实验室常用溶液配制.doc

实验室常用溶液的配置Amp+/Kan+:贮存液浓度为50mg/mL 称取500mg于10mL超纯水中溶解，抽滤后1mL分装到离心管中，于-30冻存X-gal：贮存浓度为20mg/mL 称取20mg X-gal溶于1mL二甲基甲酰胺中，-30中用锡箔纸包裹后避光保存，不需要过滤除菌IPTG：贮存浓度为0.84mol/L 称取2g IPTG溶于8mL超纯水中，用水定容到10mL，用0.22um的一次性滤过器过滤除菌，1mL分装到离心管中并于-30保存CaCl2：贮存浓度为1mol/L 称取1.11g CaCl （或者CaCl:2H2O 1.4698g）溶于8mL超纯水中，定容到10mL，用0,22um的一次性滤过器过滤除菌，1mL分装到离心管中，并于-30保存LB培养基：胰蛋白胨（Tyrtone） 10g/L酵母提取物（Yeast Extraction） 5g/L氯化钠 10/L根据经验用NaOH调节PH为7.2-7.6，然后高压蒸汽灭菌，注意及时从灭菌锅中取出无DNA酶的RNA酶：将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/L Tris-Cl（PH7.5）、15mmol/L NaCl 中，配成10mg/mL 的浓度，于100加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20Bradford 贮存液95%乙醇 100mL88%磷酸 200mLG 250 0.35g室温下可储存，一般4Bradford 工作液Bradford贮存液 30mL双蒸水 425mL95%乙醇 15mL88%磷酸 30mL储存于4超声破碎缓冲液KCl 300 mM 22.37 gKH2PO4 50 mM 6.81 gEDTA 1 mM 0.292 g (EDTA-2Na-2H2O) 0.372 g定容至1 L，调pH至8.0包涵体洗涤液KCl 300 mM 22.37 gKH2PO4 50 mM 6.81 gEDTA 5 mM 1.46 g (EDTA-2Na-2H2O) 1.86 g尿素 2 M 120 gTriton X-100 0.5% 5 ml脱氧胆酸钠盐 0.1% 1 g定容到1 L 调pH至8.0匀浆缓冲液（pH=7.5）成分：20mM HEPES 0.002mol=0.476g 加入0.952g1.5mM MgCl2 0.00015mol=0.0036g 加入0.0072g0.2mM EDTA 0.00002mol=0.00584g 加入0.01168g0.1M NaCl 0.01mol=0. 58g 加入1.16g0.5mM 钒酸钠 0.00005mol=0.0092g 加入0.0184g加100mL水进行溶解，NaOH调pH至7.50.2mM DTT 总体积500L加入0.1L0.4mM PMSF 总体积500L加入20L1%SDS 加入50L 10% SDS其中DTT和PMSF匀浆之前加入，SDS匀浆之后离心之前加入DTT配成1M母液，溶于0.01M乙酸钠（pH=5.2）中，过滤除菌PMSF配成10mM母液，溶于异丙醇10*PBSNaCl 80.0669 gKCl 2.0129 gNa2HPO4 14.1960 gKH2PO4 2.4496 g水定容至1L，使用时稀释10倍，用NaOH调pH至7.4Start with 800 mL of distilled water to dissolve all salts. Adjust the pH to 7.4 with HCl. Add distilled water to a total volume of 1 liter. The resultant 1x PBS should have a final concentration of 10 mM PO43, 137 mM NaCl, and 2.7 mM KClIf used in cell culturing, the solution can be dispensed into aliquots and sterilized by autoclaving (20 min, 121C, liquid cycle). Sterilization may not be necessary depending on its use. PBS can be stored at room temperature or in the fridge. However, concentrated stock solutions may precipitate when cooled and should be kept at room temperature until precipitate has completely dissolved before use.转膜缓冲液（含有SDS）1L剂量甘氨酸 2.9gTris 5.8gSDS 0.37g甲醇 200mL水 800mL10蛋白电泳缓冲液1L剂量Tris 碱(Mr 121.14) 30.2g甘氨酸(Mr 75.07) 188gSDS (Mr 288.38) 10 g加水至1L用时稀释10倍即可30丙稀酰胺1L 剂量丙烯酰胺 290gN,N-亚甲基双丙稀酰胺 10g溶于600ml蒸馏水中，加热至37溶解，补足体积至1L，过滤，且pH不大于7.01 M Tris-Cl（pH6.8）60.55 g Tris 碱溶解于400ml 蒸馏水，溶解后调pH值，总体积为500ml1.5 M Tris-Cl（pH8.8）90.83g Tris 碱溶解于400ml 蒸馏水，溶解后调pH值，总体积为500ml。加约14.5ml浓盐酸，再调整到500ml体积1M DTT用20mL 0.01mol/L 乙酸钠溶液（pH=5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装考马斯亮蓝R-250染液在90mL甲醇：水（1:1）和10mL冰乙酸混合液中溶解0.25g考马斯亮蓝R-250，过滤后室温保存蛋白酶K（20mg/mL）灭菌的50 mM Tris（pH 8.0），1.5 mM乙酸钙溶解，配置成浓度为20 mg/mL的溶液，-20保存流式缓冲液PBS+5% FBS+0.02% sodium azideWater 45 mL20%叠氮钠 50 L10*PBS 5 mLFBS 2.5 mL文献常见配方：PBS+0.5-1% BSA（5-10% FBS）+0.1% sodium azide酸酐称取50 g重铬酸钾（KCrO4）溶于80mL双蒸水中，90中溶解2h，每半小时搅拌促进溶解，溶解完成后，加入1000mL硫酸，分装于2个瓶子中。注意使用过程中，如果其中一瓶的效果不好，不要混合使用。使用5次，就要重配。滴管酸酐中浸泡24h，自来水冲洗至无明显可见颜色，自来水正反面各20遍，双蒸水正反面各20遍，复印纸中包裹，烘干，加棉花塞和胶头，单独包装，灭菌，烘干。双抗（青霉素和链霉素）0.8 g链霉素和80W U青霉素，一起溶于 8ml PBS，单位分别为105 ug/ml和105 U/ml，然后稀释10倍，分别为104 ug/ml和104 U/ml，使用时，按照1%加入，分别为100 ug/ml与100 U/ml培养基I2% FCS，1%双抗，128uL/40mL肝素钠，RPMI 1640培养基II0.1% FCS，1%双抗，128uL/40mL肝素钠，RPMI 1640完全培养基10% FCS（5% FCS+5% 鱼血清），1%双抗LPS称取2mg LPS溶于1mL PBS中，0.22m滤膜过滤，硅化离心管，-20保存1*Turk染液Gentian Violer（结晶紫） 50mgAcetic Acid（冰乙酸） 5mLWater 495mL1%巴比妥钠1g巴比妥钠溶于100mL的PBS中，充分混匀，避光保存（80 ug/g用量）诱导小鼠腹腔巨噬细胞所需溶液硫代硫酸盐肉汤培养基 (Thioglycollate broth)：称取3 g，加入到100 ml纯水中，高温121 灭菌15 min，然后冷却到室温，再重复2次，进行老化操作。此时已经溶解，呈现透明溶液。冲洗液：RPMI 1640 +1%双抗培养基：RPMI 1640+10% FBS+1%双抗氯化铵红细胞裂解液（10的储存液）参考流式中文网80.2 g NH4Cl (1.5 M)8.4 g NaHCO3 (100 mM)3.7 g EDTA二钠 (10 mM)加水至900 ml，然后用1M的HCl或1M的NaOH调节pH值至7.4。最后加水至1升。该10*的储存液可在4保存6个月。工作液的配制：在使用前蒸馏水稀释10倍即可。（1份储存液加上9份水）。工作液用来裂解红细胞。不能以10*的浓度储存，否则会形成碳酸铵而失效。ACK裂解液参考文献Dynamic variation in cycling of hematopoietic stem cells in steady state and inflammation, JEM, 2011ACK (Ammonium-Chloride-Potassium) Lysing BufferAmmonium Chloride 150 mM Mw 53.5Potassium Bicarbonate 10 mM Mw 100.1EDTA 0.1 mM Mw 372.0ACK Lysis Buffer (1L)ComponentAmountFinal ConcentrationNH4Cl8.3 g0.15MKHCO31.0 g10mMEDTA200 ul 0.5M0.1mMadd ddH2O to 800 ml, adjust pH to 7.2 - 7.4, finalize volume to 1L with ddH20Red Blood Cell Lysis Using ACK Lysing Buffer1) Collect whole blood by venipuncture in EDTA-treated collection tubes.2) Pipette 1mL EDTA-treated whole blood into a tube containing 10-20 mL of ACK Lysing Buffer at room temperature.3) Allow the blood sample plus ACK Lysing Buffer to incubate at room temperature for 3 5 minutes. Lysis of the red cells should be evident during this incubation.4) Collect the white blood cells by centrifugation at 300 x g for 5 minutes at room temperature.5) Aspirate the supernatant, leaving approximately 50 uL to avoid disturbing the pellet.6) Gently mix the cells and the remaining fluid, then add 5 mL cold phosphate buffered saline.7) Mix the cells and phosphate buffered saline, and th