2、无菌检测系统-杨帆110428

无菌检测系统无菌检测系统 帮助您简化无菌检查的各方面工作帮助您简化无菌检查的各方面工作，解决稳定解决稳定帮助您简化无菌检查的各方面工作帮助您简化无菌检查的各方面工作，解决稳定解决稳定 性和可靠性问题性和可靠性问题 May 2011 Merck Millipore 和无菌检测和无菌检测 ? ?3030年研发应用和生产经验 ?3第3代无菌检测套筒 ?2020种无菌检测套筒?2020种无菌检测套筒 ?4第4代无菌检验泵 无菌检测培养基无菌检测产品分类和应用 法规和客户需求 无菌检测培养基无菌检测产品分类和应用 方法学研究/ 现场验证/ 维护 Steritest EZ 无菌检测套筒 无菌检测无菌检测 维护 无菌检测套筒 Equinox无菌检测泵 密封封装膜 高品质保证 密封封装膜 vs 压合封装膜 法规和客户需求法规和客户需求 什么是无菌检验什么是无菌检验 ? 阳性阳性 / 阴性阴性 测试测试阳性阳性 / 阴性阴性 测试测试 成功成功/失败 测试结果失败 测试结果 代表一组用以表征产品是否符合固有品质的数据代表一组用以表征产品是否符合固有品质的数据 并不是产品放行的唯一性测试并不是产品放行的唯一性测试 法规和客户需求法规和客户需求 制药公司微生物学程序制药公司微生物学程序 无菌检测无菌检测 微生物实验室微生物实验室 在线在线 终产品终产品 无菌检测无菌检测 在线在线 终产品终产品 水系统水系统 环境监控环境监控原料原料 支持数据支持数据 产品放行产品放行 法规和客户需求法规和客户需求 无菌检测无菌检测 限制限制 EPEP ? “即使是对于均一性很好的批次产品，想要检测出低水平污染即使是对于均一性很好的批次产品，想要检测出低水平污染 的可能性也是非常小的的可能性也是非常小的.”的可能性也是非常小的的可能性也是非常小的. ? 一个令人满意的结果也仅能表征在此样品中一个令人满意的结果也仅能表征在此样品中没有微生物污没有微生物污 染在该实验条件下染在该实验条件下 被检出被检出 应在最佳条件下进行验证并实施无菌实验以期得到最应在最佳条件下进行验证并实施无菌实验以期得到最应在最佳条件下进行验证并实施无菌实验以期得到最应在最佳条件下进行验证并实施无菌实验以期得到最 可靠的数据可靠的数据 法规和客户需求法规和客户需求 为什么要进行无菌实验为什么要进行无菌实验 ? 法规和法规和全全球质量体系要求球质量体系要求法规和球质量体系要求法规和球质量体系要求 cGMP 要求要求 ?“对于每批都声称是对于每批都声称是 无菌的无菌的 和和/或或 无热源的无热源的药品药品, 应有应有 恰当的实验室检测以证明符合要求恰当的实验室检测以证明符合要求” 21CFR211.167 (a) EP ?该测试应用于原料该测试应用于原料，制备品或其他根据药典需要保制备品或其他根据药典需要保该测试应用于原料该测试应用于原料，制备品或其他根据药典需要保制备品或其他根据药典需要保 证无菌的物质证无菌的物质.“ 法规和客户需求法规和客户需求 如何做如何做 - EP / USP/ Chp 无菌测试的要求无菌测试的要求 ? 环境环境 培养基培养基? 培养基培养基 ? 测试方法测试方法测试方法测试方法 ? 每种培养基的最小样品量每种培养基的最小样品量 / 最少测试项目最少测试项目 ? 无菌缓冲液无菌缓冲液 ? 方法验证方法验证 : 抑细菌和抑真菌实验抑细菌和抑真菌实验 ? 结果观察和判读结果观察和判读 法规和客户需求法规和客户需求 实施无菌检查的最终目的实施无菌检查的最终目的 避免假阴性避免假阴性 避免假阳性避免假阳性 应在应在最佳条件下最佳条件下进行验证并实施无菌实验进行验证并实施无菌实验 避免假阳性避免假阳性 应在应在最佳条件下最佳条件下进行验证并实施无菌实验进行验证并实施无菌实验 以期得到最可靠的数据以期得到最可靠的数据 法规和客户需求法规和客户需求 从方法学研究转移到常规分析从方法学研究转移到常规分析 . 方法学研究方法学研究方法学研究方法学研究 环境t环境t 无菌性无菌性 : : 培养基培养基 / / SOP SOP 验证验证 完全按照验证过的方完全按照验证过的方 法实施法实施 / SOP/ SOP 完全按照验证过的方完全按照验证过的方 法实施法实施 / SOP/ SOP 无菌性无菌性 : : 培养基培养基 / / 缓冲液缓冲液 促生长实验促生长实验 常规分析常规分析 验证验证 验证实验验证实验 未生长未生长生长生长 假阴性假阴性 的结果的结果 阴性的阴性的 结果结果？ 阳性阳性假阳性的假阳性的 调查原因调查原因 的结果的结果 ? ? 结果结果？ 阳性阳性 的结果 ?的结果 ? 假阳性的假阳性的 结果？结果？ 法规和客户需求法规和客户需求 从方法学研究转移到常规分析从方法学研究转移到常规分析 . 方法学研究方法学研究方法学研究方法学研究 环境t环境t 无菌性无菌性培养基培养基 / / SOP SOP 验证验证 完全按照验证过的方完全按照验证过的方 法实施法实施 / SOP/ SOP 完全按照验证过的方完全按照验证过的方 法实施法实施 / SOP/ SOP 无菌性无菌性 : : 培养基培养基 / / 缓冲液缓冲液 促生长实验促生长实验 常规分析常规分析 验证验证 验证实验验证实验 未生长未生长生长生长 假阴性假阴性 的结果的结果 阴性的阴性的 结果结果？ 阳性阳性 假阳性的假阳性的 调查原因调查原因 的结果的结果 ? ? 结果结果？ 阳性阳性 的结果 ?的结果 ? 假阳性的假阳性的 结果？结果？ 如何在根据药典进行测试的时候 降低假阳性 如何在根据药典进行测试的时候 降低假阳性 / 假阴性的风险？假阴性的风险？ 根据根据 EP/USP 的要求的要求 &Merck Millipore 的建议的建议 ? 环境环境 ? 最小检验量最小检验量 ? 适宜性测试适宜性测试 ? 验证验证/ 抑细菌和抑真菌测试抑细菌和抑真菌测试 ? 方法方法 ? 等等等等 好的方法好的方法好的方法好的方法 (令人满意的结果令人满意的结果 . 在测试条件下在测试条件下) 完全按照验证过的方法实施常规检测完全按照验证过的方法实施常规检测 简化操作简化操作 / 限制操作步骤限制操作步骤简化操作简化操作 / 限制操作步骤限制操作步骤 保护实验过程不受操作者操作偏差影响保护实验过程不受操作者操作偏差影响 无菌检查系统无菌检查系统 : 改革和创新改革和创新 . 使根据药典的无菌检查过程更简便更安全使根据药典的无菌检查过程更简便更安全 无菌检验无菌检验 样品检测样品检测 无菌检验无菌检验 加注培养基加注培养基加注培养基加注培养基 无菌检验无菌检验 培养培养 结论结论 完整的无菌测试可以提供完整的无菌测试可以提供: 产品套装产品套装 (Ei泵泵Stitt EZ 培养基培养基无菌缓冲液无菌缓冲液)? 产品套装产品套装 (Equinox泵泵 ， Steritest EZ, 培养基培养基 ，无菌缓冲液无菌缓冲液) ? 支持活动支持活动 (培训，现场验证培训，现场验证,) Steritest EZ 耗材和耗材和Equinox 泵的组合泵的组合 (SOP模式模式) ? 简化无菌测试的每个方面以简化无菌测试的每个方面以? 简化无菌测试的每个方面以简化无菌测试的每个方面以 使用简便使用简便/优化安全操作优化安全操作/速度速度/清洁和维护清洁和维护 ? 增加连续性和可靠性以增加连续性和可靠性以 安全性安全性 / 重现性重现性 / 重复性重复性 / 可追溯性可追溯性 所有者一些可以降低所有者一些可以降低 ? 假阴性风险假阴性风险? 假阴性风险假阴性风险 ? 假阳性风险假阳性风险 无菌试验的基本操作步骤无菌试验的基本操作步骤 1.环境的去污染环境的去污染 2.实验用品和样品的准备实验用品和样品的准备（取样取样）实验用品和样品的准备实验用品和样品的准备取样取样 和转移和转移 3.试验的准备试验的准备3.试验的准备试验的准备 4.滤膜的预润洗滤膜的预润洗 5 产品的过滤产品的过滤5.产品的过滤产品的过滤 6.冲洗冲洗 7.培养基的加入培养基的加入 8.试验后物品的转移试验后物品的转移试验后物品的转移试验后物品的转移 9.试验区域的清洁试验区域的清洁 10 培养培养10.培养培养 11.读数读数 环境监测环境监测 我们需要知道的我们需要知道的 洁净室（定义）：空气悬浮粒子和微生物浓度，以及温度洁净室（定义）：空气悬浮粒子和微生物浓度，以及温度, 湿度湿度,压力等参数受控的房间或限定空间。压力等参数受控的房间或限定空间。 级区划分以尘埃粒子的数量为标准。（粒径级区划分以尘埃粒子的数量为标准。（粒径=0.5um） 在医药工业中在医药工业中我们以控制微粒和微生物为主要任务我们以控制微粒和微生物为主要任务再再在医药工业中在医药工业中，我们以控制微粒和微生物为主要任务我们以控制微粒和微生物为主要任务。再再 高的级别也无法避免微生物的存在。高的级别也无法避免微生物的存在。 没有一个微生物能够独立存在于空气中没有一个微生物能够独立存在于空气中！(菌团形式或者菌团形式或者没有一个微生物能够独立存在于空气中没有一个微生物能够独立存在于空气中！(菌团形式或者菌团形式或者 吸附在尘埃粒子上，尤其是大于吸附在尘埃粒子上，尤其是大于0.5um的尘埃粒子上。的尘埃粒子上。) 洁净室微生物学评价的目的是为生产控制提供信息洁净室微生物学评价的目的是为生产控制提供信息洁净室微生物学评价的目的是为生产控制提供信息洁净室微生物学评价的目的是为生产控制提供信息。 工业洁净室微生物污染的三个来源： 。 工业洁净室微生物污染的三个来源： 室内空气流动室内空气流动 人员的操作人员的操作 物料的交叉污染物料的交叉污染 20 洁净室环境控制洁净室环境控制 洁净区环境控制与评价原则洁净区环境控制与评价原则 (一一) 实行全面监控实行全面监控 ?空气洁净度空气洁净度表面微生物表面微生物人员卫生状况人员卫生状况?空气洁净度空气洁净度、表面微生物表面微生物、人员卫生状况人员卫生状况 ?分析和评价环境净化设施总体运行状况的指标分析和评价环境净化设施总体运行状况的指标 ?表面微生物监测的重要性表面微生物监测的重要性 ?人员卫生状况考查人员卫生状况考查 实行动态监控实行动态监控实行动态监控实行动态监控 生产过程中，系统验证和清洁消毒后生产过程中，系统验证和清洁消毒后 洁净室环境控制洁净室环境控制 中国中国（年版年版）医药工业洁净环境控制标准医药工业洁净环境控制标准中国中国GMP（2010年版年版）医药工业洁净环境控制标准医药工业洁净环境控制标准 表面微生物表面微生物 级别 浮游菌 级别 浮游菌 cfucfu/m/m3 3 沉降菌 （90mm） 沉降菌 （90mm） f f/4/4小时小时(b) 表面微生物表面微生物 接触碟接触碟 （ 5555） 5 5指手套指手套cfucfu/m/m c cf fu u /4/4小时小时(b)（ 5555mmmm） cfu /碟cfu /碟 指手套指手套 cfu /手套cfu /手套 A A级级1 11 11 11 1A A级级 1 1 1 1 1 1 1 1 B级10555B级10555 C级1005025C级1005025 D D级级2002001001005050D D级级2002001001005050 洁净室环境控制洁净室环境控制 环境微生物监控的特点：环境微生物监控的特点： ?肉眼无法直接识别（需要经过培养识别）肉眼无法直接识别（需要经过培养识别） ?恢复生长率成为监控手段的关键恢复生长率成为监控手段的关键 ?微生物的培养和生长受多种因素影响，具有巨大 的局限性 微生物的培养和生长受多种因素影响，具有巨大 的局限性 水分水分 温度温度 分子氧分子氧分子氧分子氧 pH值值 碳源，氮源碳源，氮源 微量元素微量元素 微量元素微量元素 时间时间 环境中的抑制因素（休眠）环境中的抑制因素（休眠） 23 洁净室环境控制洁净室环境控制 监测方法监测方法 空气微生物监测空气微生物监测-浮游菌和沉降菌孰优孰劣？浮游菌和沉降菌孰优孰劣？ ?沉降菌测试沉降菌测试?沉降菌测试沉降菌测试 ?属于被动式取样法，对空气环境破坏小属于被动式取样法，对空气环境破坏小 ?放置时放置时间间长长，可以做时间段的环境监，可以做时间段的环境监控控 ?取样方法并不能给出定量的数据取样方法并不能给出定量的数据 ?空气浮游菌测试空气浮游菌测试 ?主动式采样法主动式采样法定量且对微生物无选择性定量且对微生物无选择性?主动式采样法主动式采样法，定量且对微生物无选择性定量且对微生物无选择性 ?时间“点”的采样时间“点”的采样 洁净室环境控制洁净室环境控制 沉降菌检测的注意点：沉降菌检测的注意点： ? 摆放位置和高度摆放位置和高度（抑制物质的引入抑制物质的引入）? 摆放位置和高度摆放位置和高度（抑制物质的引入抑制物质的引入） ? 采样本身引入的污染（外表清洁，培养基质量，摆放位采样本身引入的污染（外表清洁，培养基质量，摆放位 置和人员置和人员）置和人员置和人员） ? 培养基的脱水问题（新鲜培养基和摆放时间）培养基的脱水问题（新鲜培养基和摆放时间） 25 洁净室环境控制洁净室环境控制 监测方法监测方法 采样的位置和高度采样的位置和高度 空气浮游菌取样器空气浮游菌取样器 培养基的脱水问题培养基的脱水问题 采样操作对于生产环境的污染采样操作对于生产环境的污染采样操作对于生产环境的污染采样操作对于生产环境的污染 Feller校验的重要性校验的重要性 M Air T MAS-100 NTM Air T Isolator 洁净室环境控制洁净室环境控制 监测方法的补充监测方法的补充 收集采样方法收集采样方法 液体收集法液体收集法（液体撞击器液体撞击器） 压缩气体取样器（针对于氮气、压缩气体取样器（针对于氮气、 压缩压缩空空气气）-ISO8573-7 ? 液体收集法液体收集法（液体撞击器液体撞击器） ? 使用带有缓冲装置的薄膜过使用带有缓冲装置的薄膜过 滤器滤器如如47不锈钢过滤器不锈钢过滤器 压缩气压缩气 滤器滤器：如如47mm不锈钢过滤器不锈钢过滤器 ? 直接撞击法直接撞击法（将压缩空气将压缩空气/空气中空气中 的微生物收集在琼脂平板上的微生物收集在琼脂平板上使其使其的微生物收集在琼脂平板上的微生物收集在琼脂平板上，使其使其 长成肉眼可见的菌落。）长成肉眼可见的菌落。） M Air T IsolatorM Air T Isolator MAS-100 CG 洁净室环境控制洁净室环境控制 监测方法监