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文档简介

克隆性基因重排在淋巴瘤诊断中的应用,分子和细胞遗传学异常,抗原受体基因的克隆性重排与类型相关的染色体异常,简要原理检测方法应用和策略注意事项,淋巴细胞表面受体,IG：IGH（14q32)IGL(2q12)(22q11)TCR:TCR14q11TCR7q32TCR7p15TCR14q11.2,IG和TCR基因结构及重排过程,胚系,各区片段数多重排的多样性抗体多样性,淋巴细胞发育过程中基因重排顺序,IG:H重排:IgH/缺失：IgH/TCR:：TCR：TCR,淋巴瘤中基因重排形式克隆性重排,不同的淋巴细胞相同的重排形式淋巴细胞单克隆性增生淋巴瘤诊断和鉴别诊断的分子指标,克隆性重排的检测方法,Southern杂交PCR法,特异性探针：胚系的特征性片段外另一不同大小的片段,Southern杂交,优点：敏感性较高可靠性高缺点：DNA量多（10ug)新鲜组织操作复杂时间长、成本高放射性同位素逐渐被PCR方法替代,PCR法,原理:VDJ重排后相互靠拢，用适当的引物可扩增出重排片段,新鲜、冻存、石蜡、显微切割或细胞学标本，不受DNA片段的影响，仅需要少量的DNA，时间短，敏感性高，是目前最常用的克隆性重排的检测方法。,引物的选择原则,引物位置：PCR产物长度10-15bp引物本身的长度0.05)表明TCR基因重排在LyP和CALCL的鉴别中无应用价值。,必须结合临床病史,Ig和TCR基因重排不一定是谱系的标志：某些T、B淋巴瘤有基因重排的交叉,T,B之间：不成熟的T或B相对频繁TCRab,TCRrd之间,少量淋巴细胞小标本或高负荷B细胞淋巴瘤中有少量反应性T细胞EBV或CMV感染免疫抑制患者淋巴结或外周血中TCR的某些组分重排占优势,重排多样性受限制,可出现寡克隆信号。假克隆和寡克隆信号表现：弱条带或两条以上条带辨别方法：多次重复，大小不同的条带只有那些可重复的相同大小的条带是可信的单克隆性条带,3.假克隆和寡克隆,淋巴瘤重排检出率不是100%假阴性原因：（1）早期未完成重排；有些类型淋巴瘤缺乏基因重排（2）引物不全（3）与其他基因重排、突变；（4）体细胞超突变(eg.MCLvsFL)（5）检测敏感性限制（6）所用检测技术分析技术（7）不合适的退火温度解决办法：多组引物组合，仔细分析,仅用一对引物时,5假阳性：技术原因；PCR法影响因素多，严格分区各种原因所致的假克隆或寡克隆,设计A,设计B,专门人员：完善技
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