免疫室常见问题结果分析案例分析.ppt

免疫室常见问题结果分析,例一：不同方法梅毒结果不一致？,原因一：检测物质不同,梅毒螺旋体侵入人体后产生两种抗体：1.抗心磷脂抗体：即非特异性抗体、反应素RPR、TRUST2.抗梅毒螺旋体抗体：IgG、IgMTP-ELISA、TPPA,原因二：敏感度和特异性不同,TRUSTTP-ELISATPPA,真实的梅毒抗体,特异性低特异性中特异性高敏感性高敏感性高敏感性中,原因三：抗体在体内持续时间不同,特异性抗体感染2周(14天)后产生特异性IgM抗体,四周以后达到高峰，不能通过胎盘；感染3周后出现特异性IgG抗体,4-5周达到高峰，可保留终生，可通过胎盘。,原因三：抗体在体内持续时间不同,非特异性抗体感染3-4周（约30天后）或硬下疳出现1-2周后产生非特异性IgM抗体，很快达到高峰，以抗心磷脂抗体/反应素为主，治疗后可消失。第40天开始产生出现非特异IgG抗体，很快上升，1年后达到高峰，治疗后可消失。RPR和TRUST等方法可检出：57周或硬下疳后23周完全治愈的早期梅毒可再感染。,梅毒抗体的产生时间与波峰图,原因四：假阳性与假阴性的出现,假阳性反应：技术性：标本的污染溶血操作失误试剂质量差或过期,原因四：假阳性与假阴性的出现,生物学假阳性：某些疾病：结核、疟疾、肝病、红斑狼疮、流感、肺炎、类风湿性关节炎、风湿性心脏病、风疹、系统性硬化症等，疾病发展过程中释放心磷脂，到血液中假阳性（多见于TRUST）。生理机能发生变化：少数老年人、孕妇可发生生物学假阳性，1%正常人可能出现阳性。但这类患者血清反应滴度低，很少超过1：8；而且半年内渐转成阴性。,原因四：假阳性与假阴性的出现,假阴性反应：在梅毒螺旋体感染后12周内可呈阴性反应；梅毒螺旋体感染不久即开始治疗；敏感性低的梅毒血清试验易出现阴性反应。,原因四：假阳性与假阴性的出现,假阴性反应：在二期梅毒或三期梅毒（较多）时TRUST试验也可出现阴性反应，即前带现象（血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果）。,原因五：治疗后的血清反应,治疗后血清阴转；血清滴度降低不阴转，血清抵抗（血清固定）：（1）体内仍有潜在的活动性病变存在（如神经系统梅毒）；（2）病人体内的免疫力持久(反应素长久存在)；（3）对抗梅药物有耐药性或剂量不足。复发再感染。,非特异性梅毒抗体治疗前后结果解释示意图,早期,晚期,一期,二期,早期潜伏,晚期潜伏,三期,治疗前治疗后,阳性,阴性,特异性梅毒抗体治疗前后结果解释示意图,早期,一期,二期,早期潜伏,晚期,晚期潜伏,三期,治疗前治疗后,阳性,阴性,临床解释,三种方法联合检测,TRUSTTP-ELISATPPA,减少假阳性，假阴性,梅毒检测流程图,A1(TP-ELISA),A1+,A1-,A2(TPPA）,A1+A2-,A1+A2+感染：既往或现在,A3（TRUST）,A1+A2+A3+梅毒现症感染结合临床表现,A1+A2+A3-结合临床表现，考虑三期梅毒或者是既往感染,美国2009年指南,例二：HCV不同方法结果不一致？,某某某，男，29岁，6月17日，因十二指肠球部溃疡A1和糜烂性胃炎入院，6月21日检测传染病四项（军队医改，ELISA），HCV定性阳性（已复查，双孔）,胶体金法阴性。乙肝两对半五项全阴，肝功各项指标正常。,例二：HCV不同方法结果不一致？,7月1日，抽血重测HCV（发光定量），HCV定量阴性，同天，HCV-RNA送金域检测，HCV-RNA阴性。将7月1日标本再次使用ELISA法进行检测，HCV定性阳性（双孔）。,HCV不同方法结果不一致？,ELISA法测抗-HCV假阳性,原因一：类风湿因子（RF）的干扰。RF可大量存在于类风湿性关节炎及某些患有自身免疫性疾病患者的血液中，多为IgM，RF有一个特点，可变性IgG产生非特异结合。因此，在抗-HCV测定中，如血清标本中存在RF，则其可以与酶标的IgG结合，而出现假阳性反应。,ELISA法测抗-HCV假阳性,原因二：高免疫球蛋白血症抗-HCV的间接法，最后一步加的是酶标的抗人IgG，血清中的高浓度的非特异IgG，可能会非特异地吸附于固相载体表面，从而与后加的酶标抗人IgG结合，造成假阳性。,ELISA法测抗-HCV假阳性,原因三：标本中超氧化物歧化酶（SOD）的干扰用于包被固相的重组HCV抗原片段C-100，如为酵母菌产生的SOD融合蛋白，则标本中SOD升高可能会造成抗-HCV假阳性结果。,ELISA法测抗-HCV假阳性,原因四：用于固相包被的HCV基因工程抗原不纯。,ELISA法测抗-HCV假阳性,有文献报道，44例HCV抗体阳性中有8例（17.5%）HCV-RNA为阴性，其这部分HCV抗体标本S/CO值无规律可循（S/CO在2.7-15.3之间），肝功各项指标正常，推测这些患者可能为既往感染。目前，美国已经采用CDC的新导则，现在仅对筛查试验S/CO比值3.8的样本做PCR确诊实验。,案例三：PNP结果是否与临床不符？,某某某，男，11岁，右前臂肿物入院，查传染病四项全阴，生化ALT:17U/L、AST：16U/L,ALP:247.7U/L（45-125U/L）肝功能其他指标正常。肝纤四项除III型前胶原N端肽P（PNP）为350.2ng/ml（120ng/ml）外，其他各项正常。那么，PNP结果是否可以直接报告临床？,肝纤四项检测人群,慢性肝病患者都应做肝纤维化的检查：1、感染性肝病（慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、慢性丁型肝炎患者）；2、酒精性、化学毒物或药物性慢性肝病患者；3、遗传代谢肝病（肝豆状核变性等）；4、自身免疫性(自身免疫性肝炎)。,PNP,研究证实血清PCNP含量与肝炎症，坏死和肝纤维化有关，但以肝纤维化相关为主，血PNP水平与肝纤维化程度呈正相关,是反映肝纤维增生的指标。,PNP,血清PCNP是反应成人肝纤维化活动的良好指标，可弥补肝活检不能动态观察等不足。PCNP对于诊断儿童肝疾病没有意义，它随儿童年龄的增长有所升高。,待解决疑问？,问题一：外斐试验：OXk总是阳性？（天润）,待解决疑问？,问题二：ENA多肽谱酶（碱性磷酸酶）误加入血管炎膜条（该膜条已加入HRP酶）中，立即倒去，冲洗三次后重新加对应酶，结果出现假阳性，为什么？,甲苯胺红不加热血清试验(TRUST),原理：抗原以胆固醇晶粒为载体，包被上心磷脂或卵磷脂，构成VDRL（抗类脂）抗原颗粒。再把该抗原颗粒结合到甲基胺红上，当抗原与血清中反应素以一定的比例相互作用时，出现红色凝集颗粒。,梅毒螺旋体抗体测定(TP-ELISA),特点：检测总抗体（1）用作筛查和确认试验：敏感性、特异性高（2）不用于