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酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙肝病毒表面抗原,哈尔滨医科大学附属第五医院王宏志,乙肝五项报告单,教学目标,掌握ELISA检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的原理,酶联免疫吸附试验,技术简介,酶联免疫吸附试验：ELISA是一种固相酶免疫分析技术即可检测抗原，又可检测抗体广泛地应用于临床和科研检测反应类型：双抗体夹心法、双抗原夹心法、竞争法,抗原抗体反应具有高度的特异性,酶联免疫吸附试验,如何应用双抗体夹心法检测HBsAg?,是ELISA检测抗原最常用的方法适用于检测含有至少两个抗原决定簇的多价抗原,方法简介,双抗体夹心法,固相化的抗体,双抗体夹心法,检测HBsAg三个必要试剂,酶标记的抗原,酶反应的底物,1、特异性抗体与固相载体结合，形成固相抗体2、加入待测标本，温育，形成固相抗体-待测抗原复合物3、洗涤，除去其他游离成分4、加酶标抗体，温育，形成固相抗体-待测抗原-酶标抗体复合物5、洗涤，除去游离的酶标抗体6、加底物，固相载体结合的酶催化底物显色7、结果检测及判断,反应基本原理,双抗体夹心法,检测HBsAg反应原理示意图,双抗体夹心法,底物（底物缓冲液+底物液）,酶标记乙肝表面抗体,血清中待测乙肝表面抗原,乙肝表面抗体,固相载体（聚苯乙烯塑料）,血清中其他非待测抗原,水浴箱37温育,检测HBsAg反应原理示意图,双抗体夹心法,1、特异性抗体与固相载体结合，形成固相抗体,固相乙肝表面抗体,包被,检测HBsAg反应原理示意图,双抗体夹心法,2、加入待测标本，温育，形成固相抗体-待测抗原复合物,固相乙肝表面抗体-待测乙肝表面抗原复合物,检测HBsAg反应原理示意图,双抗体夹心法,2、加入待测标本，温育，形成固相抗体-待测抗原复合物,固相乙肝表面抗体-待测乙肝表面抗原复合物,3、洗涤，除去其他游离成分,检测HBsAg反应原理示意图,双抗体夹心法,4、加酶标抗体，温育，形成固相抗体-待测抗原-酶标抗体复合物,固相乙肝表面抗体-待测乙肝表面抗原-酶标乙肝表面抗体复合物,5、洗涤，除去游离酶标抗体,检测HBsAg反应原理示意图,双抗体夹心法,6、加底物，固相载体结合的酶催化底物显色,检测HBsAg反应原理示意图,双抗体夹心法,7、结果检测及判断,终止液,检测HBsAg反应原理示意图,双抗体夹心法,7、结果检测及判断,酶标仪判读,样本检测结果临界值（C.O.）：阴性,样本检测结果临界值（C.O.）：阳性,检测HBsAg反应原理完整演示,双抗体夹心法,终止液,酶标仪判读,内容总结,ELISA是目前临床和科研中重要的检测方法HBsAg的检测是应用ELISA中双抗体夹心法掌
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