YC-T202-2006烟草及烟草制品多酚类化合物绿原酸、莨菪亭和芸香苷的测定.pdf

I CS 6 5 . 1 6 0X 8 7备案号 :1 7 2 9 6 -2 0 0 6Y口中 华 人 民 共 和 国 烟 草 行 业 标 准Y C/ T 2 0 2 -2 0 0 6烟草及烟草制品多酚类化合物绿原酸、 菌著亭和芸香普的测定T o b a c c o a n d t o b a c c o p r o d u c t s -D e t e r mi n a t i o n o f p o l y p h e n o l s - C h l o r o g e n i c a c i d , s c o p l e t i n a n d r u t i n2 0 0 6 - 0 2 - 2 3发布2 0 0 6 - 0 3 - 0 1实施国 家 烟 草 专 卖 局发 布YC / T 2 0 2 -2 0 0 6oU吕本标准的附录A、 附录B为资料性附录。本标准由国家烟草专卖局提出。本标准由 全国烟草标准化技术委员会( T C 1 4 4 ) 归口。本标准起草单位: 中国烟草总公司郑州烟草研究院、 中国烟草标准化研究中心。本标准 主要 起草 人 : 谢复炜 、 李栋 、 王异、 吴鸣Y C/ T 2 0 2 -2 0 0 6烟草及烟草制品多酚类化合物绿原酸 、 蓖著亭和芸香昔的测定范围本标准规定了烟草和烟草制品中三种多酚( 绿原酸、 蓑营亭和芸香普) 的测定方法。本标准适用 于烟 草和烟草制品。2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期的引用文件， 其随后所有的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究是 否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ，其 最 新 破 本 适 用 于 本 标 准 。 G B / T 5 6 0 6 . 1 卷烟第 I 部分: 抽样 G B / T 1 9 6 1 6 烟草成批原料取样的一般原则( G B / T 1 9 6 1 6 -2 0 0 4 , I S O 4 8 7 4 : 2 0 0 0 , MO D ) YC/ T 3 1烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法原理 用 5 。 %甲醇水溶液萃取烟草和烟草制品中的多酚类化合物， 萃取液经 。 . 4 5 V m滤膜过滤后， 通过高效液相色谱( H P L C ) 定量分析检测其中三种多酚类化合物的含量。4试荆 除特别要求以外， 均应使用分析纯级试剂， 水应为蒸馏水或同等纯度的水去离子水( R 5 Mn,使用前经 。 . 4 5 ri m滤膜过滤)4 . 1 去离子水( R5 Mn) .4 . 2 甲醇: 色谱纯。4 . 3 乙酸: 分析纯4 . 4 绿原酸( 纯度9 7 %) ,4 . 5 蓑若亭( 纯度9 7 ) 。4 . 6 芸香普( 纯度9 7 环) 。4 . 7 萃取溶液: 制备 I +l ( 体积分数) 的甲醇( 4 . 2 ) +水( 4 . 1 ) 溶液。4 . 8 多酚标准溶液4 . 8 . 1 一级标准溶液 在 5 0 mL烧杯中称量 1 0 0 mg左右绿原酸( 4 . 4 ) , 5 m g左右蓖若亭( 4 . 5 ) , 1 0 0 mg左右芸香普( 4 . 6 ) ， 准确至 。 . 1 mg ， 加人约 3 0 ml甲醇( 4 . 2 ) 完全溶解后， 转移到 1 0 0 m工 _ 的容量瓶中， 加萃取溶液( 4 . 7 ) 稀释至刻度( 一级标准溶液贮存条件: 4 冰箱内可保存 3 个月) 。4 . 8 . 2 二级标准溶液 将 1 0 ml一级标准溶液( 4 . 7 . 1 ) 移至 1 0 0 m工容量瓶中用萃取溶液( 4 . 7 ) 稀释至刻度4 . 9 多酚校准溶液: 分别准确移取 1 ml , , 2 m工 、 5 ml二级标准溶液( 4 . 8 . 2 ) , 了 mL , 2 m L , 5 ml一级标准溶液( 4 . 7 . 1 ) 至1 0 0 n i l . 容量瓶中用萃取溶液( 4 . 7 ) 稀释至刻度， 此六个标准溶液以及二级标准溶液( 4 . 8 . 2 ) 为系列标准校准溶液( 多酚校准溶液应在使用前配制， 不能长时间保存) 。YC / T 2 0 2 -2 0 0 65仪器:_;:. :常用实验仪器以及下述各项。分析天平: 感量。 . 1 m g ,高效液相色谱仪: 具有柱温箱、 梯度洗脱功能、 紫外检测器和自 动进样器( 自动进样器为可选件) 。推荐色谱柱: 2 5 0 mmX4 . 6 mm色谱柱， 固定相 C , 。 填料粒度5 K m,水相滤膜: 。 . 4 5 K m超声波振荡器。6分析步骤6 . 1 抽样 按 G B / T 5 6 0 6 . 1和GB / 丁1 9 6 1 6 抽取样品6 . 2烟草样品制备 按 Y C / T 3 1 制备试样， 测定水分含量6 . 3 测定次数 每个样品应平行测定两次。6 . 4 样品分析6 . 4 . 1 样 品萃取 称取 1 0 0 mg 左右样品， 准确至0 . 1 mg ， 置于5 0 ml锥形瓶内， 再准确加人2 0 . 0 mL 5 0 %甲醇+水溶液， 置于超声波振荡器( 5 . 4 ) 超声( 频率: 4 o k Hz ) 提取 2 0 m i n 。取约 2 mL萃取液经 0 . 4 5 W m的水相滤膜过滤 。6 . 4 . 2 高效液相色谱仪 按照仪器说明书对高效液相色谱仪进行操作。较适合的色谱条件如下: 流动相 A: 水+甲醇+乙酸=8 8 +1 0 +2 ( 体积分数) 流动相 B : 水+甲醇+乙酸=1 0 +8 8 +2 ( 体积分数) 柱温: 3 0 0C 柱流量: 1 M I . / mi n 进样体积: 1 0 川 梯度: 。m i n : A: 1 0 0 0 o 1 6 . 5 mi n : A: 8 0 %, B : 2 0 % 3 0 mi n : A: 2 0 %, B : 8 0 % 检测器:检测波长: 3 4 0 n m参比波长: 4 8 0 n m 分析时间约为4 0 m i n . 典型烟草样品色谱图参见图A. 2 .6 . 4 . 3测定 用高效液相色谱测定一系列多酚校准溶液( 4 . 9 ) ， 得到三种多酚的积分峰面积， 用峰面积作为纵坐标， 多酚浓度作为横坐标分别建立三种多酚的校正曲线。对校正数据进行线性回归( r0 . 9 9 ) 。然后测定烟草萃取样品， 从样品中多酚的峰面积计算每一个烟草萃取样品中三种多酚的浓度( m g / mL ) ,结果计算以干基计的三种多酚的含量， 按式( 1 ) 计算:c义 2 0- X ( 1一 w ). . . . . . . . . . . . . . 。 ( 1 )YC / T 2 0 2 -2 0 0 6式 中:P 每克试样的多酚含量， 单位为毫克每克( mg / g ) ; c 萃取样品中多酚的浓度， 单位为毫克每毫升( m g / m L ) ;2 0 萃取溶液体积， 单位为毫升( ML ) ;m试样的质量， 单位为克( 9 ) ;w试样的水分百分含量以两次测定的平均值作为测定结果， 结果精确至0 . 0 1 mg / g ,8精密度 、 回收率和 检出限本方法的精密度、 回收率和检出限试验研究结果参见表B .9测试报告 测试报告应包含采用的方法和得到的结果( mg / g ) 。应分别列出每种多酚的含量。报告还应包含样品信息和本方法未规定的、 或是选择性的操作条件， 以及可能对结果产生影响的其他情况。YC / T 2 0 2 -2 0 0 6 附录A( 资料性附录)色 谱 图 示 例A. 1 多酚校准溶液( 3 - ) 色谱图， 见图A . 1 0N o m .7060阳40加201007 . 5 1 0 1 2 . 5 1 51 7 51 一 绿 原 酸 ;2一 食若亭; 3 芸香普。 图 A . 1 多酚校准溶液( 3 # ) 色谱图A . 2 典型烟草样品中多酚色谱图， 见图 A . 2 e1绿原酸;2 - - 蓑若亭;3 芸香普。图 A . 2 典型烟草样品中多酚色谱图YC / T 2 0 2 -2 0 0 6 附录B ( 资料性附录)本方法的精密度试验研究结果本方法的精密度、 回收率和检出限试验研究结果， 见表 B . 1 0 表 B . 1 本方法的精密度试验研究结果多 酚低 浓 度中 浓 度高 浓 度变异系数/ ( %)检 出 限 /( mg / g )加 人 量 /( m g / g )回收 率/ ( %)加 人 量 /( m g / g )回收 率 / ( % )加 人 量 /( mg / g )回 收 率 / ( % )绿 原 酸0 . 5 01 05 . 91 . 2 51 0 0 . 72 . 5 09 9 . 21 . 8 50 . 0 2 8蓑 若 亭0 . 5 09 4 . 11 2 51 0 4 . 92 . 5 01 0 3 . 41 . 0 80 . 0 1 6芸 香 普0 . 5 01 0 8 .，1 . 2 51 0 3 . 32 . 5 01 0 2 . 22 . 0 50 . 0 2 2YC / T 2 0 2 -2 0 0 6参考文献 1 左天觉著， 朱尊权等译.烟草的生产、 生理、 生物化学 M口 . 上海: 上海远东出版社， 1 9 9 3 . 2 C h o t in u c h i t , P . ， a n d S . v o r a b h l e u k . . S t u d i e s o n P h e n o l i c C o m p o u n d s i n T h a i F l u e - c u r e d T o b a c - c o . T h a i j . A g r . S c i . 1 9 8 6 , 1 9 : 1 4 7 - 1 5 4 . 3 S c h l o t z h a u e r , W. S . ， R . M. Ma r t i n , M. E . S n o o k , a n d R . E . Wi l l i a ms o n . P y r o l y t i c s t u d i e s o n t o b a c c o l e a f c o n s t i t u e n t s t o t h e f o r m a t i o n o f s m o k e c a t e c h o l s . T o b . S c i . 1 9 8 1 , 3 0 : 3 7 2 - 3 7 4 .仁 4 He c h t , S . S . ， S . C a r me l l a , H. Mo r i , a n d D . Ho f f ma n n . A s t u d y o f t o b a c c o c a r c i n o g e n e s i s . X X . R o l e o f c a t e c h o l a s a m a j o r c o c a r c i n o g e n i n t h e w e a k l y a c i d i c f r a c t i o n o f s mo k e c o n d e n s a t e J . Na t l . Ca n c e r I n s t . 1 9 8 1 , 6 6: 1 6 3 - 1 6 9 . 5 We s t o n , T . J . . S t u d i e s o n t h e s y n t h e s i s o f c h l o r o g e n i c a c i d i n t o b a c c o l e a v e s d u r i n g f l u e - c u r i n g . To b . S c i. 1 9 6 9 , 1 3: 8 2 - 8 5 6 Wr i g h t , H. E ， J r . ， W. W. b u t t o n , a n d R . C . B e r r y , J r . 1 S o l u b l e b r o w n in g r e a c t i o n p ig me n t s o f a g e d b u r l e y t o b a c c o . I . T h e n o n d i a l y z a b l e f r a c t i o n . A r c h . B io c h e m . B i o p h y s . 1 9 6 0 , 8 6 : 9 4 - 1 0 1 . 7 G l e n n i e , C . W. ， a n d J . G. . N e l . T h e p o l y p h e n o l o f f l u e- c u r e d t o b a c c o . A g r o c h e mo p h y s i c a 1 9 7 3 , 5: 7 5 - 7 6 . 8 C o u r t , W. A . h i g h - p e r f o r ma n c e r e v e r s e - p h a s e l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y o f n a t u