控制菌检查用培养基适用性验证方案.doc

控制菌检查用培养基适用性验证方案1试验目的控制菌检查用培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的目的是为了确认麦康凯液体培养基、麦康凯琼脂培养基、RV沙门菌增菌液体培养基、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基、三糖铁琼脂培养基适合大肠埃希菌、沙门菌的控制菌检查。2. 试验方法照中国药典2015版四部非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法（通则1106）进行试验。3.试验材料3.1 培养基名 称来 源批 号麦康凯液体培养基麦康凯琼脂培养基RV沙门菌增菌液体培养基木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基三糖铁琼脂培养基麦康凯液体对照培养基麦康凯琼脂对照培养基RV沙门菌增菌液体对照培养基木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂对照培养基三糖铁琼脂对照培养基3.2 菌种验证菌株来源批号大肠埃希菌CMCC（B）44102金黄色葡萄球菌 CMCC（B）26003乙型副伤寒沙门菌CMCC（B）500943.3 仪器XXXXX水平流净化工作台/生物安全柜、XXXXX立式压力蒸汽灭菌器、XXXXX电热恒温培养箱(3035)、XXXXX生化培养箱（2025）、XXXXX气浴恒温振荡器3.4 稀释剂0.9%无菌氯化钠溶液4.试验过程4.1菌液制备用0.9%无菌氯化钠溶液制成每0.1ml含菌数为不大于100cfu的菌悬液，菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在28，可在24小时内使用。4.2 适用性检查4.2.1 麦康凯液体培养基适用性检查取大肠埃希菌菌悬液各0.1 ml分别接种于被检培养基和对照培养基中，在35条件下培养24h，进行促生长能力检查。取金黄色葡萄球菌菌悬液各0.1 ml接种于被检培养基和对照培养基中，在35条件下培养24h，进行抑制能力检查4.2.2 麦康凯琼脂培养基适用性检查取大肠埃希菌菌悬液各0.1 ml分别涂布被检培养基和对照培养基平板上，在35条件下培养24h，进行促生长能力和指示特性检查4.2.3 RV沙门菌增菌液体培养基适用性检查取乙副伤寒沙门氏菌菌悬液各0.1 ml接种于被检培养基和对照培养基中，35条件下培养24h，进行促生长能力检查。取金黄色葡萄球菌菌悬液各0.1 ml接种于被检培养基和对照培养基中，35条件下培养24h，进行抑制能力检查。4.2.4 木糖赖氨基酸脱氧胆酸盐琼脂培养基适用性检查取乙副伤寒沙门氏菌菌悬液各0.1 ml分别涂布被检培养基和对照培养基平板上，在35条件下培养24h，进行促生长能力和指示特性检查。3.2.5三糖铁琼脂培养基适用性检查取乙副伤寒沙门氏菌菌悬液各0.1 ml分别涂布被检培养基和对照培养基平板上，在35条件下培养24h，进行指示能力检查。3.2.6阴性对照为确认试验条件符合要求，同时进行培养基阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。5. 试验结果被检培养基阴性对照结果： 表1麦康凯液体培养基适用性检查结果菌种类型被检培养基对照培养基A/B（%）被检培养基菌与对照培养基上的菌落落形态皿1皿2平均A皿1皿2平均B大肠埃希菌金黄色葡萄球菌表2麦康凯琼脂培养基适用性检查结果菌种类型被检培养基对照培养基A/B（%）被检培养基菌与对照培养基上的菌落落形态皿1皿2平均A皿1皿2平均B大肠埃希菌表3 RV沙门菌增菌液体培养基适用性检查结果菌种类型被检培养基对照培养基A/B（%）被检培养基菌与对照培养基上的菌落落形态皿1皿2平均A皿1皿2平均B乙型副伤寒沙门菌金黄色葡萄球菌表4木糖赖氨基酸脱氧胆酸盐琼脂培养基适用性检查结果菌种类型被检培养基对照培养基A/B（%）被检培养基菌与对照培养基上的菌落落形态皿1皿2平均A皿1皿2平均B乙型副伤寒沙门菌表5三糖