5 . 2 供需 双方对产品质量如有争议， 可协商进行复查。如再有净议， 需要仲裁时， 可由 双方协商选定 仲 裁机构。 仲裁时， 应按照本标准 规定的验收方法进行仲裁分析， 所需费用由责任一方负担。 6 标志、 包装、 运输和贮存 6 . 1 标志 包装应符合g b 3 7 9 6 规定， 在包装容器上应标明注册商标、 产品名称、 生产日 期、 批号、 净重、 等级、 保 存 期、 农 药 登 记 证 号和 标 准 编 号、 贮 运 标志 、 厂 名、 厂 址， 包 装内 附 产品 合 格 证、 使 用 说明 韦， 小 包 装 应 印有条码。 62 贮存 6 . 2 . 1 粉剂和可湿性粉剂 置于通风干燥处， 严防潮 湿及日 晒。 粉剂和可湿 性粉剂保存期2 年。 在 正常贮运条件下1 年内 产品 毒力效价不低于3 . 3 条 指标的8 0 %; 2 年内产品毒力效价不低于3 . 3 条指标的7 0 %, 6 . 2 . 2 悬浮剂 在正常贮运条件下 有效期为1 年， 在1 年内产品 毒力效价不低于3 . 3 条指标的6 0 %, 6 . 3 运输 防 雨、 防潮、 防日 晒， 小心轻放， 不能与化学杀菌剂、 酶制剂混运。 苏云金芽抱杆菌制剂各种剂型对 人、 畜均安全。 l y / t 1 1 8 1 一 9 5 附录a 生物测定 结果运算的 计算机程序 ( 参考件) 1