暗纹东方鲀.pdf

i c s6 5 1 5 0 b5 2 圆亘 中华人民共和国国家标准 g b t2 7 5 2 0 2 01 1 2 0 1 1 - 1 1 - 2 1 发布 暗纹东方纯 o b s c u r ep u f f e r 2 0 1 2 0 3 0 1 实施 宰瞀鹳紫瓣警瓣瞥鐾发布中国国家标准化管理委员会仪1 9 前言 g b t2 7 5 2 0 2 0 1 1 本标准按照g b ti 1 2 0 0 9 给出的规则起草。 本标准由农业部提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会( s a c t c1 5 6 s c1 ) 归口。 本标准起草单位：江苏中洋集团股份有限公司、上海海洋大学。 本标准主要起草人：钱晓明、李家乐、赵金良、秦桂祥、卢玉平、郭正龙。 1 范围 暗纹东方纯 g b t2 7 5 2 0 - - 2 0 11 本标准给出了暗纹东方纯( t a k i f u g u f a s c i a t u s ) 的主要形态结构特征、生长与繁殖、生化遗传特性 和检测方法。 本标准适用于暗纹东方纯的种质检测与鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本( 包括所有的修改单) 适用于本文件。 g b t1 8 6 5 4 1养殖鱼类种质检验第1 部分：检验规则 g b t1 8 6 5 4 2 养殖鱼类种质检验第2 部分：抽样方法 g b t1 8 6 5 4 3 养殖鱼类种质检验第3 部分：性状测定 g b t1 8 6 5 4 1 2 养殖鱼类种质检验第1 2 部分：染色体组型分析 3 名称与分类 3 1 学名 暗纹东方纯t a k i f u g u f a s c i a t u s ( m c c l l a n d ，1 8 4 4 ) 。 3 2 分类地位 纯形目( t e t r a o d o n t i f o r m e s ) ，纯科( t e t r a o d o n t i d a e ) ，东方纯属( t a k i f u g u ) 。 4 主耍形态结构特征 4 1 外形特征 4 1 1 形态 体呈亚圆筒形，前端钝圆，向后渐狭小，尾柄略为侧扁。胸鳍宽短，无腹鳍，背鳍后位，与臀鳍相对， 同形，尾鳍后缘稍圆形。口小，端位。体棕褐色，体侧下方具淡黄色带，腹面白色。体色和条纹随体长不 同而有变异。背部具不明显暗褐色横纹4 条6 条，横纹之间具白色狭纹3 条5 条。胸鳍后上方体侧 处具1 圆形黑色大斑，边缘白色。背鳍基部具1 长圆形黑色大斑。胸鳍基底外侧和里侧常各具1 黑斑。 胸鳍、背鳍、臀鳍黄棕色，尾鳍后端灰褐色。头部及体背、腹面均被小刺，背刺区与腹刺区在眼后部相连。 吻侧、鳃孔后部体侧及尾柄光滑无刺。暗纹东方纯的外形见图1 。 囤1 睹纹东方钝外彩 42 可敬性状 42 1 背鲭鲭式d i5 i8 。 4 22 臀鳍鳍式：a l3 1 6 。 4 23 胸鳍鳍式：p 】6 1 8 ； 43 可量性状 暗纹东方鲢一i 蜒性状比例值见表1 。 寰1暗纹东方蛀可量性状比例值 * f - # l 奉k k女k 自k 44 内部特征 4 41 齿 颌与齿愈合，i 一、f 各1 对板状齿。 4 42 脊椎骨 脊椎骨数目为：2 l 块2 , t 块， 5 生长与繁殖 51 生长 捧k 与体重关系参见附泶a 。 52 繁殖 52 1 性成熟年龄 雌鱼性成熟年龄3 龄4 龄雄鱼性成熟q 二龄2 龄3 龄 5 22 产卵特点 暗纹东方纯为一次产卵型鱼类。绝对怀卵最l0 1 0 ：粒50 1 0 。粒。长江中下游地区产卵期 在4 月上旬至6 月下旬，5 月为盛期。 5 23 卵子特征 粘性卵，淡黄色半透明，圆球形，卵径09 1im m 卵膜厚，有弹睦，具油球- 附着在基质上 6 遗传学特性 6 1 细胞遗传掌特性 体细胞染色体数为：2 n = 4 4 。核型公式：1 0m - - 6s m - - 8s t + 2 0t 。染色体组型见图2 n一 b可 a 4 矗- a 一 一 一 _ + 囤2 暗纹东方纯染色体组型 62 生化遗传学特性 肌组4 1 乳随脱氧临( ii ) h ) _ l i ii 畸电淋【晰吣煳s 图3 暗纹东方纯肌肉乳酸脱氢酶( l d h ) 同工酶电泳图谱殛扫描围 g b t2 7 5 2 0 - - 2 0 1 1 7 检测方法 7 1 抽样方法 按g b t1 8 6 5 4 2 的规定执行。 7 2 年龄的鉴定 采用脊椎骨年龄鉴定法和鳃盖骨年龄鉴定法。 7 2 1 脊椎骨年龄鉴定法 7 2 1 1 取材 取靠近头部的脊椎骨5 块左右。 7 2 1 2 处理与观察 处理与观察步骤如下： a ) 将去肉脊椎骨置于水中煮沸5r a i n ； b ) 剔弃脊椎骨附着的脂肪和杂物； c ) 3 氢氧化钾( k o h ) 溶液浸泡4 8h ， d ) 水洗烘干； e ) 用解剖镜观察锥体中央斜凹面上的轮纹，以此确定鱼的年龄。 7 2 2 鳃盖膏年龄鉴定法 7 2 2 1 取材 取出新鲜鱼体。 7 2 2 2 处理与观察 处理与观察步骤如下： a ) 用开水烫1 次2 次； b ) 洗净、去除附着物； c ) 浸于甘油中1 0m i n 1 5m i n ，然后加热到甘油沸点，骨片即变成乳白色； d ) 用解剖镜观察白色宽层与暗黑色窄层组成的年轮，以此确定鱼的年龄。 7 3 主要形态结构特征测定 按g b t1 8 6 5 4 3 的规定执行。 7 4 细胞遗传学特性的检测 按g b t1 8 6 5 4 1 2 的规定执行。 7 5 生化遗传学特性的检测 7 5 1 样品的采集与制备 取活体暗纹东方纯背部肌肉1g ，用0 7 生理盐水清洗，加入3 的辅酶i ( n a d ) 溶液3m l ，置 4 g b t2 7 5 2 0 - - 2 0 1 1 匀浆器中匀浆，将匀浆液于4 、1 20 0 0r m i n 离心3 0m i n ，取上清液，重复以上离心过程至上清液 澄清。 7 5 2 聚丙烯酰胺凝胶制备 将混匀的4 聚丙烯酰胺凝胶配方溶液，立即灌注到凝胶模具中，聚合反应结束后，取出凝胶，放在 保湿盒内备用。4 聚丙烯酰胺凝胶配方溶液及其制备见附录b 中的b t 7 5 3 电泳分离 电极缓冲液为t c 电极缓冲液，配制方法见附录b 中的b 2 。 预电泳；将预先制备的聚丙烯酰胺凝胶放在冷却板上，在5 0m a 电流下，电泳3 0r a i n 。 前电泳：预电泳结束后，用微量加样器在凝胶的点样槽中加入8 “l 的样品，在2 5m a 电流下， 电泳1 0r a i n 。 正式电泳：在电压2 7 5v 下连续电泳2h 。 7 5 4 染色 电泳结束后，取出聚丙烯酰胺凝胶，放人预先配好并在3 7 恒温箱中保温的染色液中染色。乳酸 脱氢酶( l d h ) 同工酶的染色液配制见附录b 中的b 3 。 8 检验规则与结果判定 按g b t1 8 6 5 4 1 的规定执行。 g b x2 7 5 2 0 - - 2 0 11 6 附录a ( 资料性附录) 养殖暗纹东方纯体长与体重关系 体长与体重关系见式( a 1 ) ： w 一0 0 4 36 l 29 5 16 ( r 2 0 9 4 56 ) 式中： w 鱼体体重，单位为克( g ) ； l 鱼体体长，单位为厘米( c m ) o b 1 聚丙烯酰胺凝胶 附录b ( 规范性附录) 乳酸脱氢酶( l d h ) 同工酶电泳分析溶液制备 b 1 1 各种凝胶溶液配方 各种凝胶溶液配方见表b 1 。 表b 1 各种凝胶溶液配方 g b t2 7 5 2 0 - - 2 0 1 1 溶液名称配制方法 三羟甲基氨基甲烷( t r i s ) 3 0 2 85g ，用柠檬酸( c i t r i ca c i d ) 调至 t c 制胶缓冲液 p h8 0 ，蒸馏水定容至1l 丙烯酰胺( a r c ) 9 8g ，n ，n - 亚甲基双丙烯酰胺( b i s ) 2g ，用蒸馏水溶 a r c b i s 液 解并定容到5 0 0m l 2 5 t e m 功 四甲基乙二胺( t e m e d ) 2 5m l ，加人7 5m l 蒸馏水 1 0 a p s过硫酸胺( a p s ) 0 1g ，溶解于1m l 蒸馏水中 b 1 24 聚丙烯酰胺凝胶配方 4 聚丙烯酰胺凝胶配方见表b 2 。 表b 24 聚丙烯酰胺凝胶配方 溶液量 溶液名称 m l t c 制胶缓冲液1 4 7 a r c b i s 液 1 3 2 2 5 t e m e d0 3 1 0 a p s 0 6 蒸馏水3 7 5 b 2 电极缓冲液 电极缓冲液配方见表b 3 。 表b 3 电极缓冲液配方 溶液名称配制方法 t c 电极缓冲液 三羟甲基氨基甲烷( t r i s ) 4 8 6 5g ，用柠檬酸( c i t r i ca c i d ) 调p h 至8 0 ， 蒸馏水稀释至l ol g b t2 7 5 2 0 - - 2 0 ” b 3 乳酸脱氢酶( l d i t ) 同工酶染色液 b 3 1 各种溶液配方 各种溶液配方见表b 4 。 表b 4 各种溶液配方 溶液名称配制方法 三羟甲基氨基甲烷( t r i s ) 1 8 1 7 1g ，用盐酸( h c l ) 调至p h9 5 ，蒸馏 1 5m o l i t r i s - h c l 染色缓冲液( p h 一9 5 ) 水定容至1l 1 0 氯化硝基四氮唑蓝( n b t )氯化硝基四氮唑蓝( n b t ) 2 5 0m g ，加入2 5 0m l 蒸馏水 乳酸( l a c t i ca c i d ) 5 6 3m l ，用氢氧化钠( n a o h ) 调至p h7 0 ，蒸馏 1m o l l 乳酸钠 水定容到5 0 0m l b 3 2 乳酸脱氢酶( l d i i ) 同工酶染色液配方 乳酸脱氢酶( l