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文档简介

气孔运动观测实验一、材料选择:10片叶的拟南芥(移栽以后11-13d左右,大概是3周大小的苗子)二、叶子的选择;选择次新一轮的叶片,要求大小,状态一致。如果叶片上有褶皱等不健康的状态均不进行选择。三、所需准备的物品:2.0离心管,冷光源,牙签,镊子,显微镜四、具体操作步骤:1、选取整齐一致的拟南芥植株,选取同一轮叶片中大小,状态一致的叶片,带叶柄剪下。2、叶片背面朝上,放入表皮条缓冲液中(2.0离心管),浸入缓冲液液面以下。每个管中一片叶子,且不同管中叶片的液下深度要求一致。3、将不同的株系均匀置于冷光源下,照射2-3h。4、撕取叶片中脉一侧的下表皮进行观测,看气孔是否已经完全打开。一般2.5-4之间算是完全打开,最好是3-4。5、若气孔已经完全打开,则加入ABA进行处理2-3h。6、撕取叶片中脉另一侧的下表皮进行观测,一般野生型的气孔关闭到1.0以下才算是处理成功,否则需要提高ABA浓度。注意:1、适合气孔观察的拟南芥只有几天,叶片太老或太嫩都不合适,且容易撕下叶肉。一般有叶肉撕下的部分气孔开度都不够精准。2、一般一个表皮条只观测最中间的部分,四周的不精确,叶柄部位的气孔也不在统计范围之内。3、操作时间太长会增加误差,所以对于熟练的人来说,一次最多只观察5个样本。4、一个样本一般观察2-3个视野,每个视野先大概浏览一下是否整齐,然后记录下气孔开度。视野中所有气孔开度都记录下来。5、显微镜一般使用40倍镜,比较精确。6、因为叶片厚度不均,所以应该不停的调焦,以保证正在观测的气孔达到最清楚的状态。每个人的标准不同,所以应该由一个人完成,以避免人为误差。7、因为植物气孔的运动也存在一定的节律,所以经验性的操作时间是早上9:00开始取叶片11:30-12:00 ABA 处理比较合适,避免在中午的时候操作。(针对早上6:00开灯的16/8h光照情况)8、当不知道植株表型时可以先用10M-25M ABA处理,2-2.5 h 后气孔关闭为1 时即可。9、A

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