人手及物体表面菌检验方法的验证.doc

人手及物体表面菌检验方法的验证一、 验证目的人手及物体表面菌检验采用的是棉签擦拭法和RODAC平板接触法，计算其回收率确定该方法是否适合用于人手及表面菌的检验。二、适用范围适用于人手及物体表面菌检验方法验证的实施。三、职责品保部负责验证方案的起草、取样及对样品的检验，及验证记录，并加以分析后，起草验证报告。品保部主管负责验证数据及结果的审核。四、参照标准GB/T19973.1-2005五、验证内容1. 仪器设备及试剂15ml试管、洗耳球、酒精灯、灭菌锅、1.0ml移液管、RODAC平板2验证用菌种金黄色葡萄球菌（ATCC6538） 第 代大肠杆菌（ATCC25922） 第 代铜绿假单胞菌（ATCC27853） 第 代3.操作步骤3.1菌液的制备取经3035培养1824小时的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌与铜绿假单胞菌的营养琼脂斜面培养物，用0.03mol/L的磷酸盐缓冲液（PBS）洗下，10倍稀释至10-610-7约为50100cfu/ml的菌悬液备用。3.2人手及物体表面接种分别向无菌物体表面接种1ml金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的菌悬液，接种面积小于25cm2，并在层流下进行干燥。验证结束后用75%的酒精擦洗染菌表面。3.3操作方法3.3.1RODAC平板接触法将无菌的RODAC平板的培养基部分直接平帖试验对象上以一定的力压在测试点上，维持10秒钟后盖上平板。置于2931倒置培养72小时后，置于室温下倒置培养72小时后计数。用同样的方法重复操作四次。3.3.2棉签擦拭法将经灭菌的内径为5cm5cm的灭菌规格板放在试验物体表面，用一浸有灭菌生理盐水的棉签在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内。摇匀取1mL倒平板，每次倒三个平板。在 32下倒置培养48小时后计数。用同样的方法重复操作四次。4.试验要进行三次独立操作，每次试验的回收率要70%方可认为该方法合适。六、试验结果金黄色葡萄球菌试验结果处理RODAC平行计数擦拭法平行计数123平均菌落数123平均菌落数12345 全部菌落数备注：RODAC平板的计数结果是培养六天后的直接点数。棉签擦拭法的结果是每次试验三个平板的平均菌落数再乘以稀释倍数。根据表中的数据，取下率计算如下：RODAC法： 擦拭法：第一次处理： 第一次处理：总数： 总数： 回收率（%）： 回收率（%）：平均回收率： 范围 平均回收率（%）：范围结果：由试验结果可知用金黄色葡萄球菌做试验菌株时RODAC法和擦拭法的回收率均70%绿脓杆菌试验结果处理RODAC平行计数擦拭法平行计数123平均菌落数123平均菌落数12345全部菌落数备注：RODAC平板的计数结果是培养六天后的直接点数。棉签擦拭法的结果是每次试验三个平板的平均菌落数再乘以稀释倍数。根据表中的数据，取下率计算如下：RODAC法： 擦拭法：第一次处理： 第一次处理： 总数： 总数： 回收率（%）： 回收率（%）： 平均回收率（%）：范围 平均回收率（%）：范围结果：由试验结果可知用绿脓杆菌做试验菌株时RODAC法和擦拭法的回收率均70%大肠杆菌试验结果处理RODAC平行计数擦拭法平行计数123平均菌落数123平均菌落数12345全部菌落数备注：RODAC平板的计数结果是培养六天后的直接点数。棉签擦拭法的结果是每次试验三个平板的平均菌落数再乘以稀释倍数。根据表中的数据，取下率计算如下：RODAC法： 擦拭法：第一次处理： 第一次处理： 总数： 总数： 回收率（%）： 回收率（%）： 平均回收率（%）： 范围 平均回收率（%）： 范围结果：由试验结果可知用大肠杆菌做试验菌株时RODAC法和擦拭法的回收率均70%七、结论通过三次独立试验，金黄