食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验(1).pdf

g b / t 4 7 8 9 . 7 -2 0 0 3 前言 本标准对g b / t 4 7 8 9 _ 7 -1 9 9 4 食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验 进行修订。 本标准与g b / t 4 7 8 9 . 7 -1 9 9 4 相比主要修改如下: 按照g b / t 1 . 1 -2 0 0 0 对标准文本格式和文字进行修改。 修改并规范原标准中的“ 设备和材料” 。 将本标准的适用范围修改为“ 本标准适用于动物性水产干制品、 腌醉制生食动物性水产品、 即 食藻类食品、 鱼糜制品等水产食品和水产调味品以及食物中毒样品中副溶血性弧菌的检验” 。 本标准自实施之日 起， g b / t 4 7 8 9 . 7 -1 9 9 4 同时废止。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位: 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。 本标准主要起草人: 周桂莲、 付萍、 杨宝兰。 本标准于 1 9 8 4 年首次发布， 1 9 9 4 年第一次修订， 本次为第二次修订。 g b / t 4 7 8 9 . 7 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验 副溶血性弧菌检验 范 围 本标准规定了副溶血性弧菌检验方法。 本标准适用于动物性水产干制品、 腌醉制生食动物性水产品、 即食藻类食品、 鱼糜制品等水产食品 和水产调味品以及食物中毒样品中副溶血性弧菌的检验。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日 期的引用文件， 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日 期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 g b / t 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验染色法、 培养基和试剂 3 设备和材料 3 . 1 冰箱: 0 0c- - 4 0c。 3 . 2 恒温培养箱: 3 6 士1 1c。 3 . 3 显微镜: l o x - l o o x。 3 . 4 均质器或灭菌乳钵。 3 . 5 架盘药物天平: 。 g -5 0 0 g ， 精确至。 . 5 g , 3 . 6 灭菌试管: 1 6 m mx1 6 0 m m , 1 5 m mx1 0 0 m m及相应的试管架。 3 . 7 灭菌刻度吸管: 1 m l ( 具0 . 0 1 m l刻度) , 5 m l , l o m l ( 具0 . 1 m l刻度) 。 3 . 8 灭菌锥形瓶: 5 0 0 ml , 2 0 0 ml . 3 . 9 灭菌玻璃珠: 直径约5 m m, 3 . 1 0 灭菌培养皿: 9 0 m m, 3 . 1 1 1 ml注射器。 3 . 1 2 接种灯和接种环。 3 . 1 3 灭菌手术剪、 镊子等。 3 . 1 4 小白鼠, 1 2 g -1 5 g , 4 培养墓和试剂 4 . 1 氯化钠结晶紫增菌液: 按g b / t 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 3 9 规定。 4 . 2 氯化钠蔗糖琼脂: 按g b / t 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 4 0 规定。 4 . 3 嗜盐菌选择性琼脂: 按g b / t 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 4 1 规定。 4 . 4 3 . 5 %抓化钠三糖铁琼脂: 按 g b / t 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 4 2 规定。 4 . 5 氛化钠血琼脂: 按 g b / t 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 4 3 规定。 4 . 6 嗜盐性试验培养基: 按g b / t 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 4 4 规定。 4 . 7 3 . 5 %抓化钠生化试验培养基: 按g b / t 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 4 5 规定。 4 . 8 革兰氏染色液: 按 g b / t 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中2 . 2 规定。 g b / t 4 7 8 9 . 7 -2 0 0 3 4 . 9 甲基红试剂: 按 g b / t 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 4 规定。 4 . 1 0 靛基质试剂: 按g b / t 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中3 . 1 3 规定。 4 . 1 1 v - p试剂: 按 g b / t 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中 3 . 4 规定。 5 桂验程序 副溶血性弧菌检验程序见图1 . 图 1 6 操作步骤 6 . 1 分离培养: 以无菌操作取检样2 5 g ( m l ) ， 加2 2 5 m l 3 . 5 %灭菌盐水， 用均质器打碎或用乳钵磨 碎， 接种抓化钠琼脂平板和嗜盐菌选择性琼脂平板各一个， 同时取 1 0 m l ， 加人 1 0 0 m l增菌液中， 置 3 7 r 8 h -1 6 h 培养后. 涂上述平板进行分离， 于3 7 0c 1 8 h -2 4 h 培养后取出观察。 6 . 2 挑取上述可疑菌落， 转种3 . 5 %氛化钠三糖铁斜面， 3 7 0c, 2 4 h 观察结果。 6 . 3 涂片镜检: 将三搪铁培养基反应可疑者( 底层变黄葡萄糖产酸不产气， 斜面不变乳糖蔗糖不分解， 有动力， 不产生硫化氢) 进行涂片革兰氏染色镜检形态。 6 . 4 嗜盐性试验: 将上述可疑培养物分别接种于不同浓度的盐脉水中， 3 7 c 2 4 h培养后观察生长情 况， 在无盐和1 0 %以上盐的陈水中不生长， 在7 %盐的陈水中生长良好者进行下列有关试验。 6 . 5 生化试验: 分别接种各类生化培养基， 置3 7 c， 除v - p , 靛基质、 甲基红试验培养4 8 h 后加试剂观 察外， 其他均可在 2 4 h 观察。具体内容见表 1 和表2 e g b / t 4 7 8 9 . 7 -2 0 0 3 表 1 副溶血性弧菌的生化学性状 葡萄糖产酸+ v -p 葡萄糖产气+ 蔗糖一 乳糖一 甘尽醉+ 硫化氢一 一 甲基红+ 一 注: +阳性; 一阴性; +/ 一多数阳性， 少数阴性. 衰 2 副溶血性弧菌主要性状与其他弧菌的鉴别 名称 氧 化 酶 有 萄 糖 产 气 赖 氨 酸 精 氨 酸 鸟 氨 酸 靛 基 质 矍 y 尸 i.藕 甘 褥 醉 矍 阿 拉 伯 胶 搪 甘 露 糖 鼠 李 糖 p 半 乳 糖 普 硝 酸 盐 ait 无 盐 陈 水 盐陈水/ ( %) 681 0 副溶血性弧茵 v . 加r a h a e m o l y t i c u s + a+a+ 溶燕性弧菌 v . a l g i n o l y t i c u s + + + o 粗乱弧菌 v. c h o l e r a e o, + + + + + 十 + + + 十: + + + +d + 十 十 十 + +: 非o , 箱乱弧菌 v. c h o l e r a e n o n o, 十+ +( d )+ +d 拟态弧菌 v. ， 冲mi c u s +d+ d+dd十+ +d 河弧菌 v . 刀 u i a l i s + dd+ d 创伤弧菌 v . u u l u i 户c u s d+d+d+dd dd 梅氏弧菌 v. m e t s c h n i k o u i i + + d 狡利斯弧菌 v. h o l l i s a e v. 由 ms e l a +d+ 十+d 注: 十9 0 写以上阳 性; -9 0 写以上阴