中国药典2019年版显微鉴别法.ppt

显微鉴别法,中药材及中药制剂的显微鉴别,显微鉴别系指用显微镜对药材的（饮片）切片、粉末、解离组织或表面制片及含药材粉末的制剂中药材的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。鉴别时选择有代表性的供试品，根据各品种鉴别项的规定制片。制剂根据不同剂型适当处理后制片。,光学显微镜的构造,1.机械部分、2.照明部分、3.光学放大部分,1.机械部分：1）、镜座：基座，稳定和支持整个镜体。2）、镜柱：支持镜臂。3）、镜臂：支持镜筒，拿镜时握持此臂。4）、镜筒：5）、物镜转换器：物镜孔，可安装不同放大率的物镜。6）、镜台：7）、调节器：分粗调和细调，细调在一圈范围内调,2、照明部分：1）、反光镜(光源)：强时用平光镜，弱时用凹面镜。2）、聚光器3）、光圈光阑。,3、光学放大部分1）、目镜：5X，10X，15X，内可放测微尺2）、物镜：低倍，镜筒短，筒径粗，5X。高倍，镜筒长，筒径细，40X，45X。油镜：镜筒最长，80X，85X。,光学显微镜的使用,（一）、低倍镜的用法1）、取镜：注意小心平稳轻放。2）、准备：3）、对光：4）、上片：注意有盖玻片的向上，注意取盖玻片时的拿法。5）、调节物距：注意先把低倍镜调至距玻片0.5厘米的样子粗调然后缓慢使物镜上调，直至视野里出现可见物。注意两个要领：一是慢，二是距离只允许调大不允许调小。标本片与物象移动方向相反。如果调过了必须从头再来一次，直至视野里出现物象。,（二）、高倍镜的用法用高倍镜的方法须在低倍镜取像的情况下，换高倍镜头，调节微调旋钮直至看清物象。调节范围在一圈以内。,显微镜的维护,取镜时应一手紧握镜臂，一手平托镜座。安放好的显微镜就不要随意搬动。使用前后，检查镜头和镜体，严禁随意拆卸。保持清洁，避免灰尘和潮湿。避免阳光直射。远离挥发性和腐蚀性化学试剂。镜筒下降时，眼睛一定要看着物镜。使用显微镜时，一定要稳重、谨慎、轻拿轻放。显微镜不要放在实验桌的边缘，以防跌落地面。实验完毕，把显微镜擦拭干净。再转动镜头转换器，把两个物镜偏到两旁。最后把显微镜放进镜箱里，送回原处保存。,显微测微器的使用,显微测微尺是用来测量细胞在显微镜下长度的工具，由目镜测微尺和镜台测微尺组成，两尺配合使用。,1.目镜测微尺放在目镜筒内的一种标尺，为一个直径1822mm的圆形玻璃片，中央刻有精确等距离的平行线刻度，常为50格或100格,2.载物台测微尺在特制的载玻片中央粘贴一刻有精细尺度的圆形玻片。通常将长1mm（或2mm）精确等分成100（或200）小格，每1小格长为10um,用以标定目镜测微尺,3.目镜测微尺的标定用以确定使用同一显微镜及特定倍数的物镜、目镜和镜筒长度时，目镜测微尺上每一格所代表的长度。,取载物台测微尺置显微镜载物台上，在高倍物镜（或低倍物镜）下，将测微尺刻度移至视野中央。将目镜测微尺（正面向上）放入目镜镜筒内，旋转目镜，并移动载物台测微尺，使目镜测微尺的“0”刻度线与载物台测微尺的某刻度线相重合，然后再找第二条重合刻度线，根据两条重合线间两重合线间两种测微尺的小格数，计算出目镜测微尺每一小格在该物镜条件下相当的长度（um），,如目镜测微尺77小格（077）与载物台测微尺的30小格（0.71.0）相当，已知载物台测微尺每一小格的长度为10um。目镜测微尺每一小格长度为：10um*30/77=3.8um。当测定时要用不同的放大倍数时，应分别标定。,4.测量方法将需测量的目的物显微制片置显微镜载物台上，用目镜测微尺测量目的物的小格数，乘以上述每一小格的微米数。通常是在高倍镜下测量，但欲测量较长的目的物，如纤维、导管、非腺毛等的长度时，需在低倍镜下测量。记录最大值与最小值（um），允许有小量数值略高或略低于规定。,药材显微制片,1、横切片或纵切片制片取供试品欲观察部位，经软化处理后，用徒手或滑走切片法，切成1020m的薄片,必要时可包埋后切片。选取平整的薄片置载玻片上，根据观察对象不同，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他试液12滴，盖上盖玻片。必要时滴加水合氯醛试液后，在酒精灯上加热透化，并滴加甘油乙醇试液或稀甘油，盖上盖玻片。,粉末制片,供试品粉末过四号筛，挑取少许置载玻片上，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他适宜的试液，盖上盖玻片。必要时，按上法加热透化。,表面制片,将供试品湿润软化后,剪取欲观察部位约4mm2，一正一反置载玻片上，或撕取表皮，加适宜的试液或加热透化后，盖上盖玻片。,解离组织制片,将供试品切成长约5mm、直接约2mm的段或厚约1mm的片，如供试品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在，采用氢氧化钾法，若供试品质地坚硬，木化组织较多或集成较大群束，采用硝铬酸法或氯酸钾法。,1氢氧化钾法置供试品于试管中，加5氢氧化钾溶液适量，加热至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去碱液，加水洗涤后，取出少量置载玻片上，用解剖针撕开，滴加稀甘油，盖上盖玻片。,2硝铬酸法置供试品于试管中,加硝铬酸试液适量，放置，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。,3氯酸钾法置供试品于试管中，加硝酸溶液(12)及氯酸钾少量,缓缓加热，待产生的气泡渐少时，再及时加入氯酸钾少量，以维持气泡稳定地发生，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。,花粉粒与孢子制片,取花粉、花药（或小的花朵）、孢子或孢子囊群（干燥供试品浸于冰醋酸中化），用玻璃棒研碎，经纱布过滤离心管中，离心,取沉淀加新鲜配制的醋酐与硫酸(91)的混合液13ml，置水浴上加热23分钟，离心，取沉淀，用水洗涤2次,取沉淀少量置载玻片上，滴加水合氯醛试液，盖上盖玻片，或加50%甘油与1%苯酚各12滴，用品红甘油胶取明胶1g，加水6ml，浸泡至溶化，再加甘油7ml，加热并轻轻搅拌至完全混匀，用纱布过滤至培养皿中，加碱性品红溶液（碱性品红0.1g，加无水乙醇600ml及樟油80ml，溶解）适量，混匀，凝固后即得封藏。,磨片制片,坚硬的动物、矿物类药，可采用磨片法制片。选取厚度约12mm的供试材料，置粗磨石（或磨砂玻璃板）上，加适量水，用食指、中指夹住或压住材料，在磨石上往返磨砺，待两面磨平，且厚度约数百微米时，将材料移置细磨石上，加水，用软木塞压住在材料上，往返磨砺至透明，用水冲洗，再用乙醇处理和甘油乙醇试液装片。,含药材粉末的制剂显微制片,按供试品不同剂型，散剂、胶囊剂（内容物为颗粒状，应研细），可直接取适量粉末；片剂取23片，水丸、糊丸、水蜜丸、锭剂等（包衣者除去包衣），取数丸或12锭，分别置乳钵中研成粉末，取适量粉末；,蜜丸应将药丸切开，从切面由外至中央挑取适量样品或用水脱蜜后，吸取沉淀物少量。根据观察对象不同，分别按粉末制片法制片（15片）。,细胞壁性质的鉴别,1木质化细胞壁加间苯三酚试液12滴，稍放置，加盐酸1滴,因木质化程度不同,显红色或紫红色。2木栓化或角质化细胞壁加苏丹试液，稍放置或微热，显橘红色至红色。3纤维素细胞壁加氯化锌碘试液，或先加碘试液湿润后，稍放置,再加硫酸溶液(3350)；显蓝色或紫色。4硅质化细胞壁加硫酸无变化。,细胞内含物性质的鉴别,1淀粉粒（1）加碘试液，显蓝色或紫色。（2）用甘油醋酸试液装片，置偏光显微镜下观察,未糊化的淀粉粒显偏光现象；已糊化的无偏光现象。,2糊粉粒（1）加碘试液，显棕色或黄棕色。（2）加硝酸汞试液,显砖红色。材料中如含有多量脂肪油，宜先用乙醚或石油醚脱脂后进行试验。,3脂肪油、挥发油或树脂（1）加苏丹试液，显橘红色、红色或紫红色。（2）加90乙醇，脂肪油和树脂不溶解（篦麻油