YC-T184-2004烟草及烟草制品烟草特有N-亚硝胺的测定.pdf

I C S 6 5 .1 6 0X 8 7备案号 :1 4 4 0 2 -2 0 0 4Y口中 华 人 民 共 和 国 烟 草 行 业 标 准YC / T 1 8 4 -2 0 0 4烟草及烟草制品烟草特有 N 一 亚硝胺的测定 T o b a c c o a n d t o b a c c o p r o d u c t s -D e t e r mi n a t i o n o f t o b a c c o s p e c i f i c N - n i t r o s o a mi n e s2 0 0 4 - 1 0 - 1 9 发布2 0 0 5 - 0 3 - 0 1实施国家 烟草专卖局发 布Y C / T 1 8 4 -2 0 0 4月 9青本标准的附录 A为资料性附录。本标准由国家烟草专卖局提出。本标准由全国烟草标准化技术委员会( T C 1 4 4 ) 归口。本标准起草单位: 中国烟草总公司郑州烟草研究院。本标准主要起草人: 赵明月、 谢复炜、 胡清源、 王异、 刘克建。YC / T 1 8 4 -2 0 0 4烟草及烟草制品烟草特有 N 一 亚硝胺的测定范围 本标准规定了烟草和烟草制品中四种烟草特有 N亚硝胺 仁 N 一 亚硝基降烟碱( N N N) , N 一 亚硝基新烟碱( N A T) , N 一 亚硝基假木贼碱( NA B ) , 4 - ( 甲基亚硝胺基) - 1 - ( 3 - 毗吮基) - 1 一 丁酮( N NK ) 的测定方法。 本标准适用于烟草和烟草制品。2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件， 其随后所有的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 G B / T 5 6 0 6 . 1 卷烟第 1 部分: 抽样 G B / T 1 9 6 1 6 烟草成批原料取样的一般原则( G B / T 1 9 6 1 6 -2 0 0 4 , I S O 4 8 7 4 : 2 0 0 0 , MO D ) Y C / T 3 1 烟草及烟草制品 试样的制备和水分测定烘箱法3 术 语和定义下列术语和定义适 用于本标 准烟草特有 N 一 亚硝胺t o b a c c o s p e c i f i c N - n i t ros o a mi n e s ( T S N A s )仅在烟草和烟草制 品中存在 的 N一 亚硝胺4 原 理 用二氯甲烷的碱性溶液萃取烟草和烟草制品中的T S N As ， 萃取液经碱性氧化铝层析柱纯化， 通过气相色谱一 热能分析联用仪( G C-TE A) 定量分析检测其中四种 T S N As 的含量。5 试荆 除特别要求以外， 均应使用分析纯级试剂， 水应为蒸馏水或同等纯度的水。5 . 1 二氯甲烷， 色谱纯。5 . 2 甲醇， 色谱纯5 ， 3 无水硫酸钠， 分析纯。5 . 4 1 0 % 氢氧 化钠溶液， 分析纯。5 . 5 碱性氧化铝， 层析用( 2 0 0目3 0 0目) 。5 . 6 内标溶液: 配制浓度为4 0 0 0 n g / m L的 N 一 戊基一 ( 3 一 甲基毗咤基) 亚硝胺溶液作为内标溶液， 以二氯甲烷( 5 . 1 ) 为溶剂5 . 7 T S NA s 标准系列溶液: 按下列浓度范围配制 T S N As 标准系列溶液， 以二氯甲烷( S . 1 ) 为溶剂， 其中内标浓度为4 0 0 n g / mL。标准溶液应当存放在一2 0 冰箱中， 有效期 6 个月 N NN: 1 0 0 n g / mL , 2 0 0 n g / mL , 5 0 0 n g / m L, l 0 0 0 n g / mL , 2 0 0 0 n g / mL , 5 0 0 0 n g / mL , N AT : 1 0 0 n g / mL , 2 0 0 n g / m l 5 0 0 n g / mL , l 0 0 0 n g / m L, 2 0 0 0 n g / mL , 5 0 0 0 n g / m L ,YC / T 1 8 4 -2 0 0 4N A B: 3 0 n g / m L, 6 0 n g / mL , 1 5 0 n g / m L, 3 0 0 n g / m L, 6 0 0 n g / mL , l 5 0 0 n g / m L。N NK: 1 0 0 n g / mL , 2 0 0 n g / mL , 5 0 0 n g / mL , l 0 0 0 n g / mL, 2 0 0 0 n g / mL , 5 0 0 0 n g / mL ,6仪翻 常用实验仪器及下述各项:6 . 1 分析天平: 感量 0 . 1 mg .6 . 2 气相色谱仪( 配有热能分析仪检测器) 。6 . 3 色谱柱: 弹性毛细管柱 3 0 mX0 . 3 2 mmX1 K m， 固定液 5 %一 二苯基一 9 5 %一 二甲基聚硅烷。6 . 4 柱前保护柱: 弹性毛细管柱 1 mX0 . 3 2 mmXI K m， 固定液 5 %一 二苯基一 9 5 %一 二甲基聚硅烷。6 . 5 超声波发生器。6 . 6 浓缩仪。6 . 7 玻璃层析柱: 具塞， 内径为2 0 m m， 长度为 5 0 0 m m,7 分析步.7 . 1 抽样 按 G B / T 1 9 6 1 6和 G B / T 5 6 0 6 . 1 抽取样品。7 . 2 烟草样品制备 按Y C / T 3 1 制备 试样， 并测定水分含量。7 . 3 侧定次数 每个样品应平行测定两次。7 . 4 样品分析7 . 4 . 1 样品萃取 称取1 . 0 0 g烟样， 将其放人1 0 0 m L锥形瓶中， 加人1 mL 1 0 0 o 氢氧化钠溶液( 5 . 4 ) 和2 0 m L二抓甲烷溶液( 5 . 1 ) ， 置于超声波发生器( 6 . 5 ) 超声( 频率: 4 0 k Hz ) 提取 2 0 m i n ,7 . 4 . 2 柱层析7 . 4 . 2 . 1 层析柱准备 碱性氧化铝( 5 . 5 ) 在 1 1 0 条件下活化 2h 待用。层析柱( 6 . 7 ) 保持洁净干燥， 先加人 3 0 m L二抓甲烷( 5 . 1 ) ， 将 1 5 g 碱性氧化铝( 5 . 5 ) 经湿法处理后加人到层析柱( 6 . 7 ) 中， 用玻棒搅拌氧化铝赶走气泡。再加人 2 g已烘干的无水硫酸钠， 用 5 0 mL二抓甲烷洗脱层析柱( 6 . 7 ) 。当液面下降至硫酸钠层时关闭层析柱活塞。7 . 4 . 2 . 2层析 将锥形瓶中所有样品加人层析柱( 6 . 7 ) ， 并用5 mL X3 二抓甲烷( 5 . 1 ) 洗涤锥形瓶内壁。洗涤液加人层析柱( 6 . 7 ) 。等液面接近柱头后， 再用 3 0 m L二抓甲烷( 5 . 1 ) 洗脱层析柱( 6 . 7 ) ， 该部分洗脱液不收集。 最后用1 0 0 m L甲醇: 二氯甲烷为8 : 9 2 ( 体积比 ) 溶液洗脱层析柱( 6 . 7 ) ， 收集该部分洗脱液。7 . 4 . 3 洗脱液浓缩 在洗脱液中准确加人 1 0 0 p L内标溶液( 5 . 6 ) ， 在高纯氮气保护吹扫下将其浓缩至 1 m L左右， 转移到 2 mL色谱小瓶中进行GC - T E A分析， 白肋烟和烤烟样品的色谱图示例在附录 A中已给出。7 . 5 G C - T E A分析7 . 5 . 1 气相色谱仪( 6 . 2 ) 条件7 . 5 . 1 . 1 色谱柱( 6 . 3 ) .7 . 5 . 1 . 2 柱前保护柱( 6 . 4 ) ， 在进行 1 0 0次样品分析后需更换。7 . 5 . 1 . 3 程序升温: 初始温度5 0 0 C ， 保持2 m i n ; 1 0 0C / m i n 升至 1 8 0 C ; 保持 1 0 m i n ; 1 0 C / m i n 升至2 3 0 0 C ; 3 0 C / mi n升至 2 6 0 0C; 保持 2 0 mi n . 2YC / T 1 8 4 -2 0 0 47 . 5 . 1 . 4 进样口温度: 2 2 5 -C.7 . 5 . 1 . 5 载气: 氦气， 2 . 5 mL / mi n ,7 . 5 . 1 . 6 进样量2 p L ， 不分流， 不分流时间1 m in ， 吹扫流量5 0 m L / m i n ,7 . 5 . 2 热能分析仪( 6 . 2 ) 条件7 . 5 . 2 . 1 热裂解温度: 5 5 0 0C,7 . 5 . 2 . 2 接口温度: 2 5 0 C .8 结果计算 以干基计的四种丁 S NA s 的含量， 按式( 1 ) 进行计算:fXAXm , X1 0 0A. XnX( 1 0 0一w). . . 。 。 。 。 . . ( 1)式 中:In 每克试样的T S N A s 含量， 单位为纳克每克( n g / g ) ; 子- 一相对校正因子( 由校正曲线求出) ;m, 样品溶液中内标量， 单位为纳克(n g ) ;A-TS NAs峰面积 ;A ， 内标峰面积; n 试样的质量， 单位为克(9 ) ;一试样的水分含量， %。以 两次测定的 平均值作为测定结果， 结果精确至。 . 1 n g / g ,t妞性、 回收率和检出限烟草中四种 T S NA s 侧定的重复性、 回收率和检测限结果见表 1 . 表 1 烟草中四种T S N A s 侧定的，复性、 回收率和检测限结果T S N As重复性( n =5 ) / ( %)回收率八%)检侧限/