GB-T5009.124-2003食品中氨基酸的测定.pdf

I C S 6 7 . 0 4 0C 5 3中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB / T 5 0 0 9 . 1 2 4 -2 0 0 3 代替 （ T B / T 1 4 9 6 5 - 1 9 9 4食品中氨基酸的测定De t e r mi n a t i o n o f a mi n o a c i d s i n f o o d s2 0 0 3 - 0 8 - 1 1 发布2 0 0 4 - 0 1 - 0 1实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部，中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 2 4 -2 0 0 3日 j J JM I1青本标准代替 G B / T 1 4 9 6 5 -1 9 9 4 食物中氨基酸的测定方法 。本标准与 G B / T 1 4 9 6 5 -1 9 9 4 相比主要修改如下 ：修改了标准的中文名称 ， 标准中文名称改为 食品中氨基酸的测定 ； 一 按 G B / T 2 0 0 0 1 . 4 -2 0 0 1 标准编写规则第 4部分； 化学分析方法 对原标准的结构进行 了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位 ： 中国预防医学科学院营养 与 食品卫生研究所。本标准主要起草人 ： 贾健斌 、 赵熙和。原标准于 1 9 9 4 年首次发布， 本次为第一次修汀。标准下载网()免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 2 4 - 2 0 0 3食品中氨基酸的测定范围 本标准规定 了用氨基酸自动分析仪测定食物中氨基酸的方法。 本标准适用于食品中的天冬氨酸、 苏氨酸、 丝氨酸、 谷氨酸、 脯氨酸、 甘氨酸、 丙氨酸、 撷氨酸、 蛋氨酸、 异亮氨酸、 亮氨酸、 酪氨酸、 苯丙氨酸、 组氨酸、 赖氨酸和精氨酸等十六种氨基酸的测定 。其最低检出限为1 0 p m o l o 本标准不适用于蛋白质含量低的水果、 蔬菜、 饮料和淀粉类食品中氨基酸测定。2原理 食品中的蛋 白 质经盐酸水解成为游离氨基酸， 经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后 ， 与荀三酮溶液产生颜色反应 ， 再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。3 试剂3 . 1 浓盐酸 ： 优级纯。3 . 2 6 m o l / I盐酸： 浓盐酸与水 1 -x - 1 混合。3 . 3 苯酚： 须重蒸馏。3 . 4 C 0 . 0 0 2 5 m o l / 1 - ） 混合氨基酸标准液（ 仪器制造公司出售） 。3 . 5 缓冲液3 . 5 . 1 p H 2 . 2 的柠檬酸钠缓冲液： 称取 1 9 . 6 g柠檬酸钠（ N a , C 6 H 5 0 , 2H,0） 和 1 6 . 5 m l浓盐酸加水稀释到 1 0 0 0 ml ， 用浓盐酸或 5 0 0 g 工 J 的氢氧化钠溶液调节 p H至 2 . 23 . 5 . 2 p H 3 . 3 的柠檬酸钠缓冲液： 称取 1 9 . 6 g 柠檬酸钠和 1 2 m L浓盐酸加水稀释到 1 0 0 0 m l ， 用浓盐酸或 5 0 0 g / l的氢氧化钠溶液调节 p H至 3 . 3 03 . 5 . 3 p H 4 . 。 的柠檬酸钠缓冲液： 称取 1 9 . 6 g 柠檬酸钠和 9 m l , 浓盐酸加水稀释到 1 0 0 0 m l ， 用浓盐酸或 5 0 0 g / l的氢氧化钠溶液调节 p H至 4 . 0 03 . 5 . 4 p H 3 . 3的柠檬酸钠缓 冲液 ： 称取 1 9 . 6 g柠檬 酸钠 和 4 6 . 8 g氯化钠 （ 优级纯） 加水稀释到1 0 0 0 m l ， 用浓盐酸或 5 0 0 g / l的氢氧化钠溶液调节 p H至 6 . 4 03 . 6 荀三酮溶液3 . 6 . 1 p H 5 . 2 的乙酸锉溶液： 称取氢氧化铿( L i O H H 2 0) 1 6 8 g ， 加入冰乙酸（ 优级纯） 2 7 9 m l ， 加水稀释到 1 0 0 0 m l ， 用浓盐酸或 5 0 0 g / l , 的氢氧化钠溶液调节 p H至 5 . 2 ,3 . 6 . 2 布置酮溶液 ； 取 1 5 0 m l 一 二甲基亚矾 ( C L H , O S ) 和乙酸锉溶液 5 0 m L加人 4 g水合苟三酮C C B H A 0 , H , U ） 和 0 . 1 2 g 还原苟三酮( C a Hio C ) s 2 H 2 0 ） 搅拌至完全溶解。3 . 7 高纯氮气： 纯度 9 9 . 9 9 o3 . 8 冷冻剂： 市售食盐 与 冰按 1 +3 混合。4 仪器和设备4 . 24 . 34 . 4真空泵 。恒温干燥箱。水解管： 耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管 ， 体积 2 0 mL -3 0 m L 。用去离子水冲洗干净并烘干。真空干燥器（ 温度可调节） 。标准下载网()免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 2 4 -2 0 0 34 . 5 氨基酸自动分析仪5 试样 处理 试样采集后用匀浆机打成匀浆（ 或者将试样尽量粉碎、 于低温冰箱中冷冻保存 ， 分析用时将其解冻后使用 。6 分析步骤6 . 1 称样 准确称取一定量均匀性好的试样如奶粉等， 精确到0 . 0 0 0 1 g , （ 使试样蛋白质含量在 1 0 mg -2 0 m g 范围内） ； 均匀性差的试样如鲜肉等， 为减少误差可适当增大称样量， 测定前再稀释。将称好的试样放于水解管中6 . 2 水解 在水解管内加 6 m o l / l盐酸 1 0 r r ii . -1 5 ml （ 视试样蛋自质含量而定） ， 含水量高的试样（ 如牛奶）可加入等体积的浓盐酸， 加人新蒸馏的苯酚 3 滴-4 滴 ， 再将水解管放人冷冻剂中， 冷冻 3 m i n -5 m i n ,再接到真空泵的抽气管h， 抽真空（ 接近 0 P a ) ， 然后充人高纯氮气； 再抽真空充氮气， 重复二次后， 在充氮气状态下封 口或拧紧螺丝盖将已封 口的水解管放在 1 1 0 0C + 1 的恒温千燥箱内， 水解 2 2 h 后， 取出冷却 士 1 开水解管， 将水解液过滤后 用去离子水多次冲洗水解管， 将水解液全部转移到 5 0 n i l - 容量瓶内用去离了水定容。吸取滤液 】n i l于 5 m l 、 容量瓶内， 用真空十燥器在 4 0 0C一 5 0 干燥 ， 残 留物用1 m - 2 ml . 水济解， 再干燥， 反复进行两次， 最后蒸千， 用 1 m L p H 2 . 2 的缓冲液溶解， 供仪器测定用。7测 定 准确吸取 。2 0 0 m l - 混合氨蒸酸标准 用 p H 2 . 2的缓冲液稀释到 5 r n l. ， 此标准稀释液浓度为5 . 0 0 n m o l, 5 0 v 1 ， 作为上机测定用的氨基酸标准， 用氨基酸 自动分析仪以外标法测定试样测定液的氨基酸 含星。8 结果计算按下式 计算 ：X 二乙 X 矗 X 厂 X V 只 M,),n X 1 0 1X 1 0 0 式 中 ： X F 一 V M 7 ） 2 15 01 0 , 一试样氨基酸的含量， 单位为克每百克（ x / 1 0 0 9 ） ；试样测定液中氨基酸含量， 单位为纳摩尔每5 0 微升（( n m o l / 5 0 川） ；试样稀释倍数 ：水解后试样定容体积， 单位为毫升（ m I ） ；氨笨酸分一 子 一R：试样质V : 1 单位为克（ 9 ） ；折算成杯毫升试样测定的氨基酸含量， 单位为 微座尔侮升（ fa m o l / I ） ：将试样含址山纳克（( r 1 目折辞成克（ 9 、 的系数。 f 一 六种氨基酸分 了量 ： 天冬氨酸. 1 3 3 . 1 ; 苏氮酸: 1 1 9 . 1丝氨酸. i 0 5 . 1 ； 谷氨酸： 1 4 7 . 1 ; 脯氨酸：1 1 5 . 1 ； 甘氨酸: 7 5 . 1 ； 丙氨酸: 8 9 . 1 ； 撷氨酸： 1 1 7 . 2 ； 蛋氨酸： 1 4 9 . 2 ; 异亮氨酸： 1 3 1 . 2 ； 亮氨酸： 1 3 1 . 2 ； 酪氨酸: 1 8 1 . 2 ； 苯丙氨酸： 1 6 5 . 2 : 组氨酸: 1 5 5 . 2 ； 赖氨酸： 1 4 6 . 2 : 精氨酸： 1 7 4 . 2 0标准下载网()免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 计算结果表示为： 试样氨基酸含A以 卜 保 留 丁价 右 扮 数 字 。去 一d卜尸、，八入 、 ，一广r t成 ， ，一，J渔 ，、1，尹日 岛 户2咬】子， 一1、八了 ，g精存 甭 复 什 务 件 下 芬 很 的 两 冲 种 方 测 宁 结 集 的维 对 善 佰 不 得 韶 讨算 术 平 均 值 的旧