孕前遗传学实验室流程和临床意义.ppt

孕前遗传学实验室流程和临床意义,医学遗传学实验围绕人外周血染色体制备、SCE观察分析、性状调查及皮纹分析等方面的工作，在掌握基本的实验方法及技能同时引导学生制定实验路线。在实验中有意识地培养同学们规范操作、仔细观察和收集数据、科学的归纳分析等严谨、实事求是的科学素养。,人外周血淋巴细胞染色体标本制备,实验一,实验目的实验原理实验试剂与仪器实验步骤注意事项结果分析作业及思考题,了解人类外周血淋巴细胞的培养方法。熟悉人类染色体的基本形态特点。掌握染色体标本的制备方法。,一、实验目的,二、实验原理,外周血中的淋巴细胞几乎都是处在G0期或G1期，一般情况下是不分裂的。当在培养基中加入植物血凝素（phytohemagglutinin,PHA）时，这种小淋巴细胞受到刺激后转化为淋巴母细胞，并开始进行有丝分裂。经过短期培养后，用秋水仙素处理、低渗、固定、滴片和染色，就可获得大量中期分裂相的细胞，制片后可以清楚地对染色体进行观察。,这种培养方法是Moorhead于1960年建立的。在人类遗传分析中普遍采用外周血培养的方法获取分裂的细胞，进而开展临床和基础遗传学的研究。这对于遗传疾病的检出以及遗传咨询等工作发挥了重要作用。,抽滤器、恒温水浴箱、离心机培养瓶、注射器、移液管、量筒RPMI1640、小牛血清、NaHCO3、生理盐水、肝素、1.0g/L秋水仙素溶液、低渗液（0.025MKCl）、固定液,三、实验试剂及仪器,1.植物血凝素(PHA)刺激外周血淋巴细胞从G0期返回正常细胞周期。2.秋水仙素阻止微管组装。中期染色体无法排列赤道板。抑制姐妹染色体的分离，将细胞停留在中期。目的:获得大量的中期细胞。,3.固定剂新配置的甲醇本实验用玻片法。,三、常规性状的调查,1.卷舌性状调查部分人能够卷舌：舌的两侧能够在口腔中向上卷成槽行，甚至卷成筒状。卷舌着受显性基因T控制。,图2卷舌1、有卷舌2、无卷舌,2.眼睑性状调查：人群中的眼睑可以分为单重眼睑（单眼皮）和双重眼睑（双眼皮）两种性状；一般认为双眼皮是受显性基因控制，位显性性状；单眼皮为隐性性状。,3.耳垂性状调查：人群中依个体不同，耳朵明显区分为有耳垂和无耳垂，有耳垂为显性性状，受一对等位基因控制，无耳垂的为隐性性状。,4.额前发际调查：有些人的额前的发际明显的在前额正中发际向下延伸呈峰形，成V字型（又称美人尖），属于显性；而额前发际基本属于平线的属于隐性。,图3前额中央发际有一三角形突出称美人尖1、有美人尖2、无美人尖,5.发式和发旋的调查：人群中发式有直发和卷发之分，其中直发为隐性性状，东方人多是此性状；卷发属于显性性状。人群中的发旋螺纹方向受遗传因素控制，顺时针方向为显性性状，逆时针为隐性性状。,6.拇指端关节外展的调查：人群中某些人的拇指的最后一节能够弯向桡侧，与拇指垂直轴线呈60度，该性状为纯合隐性性状。,图4拇指竖起时弯曲情形1、挺直2、拇指向指背面弯曲,7.达尔文结节的调查：人群中有些人的耳轮边缘上有一个（或2个及其以上）小的突起成为达尔文结节，该性状为显性性状。,1实验目的,（1）了解皮肤纹理的形成与遗传的关系（2）掌握皮纹的印取和皮纹的类型,四、人类皮纹的观察分析,皮肤纹理(dermatoglyph)简称皮纹。是指人体某些特殊部位，如手指、手掌、脚趾和脚掌等处皮肤上出现的纹理图形。它是由真皮乳头向表皮突起，形成的一条条凸起的乳头线，其上有汗腺开口，称嵴纹(ridge)；各嵴纹间凹下的部分称为沟，这些凸凹的嵴和沟就构成特定的指纹和掌纹。,2实验原理,一般认为，人的皮纹终生不变；每个人都有其特定的皮纹，故有种族和个体的差异，因此皮纹长期以来作为侦破案件的手段之一。大量的研究表明，某些遗传病，特别是一些染色体病、先天性代谢病和先天畸形等常伴有皮肤纹理异常，故皮纹检查可作为某些遗传病诊断的辅助指标。,3实验内容,(1)器材和试剂器材：放大镜、量角器、直尺、铅笔、红色印油(或黑色油墨)、人造海绵垫、搪瓷盘、八开白纸。试剂：2.5亚铁氰化钾KFe(CN)6水溶液、2三氯化铁(FeCl3)水溶液。,将红色印油适量地倒入瓷盘的海绵垫上，涂抹均匀，再将白纸平铺于桌面或玻璃板上，准备取印。受检者洗净双手，擦干后将手掌按在海绵垫上，使掌面获得均匀的印油(注意不要来回涂抹，印油不宜粘得过多)。,(2)操作步骤,取印时先将掌腕线放在白纸上，然后从后向前依掌、指顺序逐步放下，手指自然分开，适当用力按压手背，尤其是腕部、掌心及手指基部，以免漏印。提起手掌时，先将指头翘起，尔后是掌和掌腕面，这样便可获得满意的全掌皮纹。注意，取印皮纹时不可加压过重，不可移动手掌和白纸，以免使皮纹重叠或模糊不清。,滚动式印取指纹。将印好的左、右手掌纹纸移至桌边或玻板边缘，然后在对应的掌纹下方，由左至右依次按印10个手指指尖皮纹。印时，取印的指头伸直，其余四指弯曲，将手指由一侧向另一侧轻轻滚动(切勿来回滚动，以免图像重叠)，以便将指尖两侧皮纹印上，记下10个指尖的顺序。,(3)皮纹的观察,指纹类型嵴纹计数掌纹观察指、掌褶线类型,弓形纹,箕形纹,斗形纹,指纹类型,弓型纹弓形纹、蓬帐式弓型纹箕形纹尺箕、桡箕斗形纹环形斗、螺形斗、绞形斗,嵴纹计数,，,主要特征：指三叉点；轴三叉（t）；atd角；t距比,手掌纹,atd角：正常人的atd平均为41;t的位置移近掌心，则atd增大。atd45为t;在4556间以t表示;56以t”表示。,t距比：可能因年龄或者遗传病的原因使皮肤萎缩，导致atd角测量产生差异。故提出用t距比来表示三叉点t的位置。t距(百分)比=t距掌距100。我国正常人t距比在14左右；21三体患者为15.039.9；13三体患者大于40。,指、掌