初始污染菌检验标准操作规程.doc

文件名称初始污染菌检验标准操作规程修订人：日期：编 码LHYL-ZLSOP-06702审核人：日期：修订部门质量管理部批准人：日期：颁发部门人力资源部生效日期：分发部门质量管理部目的：建立产品初始污染菌数检验及分析标准操作规程。责任：质量检验人员负责执行此规程。范围：适用于未灭菌产品初始污染菌数验证试验的检测分析。内容：1 初始污染菌检测1.1 器材与试剂1.1.1 器材（1）生化培养箱、霉菌培养箱（2）立式灭菌柜（3）超净工作台（4）无菌过滤装置（5）无菌镊子、无菌剪子（6）电子天平（7）移液器（8）接种环1.1.3 稀释液、冲洗液pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液1.1.3 培养基 营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。1.2 检验量 随机抽取1到2个产品1.3 检验方法：平皿法1.3.1 供试液的制备用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采样表面积为100cm2 ，加入100ml无菌生理盐水作为1：10的供试液；或拆卸样品，用100ml生理盐水震荡浸泡，作为1：10的供试液。供试液10倍递减稀释。1.3.2 供试液操作方法每个稀释级各吸取1ml分别注入4个直径90mm的无菌平皿中，2个平皿注入1520ml温度不超过45的溶化的胰酪大豆胨琼脂培养基混匀，凝固，倒置培养；另2个平皿注入1520ml温度不超过45的溶化的沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。1.3.3 阴性对照取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，分别置2个无菌平皿中，分别注入胰酪大豆胨琼脂和沙氏葡萄糖琼脂培养基，凝固，倒置培养。1.3.6 培养条件除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养基在30-35培养3-5天；沙氏葡萄糖琼脂培养基在20-25培养5-7天。1.3.7 计数 将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细观察，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。1.3.7.1 菌落计数基本规则选取平均菌落数在30300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。如只有1个稀释级平均菌落数在30300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀 释倍数报告。如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30300之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。当比值2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。当比值2时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按最高平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低平均菌落数乘以稀释倍数报告。如各稀释级平均菌落数均不在30300之间，则以最接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小于1时，应报告菌数为10个/g或ml。如有3个稀释级平均菌落数均在30300之间，则以后2级计算级间比值报告。菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于100时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度。1.3 清场 检验完毕，将使用的试剂归位，清理台面，并将用过的工具进行清洗。检测人员应及时填写初始污染菌数检测记录，并对检验结果进行判定。1.4 注意事项 1.1 产品取样应在完成整个灌装或包装过程以后，而又在灭菌前取样；1.3 本操作应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的无菌操作台内进行。操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。1.3 无菌操作台必需定期进行洁净度检测，试验前提前开紫外灯15min后方可进行实验操作。1.4 过滤器、滤膜、镊子以及无菌设备使用前应进行灭菌，使用时应保证滤膜在过滤前后的完整性。5 依据标准及相关文件2015版中华人民共和国药典（二部）附录