化学发光微粒子免疫分析法与酶联免疫法测定乙肝标志物的比较.pdf

实用医技杂志2 0 0 8年1月第1 5卷第3期J P MT,J a n u a r y . 2 0 0 8 , V o l . 1 5 , N o . 3 参考文献: 1 H o w e l l S J , S e a r Y M, Y e a t e s D , e t a l . R i s k f a c t o r s f o r c a r d i o v a s c u l a r d e a t ha f t e re l e c t i v es u r g e r yu n d e rg e n e r a l a n a e t h e s i a J . B rJ A n a e s t h , 1 9 9 8 , 8 0 : 1 4 - 9 . 2 李玟,吴宗贵.高血压患者冠心病危险因素的临床分析 J .第二 军医大学学报, 1 9 9 8 , 1 9 : 1 6 2 - 1 6 4 . 3 A l l m a nK G , Mu i rA D , H w e l l S J , e t a l . R e s i s t a n t h y p e r t e n t i o n a n d p r e o p e r a t i v es i l e n t m y o c a r d i a l i s c h e a m i a i n s u r g i c a l p a t i e n t s J . B r J A n a e s t h , 1 9 9 4 , 7 3 : 5 7 4 - 5 7 8 . 4 R e i zS . My o c a r d i a l i s c h e a m i a a s s o c i a t i o n w i t h g e n e r a l a n e s t h e s i a J . B r J A n a e s t h , 1 9 8 8 , 6 1 : 6 8 - 8 4 . 5 S t o n eJ G , F o e x P , S e a r J W, e t a l . My o c a r d i a l i s c h e a m i a i n u n t r e a t e d h y p e r t e n s i v ep a t i e n t s : e f f e c t o f a s i n g l e s m a l l o r a l d o s e o f a b e t a - a d r e n e r g i c b l o c k i n g a g e n t J . A n e s t h e s i o l o g y , 1 9 8 8 , 6 8 : 4 9 5 - 5 0 0 . 6 F a l a h a t i A , S h a r k e y S W, C h r i s t e n s e nD , e t a l . I m p l e m e n t a t i o n o f s e r u m c a r d i a ct r o p o n i n a sm a r k e rf o rd e t e c t i o no fa c u t e m y o c a r d i a l i n f a r c t i o n J , A mH e a r t J , 1 9 9 9 , 1 3 7 : 3 3 2 - 3 3 7 . 7 张 丽,王士雯,赵玉生.心肌钙蛋白在心血管疾病中的应用 J . 心血管病学进展, 1 9 9 7 , 2 5 : 2 9 8 - 3 0 1 . 8 A o k i T , T a n i i M, T a k a h a s h i K , e t a l . C a r d i o v a s c u l a r c h a n g e s a n d p l a s mac a t e c h o l a m i n el e v e l sd u r i n gl a p a r o s c o p i cs u r g e r J . A n e s t h A n a l g , 1 9 9 4 , 7 8 : 8 - 1 0 . 9 陈绍详,曾祥龙.手术麻醉对围术期血清激素和血糖的影响 J .第 四军医大学学报, 1 9 9 7 , 5 : 4 7 4 - 4 7 6 . 1 0 D e r b y s h i r eD R , C h m i e l e w s k i A , F e l l D , e t . a l . p l a s m a c a t e c h o l a m i n e r e s p o n s e t o t r a c h e a l i n t u b a t i o n J , B r J A n a e s t h , 1 9 8 3 , 5 5 : 8 5 5 - 8 6 0 . 1 1 s t u h m e i e r K D , Ma i z e r B , C i e r p k a J , e t a l . S m a l l o r a l d o s e o f c l o n i d i n e r e d u c et h e i n c i d e n c e o fi n t r a o p e r a t i v em y o c a r d i a l i s c h e a m i a i n p a t i e n t sa v i n gv a s c u l a rs u r g e r y J . A n e s t h e s i o l o g y , 1 9 9 6 , 8 5 ( 4 ) : 7 0 6 - 7 1 2 . 1 2 尹翠芬, 陈明. 受体阻滞剂对急性心肌梗死及梗死后心性猝 死的影响 J .心血管病学进展, 1 9 9 9 , 2 0 : 5 8 - 5 9 . 1 3 U r b a nMK , Ma r k o w i t zS M, G o r d o n MA , e t a l . P o s t o p e r a t i v e p r o p h y l a c t i c A d m i n i s t r a t i o n o f - A d r e n e r g i c B l o c k e r s i n P a t i e n t s a t R i s k f o r m y o c a r d i a l i s c h e m i a J . A n e s t h A n a l g , 2 0 0 0 , 9 0 : 1 2 5 7 - 1 2 6 1 . 1 4 J a k o b s e nC J , B l o mL . E f f e c t o fp r e - o p e r a t i v e m e t o p r o l o l o n c a r d i o v a s c u l a r a n dc a t e c h o l a m i n er e s p o n s e a n d b l e e d i n g d u r i n g h y s t e r e c t o m y J . E u r J A n a e t h e s i o l , 1 9 9 2 , 9 : 2 0 9 - 2 1 5 . 1 5 王萍, 房锈生.心肌钙蛋白与心内直视手术中的心肌损伤 J . 国外医学.麻醉学与复苏分册, 1 9 9 9 , 2 0 : 2 8 3 - 2 8 6 . (收稿日期:2 0 0 7 - 1 2 - 2 1 ) 化学发光微粒子免疫分析法与酶联免疫法 测定乙肝标志物的比较 谭璐 (武汉市一医院, 湖北武汉4 3 0 0 2 2) 摘要目的:比较化学发光微粒子免疫分析法 (C MI A) 与酶联免疫 (E L I S A) 两种方法检测乙肝病毒免疫标志 物的优缺点。方法:用上述两种方法的检测试剂及仪器对2 0 0例临床血清标本分别进行检测, 然后进行结果分析。结 果: E L I S A法和C MI A法对乙肝表面抗原的检测灵敏度均能达到0 . 1 I U / m l。H B s A g,H B s A b,H B e A g及H B e A b的检测 相互符合率均在9 5 %以上,但对核心抗体的检测,两者符合率为8 7 . 5 %。结论:两种方法的检测性能相差不大, 但 C MI A法检测血清乙肝标志物的自动化程度比E L I S A法高, 并能定量检测H B s A g和H B s A b, 可动态观察疗效和监测 病情。 关键词化学发光微粒子免疫分析法; 酶联免疫; 乙型病毒性肝炎标志物 中图分类号 R 5 1 2 . 6 + 2 文献标识码 A文章编号 1 6 7 1 - 5 0 9 8 ( 2 0 0 8 ) 0 3 - 0 2 9 4 - 0 2 A b s t r a c t : O b j e c t i v eT oc o m p a r e t w od e f e r e n t a s s a y s t os e e t h e i r a b i l i t i e s i nd e t e c t i n gh e p a t i t i s Bm a r k e r s . Me t h o d s B y u s i n g C h e m i l u m i n e s c e n c e Mi c r o p a r t i c l e I m m u n o A s s a y ( C MI A ) a n dE L I S A,2 0 0 s e r u ms a m p l e s w e r e t e s t e d f o r h e p a t i - t i s Bm a r k e r s , t h e n t h e r e s u l t s w e r e a n a l y z e d . R e s u l t s T h e t w o a s s a y s b o t h c a n d e t e c t a s l o wa s 0 . 1 I U / m l o f H B s A g . T h e c o - i n c i d e n c e s o f t h e t w o m e t h o d s i n d e t e c t i n g H B s A g , H B s A b , H B e A g , a n d H B e A b a r e n o r m a l l y a b o v e 9 5 %, b u t f o r H B c A b , t h e c o i n c i d e n c e w a s 8 7 . 5 %. C o n c l u s i o nT h e r e w e r e n o t m u c h d i f f e r e n c e a m o n g t h e s e t w o m e t h o d s r e g a r d i n g t h e i r a b i l i t i e s i n d e t e c t i n g h e p a t i t i s Bm a r k e r s . T h e d e g r e e o f a u t o m a t i o n d e t e r m i n e d b y C MI Aa r e h i g h e r t h a n t h a t o f E L I S A,a t t h e s a m e t i m e t h e c u r a t i v e e f f e c t o f p a t i e n t s i s b e e a s i l y d y n a m i c o b s e r v e da n dt h e s t a t e o f i l l n e s s i s a l s ob e e a s i l yi n - s p e c t e db yt h e m e t h o d o f C MI A . K e yw o r d s : C h e m i l u m i n e s c e n c e Mi c r o p a r t i c l e I m m u n o A s s a y ; E L I S A; H e p a t i t i s Bm a r k e r s 2 9 4 实用医技杂志2 0 0 8年1月第1 5卷第3期J P MT,J a n u a r y . 2 0 0 8 , V o l . 1 5 , N o . 3 中国是乙型病毒肝炎的高发国家,根据流行病学调查, 人群发生率较高, 表面抗原携带率约为1 5 % 1 , 乙肝的实验诊 断对于其治疗及预防有重要参考意义。 自二十世纪七十年 代以来, 许多高灵敏度的测定方法应用于临床免疫学检测, 其 中酶联免疫法应用最广。近年来发展起来的化学发光微粒子 免疫分析法(C MI A) 是灵敏度非常高的方法, 解决了低浓度 H B s A g的检测问题, 现将两种方法对乙肝标志物的检测作一 比较。 1材料与方法 1 . 1材料及主要仪器收集2 0 0例检测乙肝标志物的静脉血 样离心, 分离出血清待测;E L I S A法测定乙肝“ 两对半” 试剂盒 由 上 海 实 业 科 华 生 物 技 术 有 限 公 司 生 产 , 使 用 美 国 B i o - r a d 5 5 0型酶标仪和1 5 7 5型洗板机。化学发光微粒子免疫 分析法 (C MI A)采用美国雅培全自动酶免分析仪A R C H I - T E C T - i 2 0 0 0及其配套试剂产品;乙肝五项标志物的定值质控 血清购自中国卫生部临床检验中心。 1 . 2方法E L I S A法按产品说明书进行 主要步骤有: 加样、 孵 育、 洗板、 加酶或底物、 显色、 比色。其中H B c A b测定的样本 经1:3 0稀释。C MI A法为全自动系统, 设计好标本位置、 检测 项目, 按开始键即可。 1 . 3结果判断E L I S A法以标本O D值与临界O D值的比值 ( S / C O ) 1 . 0 0为阳性, H B e A b与H B c A b测定则相反,以 1 . 0 0为阳性。C MI A法中H B s A g与H B s A b为定量法, 用标本 相对光强度(R e l a t i v e L i g h t U n i t sR L U) 与标准曲线比较计算 出浓度。H B e A g、H B c A b以标本R L U与临界值R L U的比值 (S / C O)1 . 0 0为阳性, H B e A b测定则相反, 以1 . 0 0为阳性。 2结果 2 . 1 E L I S A与C MI A法检测低浓度H B s A g的结果( 见表1) 。 表1两种方法对低浓度H B s A g的测定 注:E L I S A法为定性方法。S / C O为标本O D值与临界值O D 值的比值。 2 . 2 E L I S A与C MI A法检测乙肝标志物的结果( 见表2) 。 表2 E L I S A与C MI A法检测乙肝标志物的结果(n = 2 0 0) 2 . 3卫生部定值血清H B s A g室内质控C V值: E L I S A法批内3 %5 %, 批间5 %1 0 %, 而C MI A法批内小于3 %, 批间小 于5 %。 3讨论 3 . 1从灵敏度上来看, 两种方法的差别不大, 都可以测出0 . 1 I U / m l的低浓度H B s A g。 3 . 2E L I S A与C MI A法检测乙肝五项指标的结果中,H B s A g、 H B s A b、H B e A g、H B e A b四项标志物的检出符合率较高, 而 H B c A b的检出符合率则相对较低。从方法学角度看,C MI A 法用顺磁性微粒作为固相载体, 由于颗粒体积小, 表面积大, 扩大了反应面积, 大大提高了检测灵敏度, 所以可检出人群中 低浓度和自然感染获得的乙肝核心抗体。 3 . 3C MI A法由于使用全自动仪器及配套试剂,使人为因素 减至最低, 提高了方法的稳定性和结果的重复性, 使批内差异 与批间差异都较小。而手工E L I S A法由于手工加样、 孵育时 间、 洗板等因素影响则容易导致非特异性反应的发生, 造成结 果的误差。 3 . 4在H B s A g、H B s A b的检测上,C MI A法为定量结果。定量 的H B s A b结果能够对机体是否真正具有抵抗乙肝病毒的免 疫力做出正确评价,避免误导。H B s A b定量在1 0I U / L 1 0 0 I U / L之间的标本,E L I S A结果为阳性, 但此时抗体对H B V 并无中和作用, 仍有感染H B V的危险.只有“ 定量” 在1 0 0 I - U / L以上时才具有抵抗H B V入侵的作用 2 , 因此对乙肝疫苗 免疫力的评价和高危人群预防免疫具