FACSCalibur流式细胞仪操作维护规程.doc

FACSCalibur流式细胞仪操作维护规程1. 目的规范流式细胞仪FACSCalibur操作维护规程，正确使用和维护仪器，保证检测工作顺利进行和设备安全。2. 适用范围适用流式细胞仪FACSCalibur的使用操作。3. 职责3.1操作人员按照本规程操作仪器，对仪器进行正常维护，并作使用记录。3.2保管人负责监督仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护和保养。3.3仪器管理人以及科室负责人负责仪器综合管理。4. 操作程序4.1安全操作注意事项和特别提示：4.1.1该仪器必须有专人保管，使用前需通读仪器说明书。4.1.2严格遵守操作规程，如仪器出现故障，应马上停止使用，并立即向保管人、仪器管理人以及科室负责人报告，严格按照单位有关制度实施，不得擅自“修理”，查明原因，处理后仪器保管人应及时做好故障情况及维修记录。4.2设备每日开机程序：4.2.1开启稳压电源、变压器，打开流式细胞仪电源。4.2.2开启其它周边配备电源，如打印机，开启计算机。4.2.3确认鞘液筒有八分满，废液桶近似空的，桶盖是旋紧的；所有管线及管路装置连接通畅，无扭曲、折叠。4.2.4将气压阀方向调在加压位置，用手感觉鞘液桶在慢慢鼓起。4.2.5排除液流过滤器中的气泡。4.2.6等待机器预热5-10分钟后可开始实验。4.3 设备质控程序：4.3.1试剂准备：4.3.1.1 取试剂盒中的Unlabeled试剂，充分混匀，加一滴到装有1ml鞘液的试管中，混匀，标记为unlabeled。4.3.1.2 取FITC、PE、PerCP、Unlabeled试剂 ，充分混匀，各加一滴到第二支装有3ml鞘液的试管中，混匀，标记为mixed。4.3.2 上机操作：4.3.2.1 按电脑桌面的FacsComp进入质控程序。4.3.2.2 在出现的“Sign in” 窗口中输入操作者姓名、单位、领导姓名等相关信息，计算机将保存这些信息；单击“Accept”。4.3.2.3 在试验选项中，选择 Lyse/No-Wash(LNW)：免洗程序。4.3.2.4 在Calibrite Beads Lot IDs中,根据每种颜色的beads所对应的Lot Ids，输入编号，此编号在Calibrite beads试剂盒内，打开新买的试剂盒，里面有一张橙色胶纸，取出贴在试剂盒的背面，标题是Calibrite beads 3 Batch NO, 选择FACS Flow Sheath下的编号(右侧的编号)。APC Lot ID(此栏不能空，即使是三色校正试剂) 。4.3.2.5 在右侧的保存选项中文件会自动保存,路径FacstationBD fileFACSCompDDMMYY,还可以单击“Location” 改变文件保存路径。4.3.2.6 按Run开始上样，在仪器面板上按Run Hi。高速运行，速度不能低于400个细胞/秒，速度过低可在管中加一滴微球。4.3.2.7 上第一管后，按Start键，仪器自动调节PMT,完成后窗口底部出现“PMT set Successfully”,暂停5秒后自动进入下一个调节窗口。注意：速度不能低于400个细胞/秒，速度过低可在管中加一滴微球。4.3.2.8 上第二管，单击Start，仪器开始自动调节补偿并进行灵敏度测试。 4.3.2.9 完成后仪器会给出提示，最后软件给出一个Summary Report。检查报告中的“Result”是否都PASS，如果有的没有PASS，检测原因。是否试剂过期，两个试管中的液体和鞘液桶中的是否相同, 仪器做月维护,完成后再重新做FACSComp仪器指控。4.3.2.10 打印报告，退出FACScomp软件。4.4 样本检测程序4.4.1. 样本准备：4.4.1.1 取TruCount Tube，编号。4.4.1.2 用反向加样法在Tube中加入50ul充分混匀的抗凝全血，注意血不要碰到试管底部的微球（Beads）。4.4.1.3 取20ul 荧光抗体加入到管中，注意：不要碰到血。涡旋混匀，室温避光放置15min。4.4.1.4 取出加入450ul 1FACS 溶血素，充分混匀，避光放置15min。4.4.1.5 24小时内上机用MultiSET软件获取细胞进行检测，上机前应充分混匀。4.4.2. 上机操作:4.4.2.1 执行FACSCalibur开机程序，进入MultiTEST软件。4.4.2.2 在出现的“Sign in”窗口中输入操作者姓名、单位、领导姓名等相关信息，计算机将保存这些信息，单击“Accept”。4.4.2.3 进入“Set up”窗口：在“Data Source”对话框中选择“From Cytometer: Acquisition and Analysis”， 在“Entry Level File Name Prefix”中选择“Sample name”； 在“Automatic Saving Options”中选择“Data File”、“Laboratory Report”、“Physician Report”，软件会自动生成一个文件，文件的默认路径FacstationBD file Multiset DDMMYY文件夹；在“View Reports”中选择“Until NextButton Pressed”。4.4.2.4 单击“Accept”，进入“FACSComp”窗口，单击“Skip FACSComp”。4.4.2.5 进入“Test Prefs”窗口，在“Physician Report Choices”中，这一项可以是全选，运行了一种试剂，会自动报告相应的结果。在窗口的最下方点“Lot Ids”，跳出一窗口,点此窗口左侧的“Absolute Count Beads”,在此窗口右侧输入TruCount tube的批号和Beads总数（标在包装袋上），单击“Save”。单击“Accept”。4.4.2.6 进入“Samples”窗口，在表格中输入相应的Patient Name、ID、Case Number，在Panel中选择CD4/8/3 Truc.4.4.2.7 在窗口最上方的“Cytometer”的下拉菜单中，单击“Instrument Setting”，在出现的新对话框中单击“Open”；打开此路径下FacstationBD file Instrument Setting Calibur.LNW文件。调用仪器各个参数的条件，选好后单击“Set”，“Done”.4.4.2.8 单击“Run Tests”，上样，调整SSC电压和阈值后，单击“Acquire”。4.4.2.9 获取完成后，可以人工调整各个门的大小，单击“Continue”；打印“Phys Report”。4.4.2.10 继续下一个实验，或单击“Quit”，“Dont Save”，退出MultiTest软件。4.5 每日关机程序4.5.1 将样品支撑架置于旁位，用2ml10%漂白剂（有效氯浓度0.5%）作样品，使外管吸入1-2ml.4.5.2 将样品支撑架置于中位，以 HI RUN 5-10分钟，使内管吸入约1ml.4.5.3 将样品换成蒸馏水重复步骤4.5.1和4.5.2。注意：最后要剩余约1ml蒸馏水浸泡进样针，防止结晶形成。4.5.4 选择Standby模式5分钟后可关掉主机.4.5.4 退出所有应用软件，关闭电脑，关闭稳压器和变压器。4.5.5 将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。5.FACSCalibur清洁和维护5.1.每日维护：实验结束后，请于关机前清洁加样针的外管和内管，防止加样针堵塞或有染料残留。清洁方法同每日关机程序。5.2每月维护：流式细胞仪使用一段时间后，在鞘液管路、废液管路和流动池中会有残留的碎片、污染物等，因此，需要定期清洗管路，要求至少每个月做一次。5.2.1 在仪器减压后，取下鞘液筒，倒空。如有必要，应清洗鞘液筒。5.2.2 将鞘液滤器短路，使鞘液不流经滤器，直接沿鞘液管路进入流动池。5.2.3 鞘液筒中倒入2L浓度为0.5-1%稀释漂白剂（注意不能使用原浓度）。5.2.4 上样管中加入4ml浓度为0.5-1%稀释漂白剂。5.2.5 流速选择HI档，RUN运行20-30分钟。5.2.6 鞘液筒用蒸馏水清洗干净，再加入蒸馏水2L。5.2.7 取下有漂白剂的上样管，换上有4ml蒸馏水的上样管。5.2.8 流速选择HI档，RUN运行20-30分钟。5.2.9 鞘液筒中换成鞘液，重新安装好鞘液滤器管路。5.2.10 流动池PRIME两遍，PRIME结束后，仪器自动回复到STANDBY状态。5.2.11 上样管中加入蒸馏水，RUN运行5分钟。5.2.12 仪器进入STANDBY状态，可以进行样本检测。5.3定期维护5.3.1更换鞘液过滤器如果鞘液污染将会影响样品检测结果时，在技术支持指导下或参照用户手册的有关内容自行更换5.3.2 空气滤网的清洁：空气滤网位于鞘液筒