间接血球凝集反应.ppt

第十四章血清学反应,血清学反应：抗原抗体在体外结合的反应，因实施反应的某些重要因素是含抗体的动物血清，故名血清学反应。血清学反应具有严格的特异性和较高的敏感性，因此可用抗原或抗体的已知一方检测未知的另一方，作为传染病的辅助诊断和微生物的鉴定。,一、凝集反应,1、直接凝集反应：细菌、红细胞等颗粒性Ag与相应Ig混合以后，在电解质参与下，经过一定时间Ag颗粒相互凝集形成肉眼可见凝集块。参与凝集反应的Ag称凝集原，Ig称凝集素。平板法和试管法,2、间接凝集反应,先将可溶性Ag或Ig吸附于一种与免疫无关的有一定大小的颗粒载体表面制成固相Ag或Ig，再与相应的待检Ig或Ag结合产生的反应。分为两类：间接血球凝集反应（HA）间接血球凝集抑制反（HI）,间接血球凝集反应（HA）阳性,间接血球凝集抑制反（HI）阳性阴性,二、沉淀反应,胶体状态的可溶性Ag（如细菌和寄生虫的浸出液、组织浸出液、培养滤液、动物血清等）与相应Ig混合后，经一定时间，形成肉眼可见的沉淀物。临床上常用于诊断炭疽、梅素、鼠疫、猪丹毒、气肿疽等传染病。沉淀反应分为以下三种：,实验管：4mm小管已知Ig层叠未知Ag交界面白色沉淀环对照管：4mm小管已知Ig层叠生理盐水交界面无沉淀环,1、环状沉淀反应（Ascoli反应）,2、絮状沉淀反应：,将Ag和相应在试管内或凹玻片上混匀，经过一定时间性，出现肉可见絮状或颗粒状不溶性沉淀物为阳性。如诊断梅毒的康氏反应，及用标准类毒素测定抗毒素血清效价的絮状试验等。,3、琼脂扩散试验,单相琼扩：将已知（1：10稀释），加入等量的1%琼脂（56）管（或平板）中，凝固后，于其上（打孔）加待检Ag（孔中），置37湿合感作，2-3h后可见白色沉淀带。双相琼扩：1%琼脂凝胶制成平板后，在上面按设计图形打孔，在孔内分别加Ag和Ig，放密闭湿盒中，将使之双相扩散而形成沉淀带。,单相琼扩双相琼扩含已知Ig琼脂被检血清（Ig）待检Ag已知Ag,三、补体结合反应,溶菌反应：某些细菌（霍乱弧菌）与相应的抗体混合以后，如有补体参加，则细菌发生溶解的反应，称溶菌反应。,溶血反应：红细胞与相应的抗体（溶血素）混合以后，如有补体以参加，则红细胞发生溶解的反应，称溶血反应。,补体的特点,1、补体是酶类物质，但均以无活性的前体形式存在于血清中2、动物血清中尤其以豚鼠血清含量最高，故多用豚鼠的新鲜血清作为补体的来源3、补体性质不稳定，易失活，经56度30分处理即灭活,4、补体本身没有特异性能与任何一组抗原抗体复合物相结合，一但结合后不再游离。5、补体不与单独的抗原或单独的抗体相结合。,补体结合反应的概念,补体结合反应（简称补反CFT）：是指在补体参加下，以绵羊红细胞（Ag）和抗绵羊溶血素（Ig）作为指示系统的抗原抗体反应。,补体结合反应的原理,补反包括两个系统五种成分：一是被检系统（溶菌系）中的已知Ag、待检Ig及仅供一组Ag-Ig系统反应的定量补体。二是指示系统（溶血系）中的红细胞和溶血素。,首先是溶菌系统的抗原与抗体复合物与补体相互混合后产生的反应。其次为了测知溶菌系统中补体是否被利用，再加入溶血系（绵红细胞和抗绵溶血素）作为指示系统，以观察因补体游离所产生的溶血情况。如果反应的结果是不溶血为诊断阳性，发生了溶血为诊断阴性。,操作与结果,操练时，分两步进行：将待检系统的Ag、Ig与补体三种成加入试管内，于37度水浴作用30分钟，然后加入指示系统，于37水浴作用30分钟，观察结果。结果观察：不溶血为诊断阳性，发生溶血为阴性,四、中和实验,病毒或毒素与相应Ig以一定比例混合后，经过一定时间，病毒丧失对易感动物的致病性，或消除毒素在试管内的溶血现象，谓之中和反应。该试验既可在体外进行，也可在体内进行，可利用小动物、鸡胚、活细胞等作试验。操作如下：,五、免疫荧光法,荧光素：如异硫氰酸荧光素（FITC）、丽丝胺罗丹明B（RB200）等受紫外线照射后可发荧光（FITC为绿色，RB200为玫瑰红色）。荧光Ig：将荧光素（染料）连接在提纯的Ig分子上，这种用荧光素标记的Ig。,免疫荧光法反应原理,荧光素与Ig分子结合后，并不改变其与相应Ag结合的特性，当用这种荧光Ig对受检标本染色后，在荧光显微镜下观察，可见暗视野中闪烁荧光的细菌等，根据这种现象便能对标本中相应Ag进行鉴定和定位。,免疫荧光技术示意图,被检Ag+荧光Ig荧光复合物被检Ag+标准Ig+荧光抗Ig