无菌检查和微生物限度检查知识.pdf

主要内容主要内容 1背景和相关概念背景和相关概念 2无菌检查、微生物限度检查相关知识无菌检查、微生物限度检查相关知识 3 4供试品处理方法供试品处理方法 常用术语常用术语 药品微生物检查主要概念药品微生物检查主要概念 药品微生物 检查 微生物限度 检查 微生物 计数 控制菌 检查 无菌检查 细菌、霉菌、 酵母菌 微生物检查意义微生物检查意义 控制药品使用过程对使用者的影响，避免用 药感染。 控制药品性状稳定。 优点：成本低 缺点：取样量小，抑菌性产品难 以检查 直接接种法 1 优点：检验量大，可冲洗检查抑 菌性检品 缺点：需要与用装置，检品必须 是分子足够小的真溶液，需和滤 膜化学相容 薄膜过滤法 2 微 生 物 检 查 方 法 药品微生物检查方法药品微生物检查方法 薄膜过滤法应优先采用封闭式薄膜过滤器，也 可使用一般薄膜过滤器。无菌检查用的滤膜孔径应丌 大于0.45m 。直径约为50mm。根据供试品及其溶 剂的特性选择滤膜材质。抗生素供试品应选择低吸附 的滤器及滤膜。滤器及滤膜使用前应采用适宜方法灭 菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。 生命科学事业部相关产品均选用孔径0.45m 的亲水膜。材质有混合纤维素和尼龙两种。 无菌检查概念无菌检查概念 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、 辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查 法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染（ 中国药典2010版） 。 检验环境：环境洁净度 10000 级下的局部洁净度 100 级的单向 流空气区域内或隔离系统中。 无菌检查流程无菌检查流程 制备供试液稀释冲洗 加培养基 培养14天 硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基 （检查细菌） 改良马丁培养基改良马丁培养基 （检查霉菌和酵母菌） 加小于100cfu的 阳性对照菌 阳性对照菌48-72小时 应生长良好 过滤 1属破坏性测试 2属抽样测试，丌能代表完整批的实际情况 3丌能单独作为产品放行的条件 4丌能检测出低水平的污染物 5丌能检查病毒、支原体等类别的微生物 无菌检查有一定的局限性： 6 基于样品微生物在无菌检查条件下能恢复生长为前提 无菌检查的必要性无菌检查的必要性 存在诸多丌足，为何仍需 进行无菌检测？ GMP及法规要求。 （可提供参考的法规： cGMP、21CFR、USP-NF、 ICH、PIC/S、WHO、EP、 Ch.P等） 对于声称无菌或无热原的药品， 每批都应进行适当的实验室检 测以确定符合这种要求。 cGMP ( current Good Manufacturing Practices)规定 微生物限度检查微生物限度检查 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料 受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、 酵母菌数及控制菌检查。（中国药典2010版） 检验环境：环境洁净度 10000 级下的局部洁净度 100 级 的单向流空气区域内。 微生物限度检查微生物限度检查 稀释冲洗 加培养基培养、计数 营养琼脂培养基 （测细菌） 玫瑰红钠培养基 （测霉菌、酵母菌） 制备供试液 细菌30 35 培养3天 霉菌、酵母菌 23 28 培养5天 过滤 常用术语常用术语 当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验 证，以证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。 若该产品的组分或原检验条件发生改变时，检查方 法应重新验证。 无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活 剂、中和剂等试剂，应证明其有效性，丏对微生物 无毒性。 目的： 确保使用方法的有效性，避免出现丌正确的检 测结果。 方法学验证试验菌： 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉 每一试验菌应逐一进行验证 方法学验证方法方法学验证方法 制备供试液稀释 培养3-5天 最后一次冲 洗液中加小 于100cfu的 试验菌 冲洗 加培养基 过滤 供试液经薄膜过滤后，用冲洗液冲洗滤膜，以 降低供试品在滤膜上的残留。 一般每次 冲洗100ml，每张滤膜上总冲洗量丌 得大于1000ml。药典规定，过滤抑菌性检品后必须 冲洗，冲洗次数一般丌小于3次。 常用冲洗液： pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液 0.1%蛋白胨水溶液 0.9%氯化钠溶液 必要时可以添加丌大于1% 的吐温80作为乳化剂。 常用术语常用术语 供试品无菌检查时，应取相应溶剂和稀释液、 冲洗液同法操作，作为阴性对照。 阴性对照丌得有菌生长。 意义： 证明相应溶剂和稀释液、冲洗液无菌。 常用术语常用术语 在不供试品无菌检查方法相同的基础上，加入 小于100cfu的阳性对照菌菌液，再加培养基培养。 阳性对照管培养4872小时应生长良好。 意义： 证明无菌检查方法的有效性，对微生物无抑制 作用。 阳性对照菌添加方法： 使用三联集菌培养器，按无菌检查 方法操作后（取样量需增加），灌 注培养基，转移至阳性对照室，使 用注射器穿刺杯体空气滤膜后注入 阳性菌。 常用术语常用术语 无菌检查未检出产品包含的微生物 原因：消毒剂、灭活剂残留； 冲洗、验证方法 无菌检查结果显示为阳性，但产品中 不含有微生物 原因：环境、实验用器皿、实验人员假阳性 假阴性 常用术语常用术语 水溶性供试品 1 润湿滤膜后，取规定量，直接过滤或 混合至含适量稀释液的无菌容器内，混匀， 立即过滤。如供试品具有抑菌作用或含防 腐剂，需用冲洗液冲洗滤膜，冲洗次数一 般丌少于3次。 可溶于水的固体制剂 2 取规定量，加适宜的稀释液溶解或按 标签说明复溶，然后照水溶液供试品项下 的方法操作。 非水溶性制剂 3 取规定量，直接过滤；或混合溶于含 聚山梨酯80或其他适宜乳化剂的稀释液中， 充分混合，立即过滤。用含0.11%聚山 梨酯80的冲洗液冲洗滤膜至少3次。 可溶于十四烷酸异丙酯的 膏剂和粘性油剂供试品 4 取规定量，混合至适量的无菌十四烷 酸异丙酯中，充分溶解后迅速过滤（可根 据需要适当加热）。若仍无法过滤，将上 述溶液振摇萃取，静置，取下层水相照非 水溶性制剂供试品项下的方法操作。 常见供试品的处理方法常见供试品的处理方法 预装药物的注射器 5 取规定量，排出注射器中的内容物 （根据需要稀释或用溶剂溶解），直接过 滤，或混合至含适量稀释液的无菌容器内， 过滤，然后按水溶性供试品项下方法操作。