研究大蒜素对人胃癌sgc7901细胞生长的影响

1 / 5 研究大蒜素对人胃癌 SGC7901 细胞生长的影响 摘要： 目的 探讨大蒜素 (diallyl trisulfide, allicin)对人胃癌细胞株 SGC7901体外生长的影响。方法 大蒜素处理胃癌细胞株 SGC7901， MTT 法检测 SGC7901 的生长，流式细胞仪检测细胞凋亡率，免疫细胞化学法检测 Ki67 的表达。结果 大蒜素作用于 SGC7901 细胞后，对其增殖表现出了明显的抑制作用，且呈浓度依赖性 ;大蒜素作用于SGC7901细胞 12、 24和 48 h后，细胞凋亡率分别为 2.41%、7.30%和 15.44%，明显高于对照组 (P 关键词： 大蒜素 ;胃癌细胞 ;增殖 ;凋亡 胃癌是最常见的恶性肿瘤之一。以化疗为主的综合治疗是晚期胃癌的主要治疗手段，常用的化疗药物大多既能杀伤肿瘤细胞，又能损伤正常的组织细胞，从而对胃癌患者的总体生存期并无明显改善。因此，在肿瘤化疗过程中对肿瘤细胞最大限度的杀伤，而对正常细胞毒性最低的药物研发越来越引起重视。大蒜素是从大蒜球茎中分离出的一种油状液体，主要成分为二烯丙基三硫，是大蒜素发挥抗癌活性的主要物质 1-2。研究证明大蒜有良好的防癌、抗癌作用 3。本实验将大蒜素作用于人胃 癌细胞 SGC-7901，研究大蒜素对肿瘤细胞的杀伤作用。 2 / 5 1 材料和方法 1.1 材料 胃癌细胞株 SGC7901(中国科学院细胞生物研究所 )，大蒜素注射液 (上海禾丰制药有限公司 )， Ki67 抗体及辣根过氧化物酶 (HRP)标记的第二抗体 (Santa Cruz 公司 )， RPMI 1640 (Invitriogen 公司 )，小牛血清 (杭州四季青公司 )。 1.2 方法 1.2.1 细胞培养 人胃癌细胞株 SGC7901用含 10%小牛血清的 RPMI 1640 培养基，在 37 、 5%CO2 的饱和湿度条件下 培养。 1.2.2 MTT 法检测细胞抑制率 取处于对数生长期的胃癌 SGC7901细胞 ,常规胰酶消化后制成单细胞悬液 ,使细胞密度为 (4 5)107/L; 将细胞接种于 96孔板中 ,每孔 0.1 ml, 在 37 、 5%CO2的饱和湿度条件下培养 24 h，分别加入 0、3、 6、 12、 24 mg/L 的大蒜素，继续培养 48 h,随后每孔加入 5 g/L 的 MTT 20 l, 继续培养 4 h，倾尽上清。每孔加入二甲基亚砜 0.1 ml，摇床上摇动约 15 min 以充分溶解 ,用酶标仪在波长 570 nm 处检测各孔光密度值 (D 值 ),计算细胞生长抑制率。每组实验重复 6次。细胞生长抑制率 =(1-实验组平均 D值 )/空白对照组平均 D 值 100% 。 1.2.3 流式细胞仪检测细胞凋亡率 大蒜素 (3 mg/L)作用于胃癌 SGC7901 细胞 12、 24和 48 h后收集细胞，将收3 / 5 获的各组细胞制成单细胞悬液 ,加入预冷的 70%冰乙醇 ,-20 内固定 24 h,加 RNA 酶 (终浓度为 50 mg/L)37 反应 1 h，再加入碘化丙啶溶液 (质量浓度 100 mg/L)避光染色30 min后，在流式细胞仪上检测胃癌 SGC7901细胞的凋亡率。每组实验重复 5次。 1.2.4 免疫细胞化学法检测 Ki67 蛋白的表达 胃癌SGC7901 细胞的单细胞悬液制备同 1.2.2 方法，将细胞接种于预先放置盖玻片的 24 孔板中 ,放入培养箱中继续培养 24 h，弃去培养液 ,加入含大蒜素 (3 mg/L)培养液继续培养 48 h，弃去培养液 ,用 PBS 冲洗 3 次 ,取出盖玻片 ,放入冷丙酮中固定 20 min。免疫细胞化学染色严格按 SP 试剂盒操作说明书进行。 Ki67蛋白的阳性表达表现为细胞核出现黄色或棕色颗粒。每一个玻片随机选取 5个高倍视野 (400), 在每个视野下随机观察 200 个细胞 ,计算细胞阳性率 。并取 5 个玻片的平均值。 1.3 统计学处理 采用 SPSS 10.0 软件进行数据处理。计量资料以 s 表示，采用单因素方差分析， P 2 Thejass P, Kuttan G. Antiangiogenic activity of Diallyl Sulfide(DAS)J. Int Immunophamacol, XX, 7(3): 295-305. 3 Prasad S, Kalra N, Srivastava S, et al. Regulation of oxidative stress-mediated apoptosis by 4 / 5 diallyl sulfide in DMBA-exposed Swiss mice J. Hum Exp Toxicol,XX,27(1):55-63. 4 Shankar S, Chen Q, Ganapathy S, et al. Diallyl trisulfide increases the effectiveness of TRAIL and inhibits prostate cancer growth in an orthotopic model: molecular mechanisms J. Mol Cancer Ther,XX,7(8): 2328-2338. 5 Hosono T, Hosono-Fukao T, Inada K, et al. Alkenyl group is responsible for the disruption of microtubule network fomation in human colon cancer cell line HT-29 cells J. Carcinogenesis,XX,29(7):1400-1406. 6 Liang WJ, Yan X, Zhang WD, et al. Garlic oil inhibits cyclin E expression in gastric adenocarcinoma cells J. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao,XX,27(8):1241-1243. 7 Thomas RD, Green MR, Wilson C, et al. Diallyl sulfide inhibits the oxidation and reduction reactions of stilbene estrogens catalyzed by microsomes, mitochondria and nuclei isolated from breast tissue of female ACI rats J. Carcinogenesis,XX,25(5): 787-791. 5 / 5 8 Kwon KB, Yoo SJ, Ryu DG, et al. Induction of apoptosis by diallyl disulfide through activation of caspase-3 in human leukemia HL-60 cells J. Biochem Pharmacol,2002,63(1): 41-47. 9 Xiao D, Singh SV. Diallyl trisulfide, a constituent of processed garl