抗生素效价计算过程.doc

USP Cylinder-plate assay美国药典 管碟法-（标准曲线法）1、 美国药典规定的管碟法抗生素效价方法简述： 首先制备5个标准溶液浓度（U/ml），分别为S1、S2、S3、S4和S5，其中S3为中间浓度。除S3外的每个浓度准备3个碟子，每个碟子放置6个牛津杯，其中不相连的三个分别加入Si（i为1、2、4或5），另外三个不相连的加入S3。待检样品（Unknown）加样方式如Si，具体放置方法如下图1：图1：标准及样品管碟放置方式图例Standard curve plates Unknown sample platesS3S3S3S3S3Replicate1S1S1S2S2S4S4S5S5U1U1S3S3S3S3S3S3S3S3S3 S1S2S4S5U1S3S3S3S3S3Replicate2S1S1S2S2S4S4S5S5U1U1S3S3S3S3S3S3S3S3S3S3S1S2S4S5U1S3S3S3S3S3Replicate3S1S1S2S2S4S4S5S5U1U1S3S3S3S3S3S3S3S3S3S3S1S2S4S5U1StandardStandardStandardStandardUnknownSet S1Set S2Set S4Set S5Sample U12、在以上方法的基础上以具体数据进行计算举例：下表2为按以上方法进行抗生素效价检测的一组测量结果：表2：抗生素效价检测测量结果表备注：Zone1、3、5表示每个平皿中不相连的三个S3的直径值；Zone2、4、6表示每个平皿中不相连的三个Si的直径值；U1表示待测样品1。2.1 进行初始计算：对于每种浓度的三个平板，分别求出得到的9个中间浓度标准品的平均值以及9个Si和U1直径的平均值。例如：15.867=（16.1,15.6,15.8,16.015.8）9个数据的平均值14.167=（14.6,14.1,13.5,14.514.1）9个数据的平均值 2.2 变异性的适用性检查：然后求出每三个平板得到的9个数值的标准偏差（包括标准对照和样品的），进而计算出其相对标准偏差值（RSD，该值应不超过10%）。例如：标准偏差 0.200 = s(16.1, . . ., 15.8) 相对标准偏差 1.3% = (0.200/15.867) *100 2.3 进行平板间的差异校正：计算公式如下。XC = XS (XR P)XC = 标准品平均值的校正值XS = 原始的标准品的平均值XR = 对照值的平均值P = 校正值例如：14.022 = 14.167 (15.867 15.722) = 14.167 0.1452.4 建立标准曲线：标准曲线由2.3计算的标准品平均值的校正值Xc和标准品浓度值的对数值构成。（使用适宜的计算软件或手动计算）（注意-可以使用自然对数或底数为10的对数建立标准曲线中以确定回归方程，这样可以得到同样的结果）例如：下表3是针对下列计算中会用到的数据从表2中截出的部分。表3：标准曲线数据表图4：线形回归结果标准曲线：Z = 3.5502* ln(C) + 9.9794 Z=校正抑菌圈大小C=浓度R2 = 0.99682.5 待测样品效价：估算一个待测样品的效价，计算对照抑菌圈和样品抑菌圈的平均值（三个平板的）。用上面介绍的标准品平均值的校正值Xc以计算待测样品的浓度平均值。注意-另一个可以接受的用校正值的方式为，根据标准品中间浓度S3的对数值在估计效价的回归线中进行校正。在标准曲线中使用公式用校正平均值计算样品的含量对数值LU。LU = (Z a)/ba = 回归线的截距b = 回归线的斜率要得知待测样品的效价，取LU的反对数值乘以适当的稀释因子，该值也可描述为参考值浓度的百分比。例如：待测样品校正值(表 2中) = 15.522待测样品效价的ln值：LU = (15.522 9.978) / 3