肺癌中pcna的研究

1 / 17 肺癌中 PCNA 的研究 增 殖 细 胞 核 抗 原（ ProliferatingCellNuclearAntigen简称 PCNA）由 Miyachi等于 1978 年在 SLE（系统性红斑狼疮）患者的血清中首次发现并命名，因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名，以后的研究发现 PCNA 与细胞 DNA 合成关系密切，在细胞增殖的启动上起重要作用，是反映细胞增殖状态的良好指标，因此近年来掀起了对 PCNA 研究的热潮，尤其在肿瘤方面 1 3。 1 PCNA 的特点 PCNA 是一种分子量为 36KD 的蛋白质， 在细胞核内合成，并存在于细胞核内，为 DNA 聚合酶 的辅助蛋白。在细胞核内存在可溶性与不溶性两种 PCNA，可溶性 PCNA 在细胞周期各期中均有表达，其量在 DNA 合成过程中不发生明显变化，易被去污剂提取、甲醇破坏；不溶性 PCNA 较稳定，不易被去污剂洗脱、甲醇破坏，这种 PCNA 在 G0 G1 期细胞中无明显表达， G1 晚期，其表达大幅度增加， S 期达到高峰，G2 M 期明显下降，其量的变化与 DNA 合成一致，检测其在细胞中的表达，可作为评价细胞增殖状态的一个指标2 / 17 1,2,4。 2 肿瘤中 PCNA 的研究 肿瘤细胞具有旺盛的增殖活性，而 PCNA 可作为评价细胞增殖状态的指标。因此，国内外在许多肿瘤中进行了PCNA 的研究，涉及 PCNA 与肿瘤发生发展 5,6、分级 1,710、分期 1,10、放疗敏感性 11,12、预后 1,7,8,10,1320、复发和转移 1,21、死亡原因 20、肿瘤标志物 18,22等各个方面的相关性，得出了许多结论，但在某些方面因作者和所研究肿瘤的不同，还存在一些争议，即使尚没有争议的结论，也是从一种或几种肿瘤中得出的，这些结论是否适用于所有肿瘤，仍有待进一步研究。 3 肺癌中 PCNA 的研究 PCNA 在肺癌中的研究也较多，许多作者致力于这方面的探讨，期望找到有意义、有价值的结果，但到现在为止，PCNA 在肺癌中研究所得出的一些结果也同样存在争论 23。 3.1 PCNA 与肺癌发生发展的关系 3 / 17 夏书月等 6在研究肺鳞癌的发生、发展过程中，发现 PCNA 的表达有逐渐增高，阳性细胞数逐渐增多的趋势。在轻、中、重度不典型增生、原位癌及浸润癌中， PCNA 标记指数分别为 12.58.7 、 43.314.9 、 68.19.1 、 74.6 8.2、65.423.6 ，与正常和轻、中度不典型增生的上皮相比，浸润癌、原位癌和重度不典型增生的上皮细胞 PCNA 标记指数明显升高， PCNA 阳性细胞数也明显增多。认为 PCNA 表达为细胞异常增殖的标志，可作为肺鳞癌早期诊断的参考指标。但这仅是在肺鳞癌中的初步探索，且病例数较少，能否作为肺鳞癌早期诊断参考指标，还需进一步验证。 3.2 PCNA 与肺癌分型的关系 有作者 15,24认为 PCNA 在不同类型肺癌中表达不同，鳞癌 PCNA 标记指数平均约为 52，腺癌为 49，大细胞肺癌为 76， 小细胞肺癌为 63。何杰等 25的结果为：肺鳞癌标记指数为 0.510.23 ，腺癌为 0.690.34 。在同一类型不同亚型之间也表达不同。王恩华等 13在 86 例肺腺癌中对各亚型进行分析： PCNA 在细支气管肺泡癌中表达约为 0.220.17 ，腺泡状腺癌中约为 0.360.12 ，大细胞癌中约为 0.670.10 。但也有作者认为 PCNA 的表达仅能反映细胞的增殖状态，与组织学类型无关。 Castellano26、4 / 17 Fontanini14、 Fujii27等支持这种观点。 3.3 PCNA 与肺癌 分化程度的关系 有研究表明： PCNA 表达随肺癌分化程度的增高而减少。王恩华 13在肺腺癌的研究中发现：高分化组最低， PCNA标记指数约为 0.190.10 ，中分化组稍高，约为 0.350.10 ，低分化组最高，约为 0.550.17 ；何杰等 25分别分析了肺鳞癌、肺腺癌中 PCNA 的表达，发现 PCNA 标记指数与肿瘤分级呈正相关， Zhao 等 28在 73 例肺癌中得出了同样结论。可见肺癌中 PCNA 的表达可反映肺癌细胞分化的好坏，预示肿瘤恶性度的高低。这与在许多种其他肿瘤中的研究 发现基本一致。 3.4 PCNA 与肺癌分期的关系 大多数研究表明： PCNA 表达与肺癌分期相关，分期愈晚， PCNA 表达愈高。 Ishida 等 29在 211 例非小细胞肺癌中统计出 、 、 a 、 b 期各期 PCNA 表达平均值分别为30、 24、 40、 50，有逐渐增高的趋势，但 、 期差别不大。王恩华等 13的研究也认为，肺癌中 PCNA 的表达与 N 分期及 M 分期相关，随着分期的增加， PCNA 表达增加。5 / 17 但也有作者持相反意见， Fontanini 等 14在周围型非小细胞肺癌的研究中发现， PCNA 的表达与分期无关， 他们的结果为： T1 期 PCNA 表达值平均约为 18， T2 期约为 10。是否是由于在早期（ 、 ）肺癌中 PCNA 表达受宿主免疫系统抑制，变化不明显，而晚期肺癌因免疫抑制减弱，表达明显增加，还有待继续探讨。 3.5 PCNA 与肺癌血管受侵的关系 Fontanini 等 14在 40 例周围型，淋巴结阴性的非小细胞肺癌 (NSCLC)中发现： PCNA 的表达与血管受侵明显相关，有血管受侵组的 PCNA 表达明显高于无血管受侵组，平均值分别为 40和 10。 Fujii 等 27也发现 PCNA 表达与肺癌血管 受侵明显相关。这可能与 PCNA 高表达者分化差，恶性度高，容易侵蚀血管有关。 3.6 PCNA 与肺癌预后的关系 部分作者认为： PCNA 表达愈低，其生存时间愈长，预后愈好。王恩华等 13分析了 86 例手术切除的肺腺癌病例，发现术后存活 3 年以内组与 5 年以上组之间， PCNA 表达值有显著差异，其标记指数分别为 0.420.20 和6 / 17 0.220.15;Ishida 等 29在 期 NSCLC 中也发现， 5 年生存组中， PCNA( )组生存率明显低于 PCNA( )组； Fujii 等26的研究结果也支持这 种观点。但有相当多的作者认为单凭 PCNA 不 能 评 价 NSCLC 的 预 后 ， Matturri30 、Monraval31、 Castellano26、 Ebina32等各自分别研究了 PCNA 的表达与术后 NSCLC 生存时间的关系，没找到明确的相关性。考虑这是由于肺癌的预后是由多种因素：如病理类型、病理分期、分化、治疗情况、合并症、年龄、身体状况、 PCNA 的表达等综合决定的，单凭 PCNA 这一种因素，难以预测肺癌的预后。 3.7 PCNA 与肺癌复发的关系 Ogawa 等 33在 35 例术后复 发的 期 NSCLC 中发现，PCNA( )组复发时间明显短于 PCNA( )组，中位无瘤生存时间分别为 2.5 年和 4 年，认为 PCNA 可预测 期 NSCLC 术后复发时间的长短。但所研究病例太少，范围狭窄，结果有待进一步证实。 3.8 PCNA 与肺癌其它标志物的相关性 Fontanini 等 14在周围型肺癌中发现 PCNA 表达在7 / 17 DNA 异倍体中明显高于 DNA 整倍体，并与异倍体 DNAS 期分数明显相关， PCNA 表达高的分裂指数高于 PCNA 表达低的。还有研究 13,15,24,28,29,34表明肺癌 中 PCNA 的表达与细胞构成、 DNA 指数、 AgNORs 计数、 Ki67 等相关。这些多为首次报道，不知结果能否重复，若结论能确证，则无论在临床上，还是基础研究中， PCNA 的应用和研究将会更为广泛。 从上可见，肺癌中 PCNA 的研究已深入到了肺癌的各个方面，但在许多方面所得结果还不统一，造成这种结果不一致的原因很多，初步分析包括以下诸多因素： 1)肿瘤本身的因素：肿瘤与肿瘤之间及同一肿瘤不同部位之间，细胞增殖都存在很大的差异 26,36,37，致使 PCNA 表达不均。 2)取材的影响：由于肿瘤内部不同 部位之间 PCNA 表达不均，取材时可能取到高表达区，也可能取到中表达区或低表达区，以致计数结果不能代表整个肿瘤情况。 3)制片过程中的影响因素：组织固定时福尔马林的浓度，固定时间的长短，烤片时温度高低及烤片时间等对 PCNA 的抗原性都有影响。固定液浓度过高，固定时间过长，烤片温度过高，烤片时间过长均会降低 PCNA 的抗原性乃致使抗原性消失 1,2。 4)免疫组化染色过程中的影响因素：免疫组化染色过程中所用抗8 / 17 体不同，所得 PCNA 结果不同；微波炉加热能恢复 PCNA 的抗原性，增强切片的免疫组化染色效果 37 ，使用微波 炉处理切片，能增加检测的数值；另外抗体的滴度，内源性过氧化物酶封闭情况， DAB 显色时间长短，苏木素衬染的背景深浅等均会影响染片的效果，产生假阴性或假阳性，使检测结果发生变化。 5)结果判断的影响：由于每个人所定的阴阳性染色标准不同，选取视野不同，计数细胞总数不同，也造成了一定的人为偏差。 由于实验中存在以上诸多影响因素，不同作者在肺癌中所研究出的结果或在不同肿瘤中所研究出的结果，都难以对照相比，因此 PCNA 的免疫组化研究有必要采用统一的标准，减少实验误差和人为偏差，使彼此的结果具有可比性。 总之，无论在整个肿瘤方面，还是单在肺癌这一方面，PCNA 的研究都是较多的，得出了许多有临床应用价值的结果，但由于肿瘤本身的变异性及人们研究方法的差异，致使所得结果存在一些争议，这有待进一步验证，以便能达到一致的结论，应用于临床，指导临床实践。 作者单位：刘跃平综述 汪楣 沈瑜 殷蔚伯 中国医学科学院肿瘤医院放疗科 北京市 100021 9 / 17 参考文献 1 魏永昆 .增殖细胞核抗原与肿瘤研究进展 .国外医学肿瘤学分册 ,1996;23(增刊 ):47 9 2 黄杰雄 ,黄致 治 .增殖细胞核抗原的研究进展 .国外医学生理病理科学与临床分册 ,1994;14(1):9 11 3 Rochelle L,Garcia MD,Coltrera et al. 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