SC 1062-2003 松浦银鲫.pdf

I C S 6 7 . 1 2 0 . 3 0B 5 2SC中 华 人 民 共 和 国 水 产 行 业 标 准S C 1 0 6 2 - 2 0 0 3松浦银螂S o n g p u c r u c i a n c a r p2 0 0 3 - 0 7 - 3 0 发布2 0 0 3 - 1 0 - 0 1实施铃中华人 民共和国农业部发 布准标网 w w w .z h u n b i a o .c o m 免费下载S C 1 0 6 2 - 2 0 0 3前言本标准的第a 章、 第s 章和第7 章为强制性的， 其余为推 荐性的。本标准的附录A为规范性附录。本标准由农业部渔业局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口。本标准起草单位: 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所。本标准主要起草人: 刘明华、 白庆利、 石连玉、 马波、 李池陶。准标网 w w w .z h u n b i a o .c o m 免费下载S C 1 0 6 2 - 2 0 0 3松浦银u范围 本标准给出了松浦银娜( C a r a s s i u s a u r a t u s v a r . g i b e l i o S o n g p u ) 的主要生物学性状、 生长与繁殖、分子生物学特性、 细胞遗传学特性及检测方法。 本标准适用于松浦银娜检测与鉴定。2规范性 引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日 期的引用文件， 其随后所有的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日 期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 G B / T 1 8 6 5 4 . 1 养殖鱼类种质检验第 1 部分: 检验规则 G B / T 1 8 6 5 4 . 2 养殖鱼类种质检验第 2 部分: 抽样方法 G B / T 1 8 6 5 4 . 3 养殖鱼类种质检验第 3 部分: 性状测定 G B / T 1 8 6 5 4 . 1 2 养殖鱼类种质检验第 1 2 部分: 染色体组型分析名称与分 类3 . 1 学名 松浦银卿( C a r a s s i u s a u r a t u s v a r . g i b e l i o S o n g p u )3 . 2 分类位置 鲤形目( C y p r i n if o r m e s ) ， 鲤科( C y p r i n i d a e ) , 鲤亚科( C y p r i n i n a e ) , 卿属( C a r a s s i u s ) , 娜种( C a r a s s i u sa u r a t u s ) ， 银螂亚种( C a r a a .s s i u s a u r a t u s s p . g i b e l i o ) ,主要生物学性状4 . 1 外部形态特征4 . 1 . ， 外形 体型短， 体侧扁而高， 体宽而厚， 头小， 头后背部隆起。吻圆钝， 口端位， 斜裂下唇厚， 唇后沟仅限于口角， 上下领约等长。无须。眼小， 位于头侧上方。背鳍具有硬刺， 外缘平直， 后缘锯齿较粗， 排列稀。胸鳍不达腹鳍。尾鳍分叉浅， 上下叶末端尖。鳞片为圆鳞， 边缘颜色稍深， 体色随栖息水域环境不同而有所变化， 通常鱼体背部、 背鳍和臀鳍为青灰色， 体侧淡绿色， 腹部淡黄色。 松浦银卿的外部形态见图 1 ,4 . 1 . 2 可数性状4 . 1 . 2 . 1 背鳍鳍式: D . ii i -i v - 1 6 - 1 8 ,4 . 1 . 2 . 2 臀鳍鳍式: A. i i i- 5 ,4 . 1 . 2 . 3 左侧第一鳃弓外侧鳃耙数: 4 7 - 5 3 ,2 . 4侧 线 鳞 鳞 式 : 3 1 禹 3 3 ,3可量 性状不同体长组个体， 可量性状变动值见表准标网 w w w .z h u n b i a o .c o m 免费下载S C 1 0 6 2 - 2 0 0 3图 1 松浦银柳外形图表 1 不同体长组松浦银娜可量性状比例组别123全 长 / c m1 0 . 0 4 - 1 1 . 4 01 7 . 7 0 - 1 9 . 3 02 0 . 6 4 2 5 . 3 2体长/ c m8 . 0 0 - 8 . 8 91 4 . 2 . 1 6 . 4 01 6 . 4 0 - 2 0 . 0 0全 长 / 体 长1 . 2 8 士0 . 0 21 . 2 5 士0 . 0 21 . 2 4 士0 . 0 2体长/ 体高2 . 3 9 士0 . 0 72 . 3 5 士0 . 0 82 . 3 5 士0 . 0 6体长/ 头长3 . 5 2 士0 . 0 63 . 7 1 士0 . 0 13 . 8 0 士0 . 1 8头 长 / 吻 长3 . 5 9 士0 . 2 83 . 0 8 士0 . 1 93 . 0 5 士0 . 1 7头长/ 眼径4 . 0 0 上0 . 1 84 . 7 0 士0 . 3 54 . 9 3 士 0 . 2 2头长/ 眼间距2 . 4 8 士 0 . 1 52 . 3 2 士 0 . 1 32 . 3 2 士 0 . 1 0体长/ 尾柄长8 . 0 1 士 0 . 4 87 . 9 9 士 0 . 5 87 . 9 4 士 0 . 5 3尾柄长/ 尾柄高0 . 8 3 士 0 . 0 40 . 7 6 士 0 . 0 60 . 7 6 士 0 . 0 64 . 2 内部构造特征4 . 2 . 1 颐 缥分两室， 后室长为前室 1 . 5 倍左右。4 . 2 . 2 下咽齿 下咽齿一行， 齿式为 4 / 4 ,4 . 2 . 3 脊椎骨 脊椎骨总数3 1 一3 3 .4 . 2 . 4 腹膜 腹膜为灰黑色。4 . 2 . 5 肝脏 肝脏肥大、 柔软、 褐红色， 几乎覆盖整个消化道。4 . 2 . 6 红细胞 红细胞核的长径平均为 7 . 0 7 k m, 短径平均为 3 . 8 4 K m， 核的体积平均为 4 5 . 8 k m ,准标网 w w w .z h u n b i a o .c o m 免费下载厌 1 0 6 2 -2 0 0 35 生长与公殖5 . 1 生长 不同年龄组鱼的实测体长和体重见表 2 . 表 2 不同年龄组鱼的体长和体宜实测值年 龄 . / 龄123体 长 / m-8 8 - 1 0 61 4 2 - 1 6 71 6 4- 2 0 0体重/ 92 1 . 2- 4 21 2 5 - 1 6 41 9 4 - 3 3 8 年龄鉴定主要依据鳞片上的年轮数。5 . 2怪殖5 . 2 . 1 成熟年龄 雌鱼 2 龄3 龄， 雄鱼2龄， 雄鱼占繁殖群体的4 . 8 %.5 . 2 . 2 象殖类型 为雌核发育。5 . 2 . 3 产卵习性 性腺一年成熟一次， 卵分批产出， 粘性卵。5 . 2 . 4 繁殖水温 1 5 C - 2 5 0C， 最适水温 1 8 0C -2 2 0C。5 . 2 . 5 怀卵f 不同年龄组鱼的怀卵量见表3 e 表 3 不同年龄组个体的怀卵f年 龄 / 龄234体重/ 91 2 5 - - 1 5 61 67 - 21 52 0 3 - 3 3 8绝 对 怀 卵 量 ， / 粒1 2 9 0 02 5 7 0 01 9 2 1 0- 4 9 5 0 031 6 0 0 - 6 5 6 0 0相对怀卵量“ /(粒/ B )9 6 一 1 8 61 0 5一 2 4 71 4 02 5 6 卵巢中达到I V 时相卵母细胞的数量b 克体重所含卵粒数。6分子生物学特性松浦银卿鳍组织 D N A的聚合酶链式反应( P C R ) 图谱见图2 ,M分子量标准图 2 引物 X 1 2 9 0 2扩增松浦银甸鳍组织D N A的P C R图谱准标网 w w w .z h u n b i a o .c o m 免费下载S C 1 0 6 2 - 2 0 0 3引物: X 1 2 9 0 2 扩增的1 1 0 b y 片段是松浦银卿所特有。细胞遗传学特性体细 胞染色 体数: 3 二 =1 5 6 ;染色 体组型 公式: 3 n =2 1 m + 3 7 s m + 2 0 s t N F = 2 7 2 ,松浦银娜染色体组型见图3 . 芯 月幼 侣 .界 民月 S扭 盆 甘 甘品 名、 万. ，扭 胜 . .名 孟 . .5 t。 。赶 资入 瓜 二 碑 劝 加 翻 奋 人 ，1 9. 。八氏舀 a石 岛三 舀. 皿风几“砚 蕊入舀 .几人 自 八 么月 口 人.白 今血 .任 扣几 . 几 基 . . 岛 .妈 吞 .二汤 已 户成 自价 .八 白 .， . 吞 . 内 自几 几 . 六 心 氏 几 声 二公 *-. . 图 3 松浦银蜘的染色体组型8 检测 方法8 . 1 抽样 按G B / T 1 8 6 5 4 . 2 的规定执行。8 . 2 性状测定 按G B / T 1 8 6 5 4 . 3 的规定执行。8 . 3 红细胞核测定8 . 3 . 1 血涂片制备 用肝素浸润的注射器从鱼尾静( 动) 脉穿刺采血， 每尾采血0 . 5 m L， 于玻片制成血涂片， 经卡诺氏液( 甲醇 ， 冰乙酸为 3 ， 1 ) 固定 1h 后， 用吉姆萨( G i e ms a ) 液染色。G i e ms a液的配制方法按 8 . 5 ,8 . 3 . 2 红细胞核径的测量 在光学显微镜下， 用测微尺在 1 0 X 1 0 0油镜下， 每尾鱼血涂片测量 1 0 个红细胞核的长径和短径， 长径和短径取平均值。8 . 3 . 3 红细胞核体积的计算 红细胞核体积按式( 1 ) 计算。 V= 4 / 3 r a b (1) 式中 : V 体积的数值， 单位为立方微米( p m ) ; a短半径， 单位为微米( p m ) ; b 长半径， 单位为微米( ;c m) a准标网 w w w .z h u n b i a o .c o m 免费下载S C 1 0 6 2 - 2 0 0 38 . 4聚合酶链式反应( P CR) 分析8 . 4 . 1 基因组D N A的提取 取 。3g 鳍条剪碎， 加人D NA提取裂解液 含乙二胺四乙酸( E D T A) 0 . 5 m o l / L, P H8 . 0 ; 十二烷基硫酸钠( S D S ) 0 . 5 %; 蛋白酶K 2 0 0 p g / m L 3 mL ， 于5 0 C 消化 3h 。用酚 ， 三氯甲烷 : 异戊醇( 2 5， 2 4， 1 ) 棍合液抽提三次后， 取上清液加人 2 倍体积无水乙醇， 于 4 离心( 1 5 0 0 0 r / mi n ) 2 0 mi n ， 去掉全部液体， 将沉淀物干燥. 加人T E 缓冲液 三经甲 基氨基甲烷 一 盐酸缓冲液( T i r s - H C D p H 8 . 0 , 1 0 m m o l / L ;E D T A p H 8 . 0 , 1 mm o l / 1 _ 2 0 0 p L溶解 D NA, 置 4 冰箱保存备用。8 . 4 . 2引物( X1 2 9 0 2 ) 引物序列5 C C AG G C C T G A AG T A C C AC A T3 3 CACGAGGTGATGGATGACTG 5 8 . 4 . 3 P C R反应体系 反应总体积为 2 5 p L ， 其中含 T r i s - HC I 1 0 mm o l / L ( p H8 . 0 ) , 氯化钾( K C D 5 0 m mo l / L , 氯化镁( Mg C 12 ) 1 . 5 mm o l / L， 明胶 0 . 0 0 1 0 0 ， 引物0 . 2 m mo l / L ， 四种核昔酸d A T P , d C T P , d G T P和 d T T P各为0 . 1 m m o l / L , 2 5 n g 模板D N A , 1 U T a g D N A聚合酶， 于P C R扩增仪上进行扩增。8 . 4 . 4 P C R扩增条件 9 4 预变性 3 mi n , 9 2 变性 3 0 s , 5 0 0C 退火 3 0 s , 7 2 延伸 3 0 s , 3 8 个循环， 循环结束后 7 2 延伸5 mi n 。 扩增产物用含滨化乙锭( E B ) 的 1 . 4 %琼脂糖凝胶电泳检测。8 . 4 . 5 琼脂摘凝胶电泳 凝胶浓度为 1 . 4 %琼脂糖， 凝胶中含 E B O . 5 j g / mL ， 电泳缓冲液和凝胶制备见附录A。电泳在室温下进行， 电压 2 V / c m-3 V / c m， 电泳时间2h 3h 。电泳结束后在凝胶成像仪观察拍照。8 . 5 染色体检测 按 G B / T 1 8 6 5 4 . 1 2的规定执行。8 . 6 检测结果判定 按 G B / T 1 8 6 5 4 . 1的规定执行。准标网 w w w .z h u n