14 人参提取工艺研究_张玲.pdf

收稿日期: 2000- 03- 13; 修订日期: 2000- 04-19 作者简介: 张 玲( 1952- ) , 女(汉族), 北京市人, 现任山东省生物 药物研究所总工程师, 天然药物研究室主任, 研究员, 中国药科大 学毕业, 主要从事中药制剂及中药化学的科研工作. 人参提取工艺研究 张 玲, 单卫华, 梁瑞雪, 时延增, 尚立霞, 陈文浩, 胡庆文 (山东省生物药物研究所, 山东 济南 250014) 摘要:以人参皂甙 Rg1及人参二醇为检测指标, 考察了不同提取工艺对人参各有效成分含量的影响, 并探讨了乙醇 回流提取的最佳工艺条件。筛选制定了确保人参制剂质量及疗效的提取工艺。 关键词:人参; 人参皂甙 Rg1; 人参二醇; 薄层扫描 中图分类号: R284. 2 文献标识码: A 文章编号: 1008-0805( 2000) 09-0777-02 Study of Extraction Processes in Panax ginseng ZHANG Ling,SHAN Wei-hua,LIANG Rui- xue,SHI Yan-zeng, SHANG Li-xia,CHEN Wen-hao,HU Qing- wen ( Shandong Institute of Biopharm, Jinan 250014, China) Abstract:The paper reports the effect of different extraction processes on ginsenoside Rg land panaxadiol in Panax ginseng,and explores the best process condition of alcohol extraction. Key words:Panax ginseng; Ginsenoside Rgl; Panaxadiol; TLC 中医使用人参 Panax ginseng C. A. M eyer 已有几千年的历 史。 目前临床上以人参为主药的中成药有数十种。 传统人参采用粉 末入药或渗漉提取, 现代多采用不同浓度乙醇回流提取 1, 2,3, 亦 有用渗漉工艺。 作者在研究人参制剂时, 发现不同提取工艺对人参 有效成分人参皂甙、 人参二醇含量影响较大。 为更好地发挥人参的 药用功效, 本文探索了人参最佳提取工艺条件。采用薄层扫描法, 以人参皂甙 Rg1和人参二醇为检测指标, 考察了不同提取工艺以 及不同醇提浓度对上述有效成分的影响。筛选制定了确保人参制 剂质量与疗效的提取工艺。 1 材料与仪器 对照品: 人参皂甙Rg1与人参二醇由中国药品生物制品检定 所提供。 药材: 人参购自济南药材站, 由山东省中医药研究所生药室彭 广芳研究员鉴定。 试剂: 均为分析纯。 仪器: CS- 9301 薄层扫描仪(日本岛津公司) ; PBQ- I 型薄层自 动 铺 板器 ( 重庆 南 岸新 力实 验 电器 厂); 定 量 毛细 管 ( 美 国 Drummond 厂) 。 2 不同提取工艺样品液的制备 2. 1 乙醇渗漉法: 人参粉碎成粗颗粒( 过 20 目筛) , 称取 100 g, 照 渗漉法4项下操作, 用 70% 乙醇作溶剂, 浸泡 1 周后, 进行渗漉, 共加入 30 倍量乙醇, 合并渗漉液, 回收乙醇, 浓缩成每 4 ml含 1 g 人参药材的浓缩液, 备用。 2. 2 乙醇回流提取法: 取人参片 100 g, 加 8 倍量 70% 乙醇, 共提 取 2 次, 3h/次, 合并提取液, 回收乙醇, 浓缩成每 4ml含 1g人参 药材的浓缩液, 备用。 2. 3 水提醇沉法: 取人参片 100g, 加水煎煮 2次, 3h/ 次, 合并煎 液, 减压浓缩至相对密度 1. 141. 16, 加入乙醇, 使醇浓度为 70% , 冷藏, 次日减压回收乙醇, 浓缩成每 4ml含 1g人参药材的 浓缩液, 备用。 2. 4 人参药材样品液的制备: 取人参粉末 3 g, 加水 2 ml, 拌匀湿 润后, 加水饱和的正丁醇 30 ml, 超声处理 50 min, 滤过, 滤液回收 正丁醇至尽, 得浓缩液。 3 不同提取工艺样品中人参皂甙 Rg1及人参二醇的含量测定 3. 1 薄层层析 层析板: 硅胶 G- 0. 2% CM C 薄层板。 展开剂: 以溶剂系统: 氯仿-甲醇-水( 730. 5) 10以下 展开分离人参皂甙Rg1; 以溶剂系统: 苯- 丙酮(52) 分离人参 二醇, 展距为 10 cm, 结果见图 1, 图 2。 图 1 人参皂甙 Rg1及不同工艺样品的薄层色谱 1. 人参皂甙Rg1对照品 2. 渗漉工艺 3. 乙醇回流提取工艺 4. 水提醇沉工艺 图 2 人参二醇及不同工 艺样品的薄层色谱 1. 人参二醇对照品 2. 渗漉工艺 3. 乙醇回流提取工艺 4. 水提醇沉工艺 3. 2 扫描条件: 将供试液点于薄层板上, 分别以展开剂, 层 离, 显色, 进行反射式锯齿形扫描, 人参皂甙Rg1K s= 525nm; 人参 二醇K s= 525nm;KR均为 680nm; 线性参数Sx= 3; 狭缝 1. 2cm 1. 2 cm; 扫描速度 20 mm/min; 纸速 20 mm/ min。 3. 3 人参皂甙 Rg1含量测定 777 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2000 VOL. 11 NO.9时珍国医国药2000 年第 11卷第 9 期 3. 3. 1 人参皂甙 Rg1与峰面积线性关系与范围: 精密吸取人参皂 甙Rg1对照品的甲醇溶液(1mg/ml) 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0ml分 别点在同一薄层板上, 层离, 晾干, 喷以 10% 硫酸乙醇溶液, 105 烘至斑点清晰, 按上述条件扫描, 以浓度为横坐标, 测得斑点峰面 积为纵坐标作图, 回归方程为 Y = 625. 10 X- 150. 00, C = 1. 000。 结果表明, 人参皂甙Rg1浓度在 15Lg范围内与其峰面积呈线 性关系。 3. 3. 2 精密度试验: 同一斑点连续扫描 5 次, 测得变异系数RSD = 0. 74% ; 同一薄层板 5 个同样量的各对照品溶液, 测得面积, 计 算变异系数RSD在 2. 17% 2. 79% 之间; 5 块不同薄层板相同量 的各对照品溶液的斑点, 测得 RSD 为 2. 97% 。 3. 3. 3 稳定性试验: 精密吸取对照品溶液, 点于薄层板上, 层离, 溶剂挥干, 显色后立即扫描, 再扫描 1 次/ 20 min。结果表明, 人参 皂甙 Rg1斑点在 1 h 内稳定。 3. 3. 4 回收率测定: 精密吸取回流提取工艺样品液 3 份, 分别加 入精密称定的人参皂甙Rg1对照品, 依法测定, 平均回收率= 95. 45% , RSD= 2. 69% 。 3. 3. 5 样品分析: 精密吸取上述 3 种工艺浓缩液各 8ml, 另取相 当于 2 g 原药材的人参药材浓缩液加水至 8 ml, 分别用氯仿提取 2 次, 10ml/ 次, 弃去氯仿液, 水液用水饱和的正丁醇提取 4 次, 8 ml/次, 合并提取液, 挥去正丁醇, 残渣用甲醇溶解, 并定容至 1 ml 容量瓶中, 作为测定人参皂甙Rg1的样品供试液。 精密吸取人参皂 甙 Rg1对照品溶液 2, 4 Ll及不同工艺供试液各 4 Ll, 按上述方法 测定人参皂甙Rg1含量(外标两点法) , 结果见表 1。 表 1 不同工艺样品中人参皂甙 Rg1、 人参二醇含量 mg/ g 方法人参皂甙 Rg1人参二醇 渗漉法1. 811.039 乙醇回流提取2. 161.315 水提醇沉法0. 760.593 注: 以上数据为 3次平行实验平均值;n= 3 3. 4 人参二醇含量测定 3. 4. 1 人参二醇浓度与峰面积的线性关系与范围: 精密吸取人参 二醇对照品的氯仿溶液(1 mg/ml) 0. 5, 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0 Ll, 分别点于同一含 0. 3% 羧甲基纤维素钠的硅胶G薄层板上, 展开, 取出, 晾干, 喷以 10% 硫酸乙醇溶液, 105烘至斑点显色清晰, 取 出, 在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板, 周围用胶布固定, 于暗处 放置 1 h 后, 按上述条件进行扫描, 以对照品的面积积分值为纵坐 标, 点样量为横坐标, 绘制标准曲线, 回归方程为:Y= 7 891. 71X + 2 248. 83, C = 1. 000。上述结果表明, 人参二醇点样量在 0. 51 5. 1Lg范围内与面积积分值呈良好的线性关系。 3. 4. 2 稳定性试验: 吸取人参二醇对照品溶液 2 L l, 点于薄层板 上, 展开, 晾干, 显色, 每隔一定时间测定 1 次斑点面积积分值, 结 果表明人参二醇斑点在前 1 h 内不太稳定, 但在 1 h 之后的 2 h 内 基本稳定,RSD为 2. 98% 。故在显色后 1h测定, 结果更为准确。 因测定稳定性时, 薄层板是在薄层扫描仪内避光放置的。因此, 薄 层析显色后也应避光放置 1h后测定。 3. 4. 3 精密度试验: 同一斑点连续扫描 5 次, 测得变异系数 RSD = 0. 87% ; 同一薄层板 5 个同样量的各对照品溶液, 测得面积, 计 算变异系数 RSD 在 1. 35% 1. 98% 之间。 5 块不同薄层板上相同 量的各对照品溶液的斑点, 测得RSD为 2. 73% 。 3. 4. 4 回收率试验: 精密吸取乙醇回流提取工艺样品供试液 3 份, 分别加入精密称定的人参二醇对照品, 依法测定, 平均回收 率= 98. 47% , RSD= 2. 44% 。 3. 4. 5 样品测定: 精取 3 种工艺的样品液各 10 ml, 另取相当于 2 g原药材的人参药材的浓缩液, 加水至 10ml, 分别用水饱和的正 丁醇振摇提取 5 次, 15 ml/次, 合并正丁醇液, 水浴蒸干, 残渣加硫 酸的 45% 乙醇溶液( 7100ml) 15ml溶解, 置 100ml圆底烧瓶 中, 沸水浴上加热回流 2 h, 放冷, 转移至分液漏斗中, 用水 15 ml 和石油醚( 6090) 30ml分别洗涤容器, 并入分液漏斗中, 振 摇, 分取石油醚液, 再用石油醚(6090)提取 3次, 30 ml/ 次, 合 并石油醚提取液, 用 0. 5% 氢氧化钠 10ml洗涤 1次, 弃去碱液, 石 油醚液再用水洗涤 2 次, 10 ml/ 次, 弃去水液。挥干石油醚, 残渣加 氯仿溶解, 并定容至 2ml容量瓶中, 作为测定人参二醇的供试品 溶液。 精密吸取人参二醇对照品溶液1 L l 和 3 Ll, 吸取不同工艺供 试液各 2 L l, 按上述方法测定人参二醇含量( 外标两点法) , 结果见 表 1。 4 乙醇回流提取最佳工艺条件的筛选 4. 1 采用正交试验考察了乙醇回流提取的最佳工艺条件。 试验方 法: 用正交表L9( 34) 筛选最佳醇提取工艺条件。 因素水平表见 表 2。 表 2 因素水平表 水平醇浓度A ( % )提取时间 B/h加醇量 C/ ml 1504240( 12 倍) 2 2603160( 8 倍)2 3702200( 10 倍) 2 480 4. 2 乙醇提取工艺: 取人参片 20 g, 加入不同倍数(W/W), 不同 浓度(50% , 60% , 70% , 80% )的乙醇, 加热回流提取至规定时间( 4 h2, 3 h2, 2 h2), 将各个提取液回收乙醇至尽, 加水分别定 容至 50ml容量瓶中, 摇匀后分别精取 5ml, 按 3. 3. 5 项下方法, 制备成 12份样品供试液, 并依法进行层离, 扫描。 试验方案和结果见表 3。方差分析见表 4。 表 3 L9( 34) 正交表mg/g 试验号ABCD 试验结果人参皂甙 Rg1Rg12 111112. 294. 58 212222. 555. 10 313332. 575. 14 实 基础421232. 635. 26 际 实验522312. 605. 20 试 n= 9623122. 985. 96 验731322. 94 n= 12 832132. 76 933212. 85 追加1041322. 60 实验1142132. 80 n= 31243212. 83 14. 8215. 3816. 10 15. 46 16. 4215. 8616. 04 16. 60 8. 5516. 7815. 88 15. 96 总和 48. 02 8. 23 2219. 63236. 54259. 21 239. 01 2269. 62 251. 54257. 28 275. 56 CT = ( 48. 02)2 18 273. 1