一种新的肉苁蓉甙类化合物的分离方法.docx

一种新的肉苁蓉甙类化合物的分离方法张立国 3郑荣倪力军(华东理工大学化学与制药学院 上海 200237)摘 要 简单介绍一种从肉苁蓉中提取得到肉苁蓉甙类化合物的方法 ,避免了乙酸乙酯和正丁醇的萃取 ,便于工业化应用 ,同时还可获得纯度较高的甜菜碱 。关键词 肉苁蓉 ;肉苁蓉甙正丁醇相经减压浓缩后过甲醛系树脂 , ( 水洗 ,乙醇洗) 收集乙醇洗脱部分浓缩 ,再过聚酰胺柱 ,水洗 ,乙 醇洗 ,得到总甙类化合物 。然后再用硅胶柱 、葡聚糖l h220 柱分离得到单个苯乙醇甙类化合物 。 通过这个方法我们总结以下几点 : 1) 乙酸乙酯萃取的目的是除脂 ,这些脂质可用醇提水沉及絮凝等步骤除去 。也就是说 ,前面可省去乙酸乙酯的萃 取 。2) 正丁醇萃取的目的是将肉苁蓉甙类化合物从 水相转移出来 。但是 ,由于正丁醇表面张力很小 ,用它直接进行萃取需要很长时间 才 能 和 水 相 分 层 完 全 ,比较费时 。考虑到苯乙醇甙类化合物和黄酮结构相似 ,借鉴黄酮分离工艺 ,可以用大孔树脂将水浮 过滤后的滤液直接分为水洗液和 70 %醇洗液 ,肉苁 蓉甙类化合物在醇洗部分 。3) 聚酰胺柱的目的是使鞣质等杂质形成不可逆吸附 ,而有效成分可被合适 的洗脱液洗脱下来 。采用水浮后絮凝的方法即可以 除去大部分的鞣质 ,从而可以省去柱层析这一相对繁琐的步骤 。事实上 ,如果大孔树脂洗脱时收集合 适量的醇洗液 ,也可除去鞣质 。因为鞣质等吸附较 强 ,总是较后才会被洗脱下来 。据此 ,本文提出一种新的分离肉苁蓉甙类化合物的方法 。肉苁蓉是列当科植物肉苁蓉的干燥肉质茎 ,味甘性温 ,是传统常用的补益中药 ,具有补肾益精 ,润 肠通便的功能 。在历代增力中药处方中其出现率占 第一位 ,而在抗老防衰类方剂中仅次于人参占第二 位 。国内外学者对其化学成分及药理作用进行了广 泛研究 ,1985 年 , 日本学者佐藤调 等 证 明 以 肉 苁 蓉 甙为主要成分的 cs25 部分含有对抗悬吊应激负荷 所致雄性小白鼠性及学习行为低下的活性成分1 。 此类化合物除作为性功能障碍 、健忘症的治疗剂外 , 还对身心疾病具有预防和治疗作用 ,属于低毒安全 的功能改善药物2 。1993 年 ,堵年生等通过实验观 察到肉苁蓉总甙可增强小鼠红细胞内 sod 活性 ,降 低血清 mda 含 量 , 并 提 高 肝 、肾 组 织 dna 、rna 的 含量 ,从而减慢体内脂质过氧化速率 ,增强抗氧化能 力 ,减少自由基对核酸等生物大分子的损伤 ,提示肉 苁蓉总甙可以提高机体防御能力 ,增强免疫功能 ,从 而延缓衰老3 ; shigetoshi kadota 等在其文章中指出 ,这 种 活 性 与 羟 基 的 数 目 及 其 立 体 结 构 有 关 系4 。 hiroshi sasaki 则在其文章中指出 , 苯 乙 醇 甙 类 可 增 强溶血素和 pfc 值 ,对机体的非特异性免疫功能具 有增强作用 ,并提及此类成分具有抗菌及抑制 52脂 肪氧合酶等活性5 。国外学者早在 1984 年就开始肉苁蓉甙类化合 物的研究 。目前国内报道的有关肉苁蓉甙类化合物 的分离基本上都是基于文献1 方法 ,只是硅胶柱层 析分离单个组分时所用的洗脱 剂 配 比 有 所 区 别 而 已 。其主要步骤为 : 50 %乙醇提取液浓缩后混悬于 水中 ,用乙酸乙酯萃取后水层再用正丁醇萃取 。取1 实验部分111原料试剂和仪器实验药材购自顺天堂国药号 ,大孔树脂为 dm2130 ,阳离子树脂为 732 型苯乙烯系 , 絮凝剂由华东 理工大学天然药物制剂研究室制备 , 使用前用 1 %醋酸配成 015 % ( w/ w) 的溶液 。tu21800pc 紫外分 光光 度 计 , nicolet magna2ir550 红 外 光 谱 扫 描 仪 ,500m 核磁共振仪 。112实验步骤用如上所述硅胶柱及葡聚糖 l h220 柱层析 ,用收稿日期 :2001203226修回日期 :20012052253 通讯联系人 ( corresponding author)56天然产物研究与开发vo1. 13 no . 4氯仿2甲醇2水系统进行洗脱 , 可进一步 得 到 各 个 单体甙类化合物 。具体步骤如图 1 所示 。结果与讨论对得到的总甙类化合物我们做了 hplc 检测 , 条件为 : c18 柱 ,甲醇 : 2 %醋酸水溶液 - 3565 为流 动相 ,334 nm 作为 uv 检测波长 , 流 速 112 ml/ min 。 其中 ,麦角甾甙 含 量 高 达 18 % 20 % , 其 它 甙 类 化 合物的鉴别要用梯度洗脱的条件来获得6 ,这里不 再详述 。色谱图如下所示 :对此混合物做了 uv 、ir 及 nmr 谱 图 ( 结 构 以 麦角甾甙为例) 。其 uv 谱图显示在 220 nm ,240nm ,290 nm ,335 nm 附近有吸收 ; 其 ir 谱图表现为 3400cm - 1 (羟基吸收峰) , 1700 cm - 1 ( 羰基吸收峰) , 16001450 cm - 1 (苯环) ,1625 cm - 1 ( 双键) ; 由于是甙类 混合物 ,所以其 nmr 谱图中存在除麦角甾甙以外的 其它甙类的各个质子氢 ,具体表现在 1110 (鼠李糖上的 ch3) ,2179 (ar2c h22ch22) ,41294138 ( 葡萄糖2图 1 肉苁蓉总甙分离流程图fig. 1the separation process of gcs端基 c 上的 h) ,5118 ( 鼠李糖端基 c 上的 h) ,6128(ar2ch = c h) ,614711 (苯环上的 h) ,7158 (ar2c h= ch2) 。这些数据与文献报道一致7 - 9 。图 2fig. 2总甙类化合物色谱图the chromatogra m of gcs结 论综上 ,我们可得到如下结论 : (1) 用此方法可省 去乙酸乙酯和正丁醇两步萃取 ,适合于工业化的需 要 。乙酸乙酯在水中约有 8 %的溶解度 , 采用萃取 的方法一方面造成量的浪费 ,另一方面不利于环保 ; 正丁醇和水相的分层又极为消耗时间 ,萃取的方法 在工业化时操作难度较大 。采用本文提出的方法就 可使肉苁蓉甙的分离过程大大简化 ,缩短实验周期 。 (2) 本法采用絮凝的方法 ,沉淀颗粒大的容易过滤 , 较好地保留了有效成分 。絮凝时水浮液浓度为 143图 3 麦角甾甙结构式fig. 3 the structure of acteosidevo1. 13 no . 4郑 荣等 :一种新的肉苁蓉甙类化合物的分离方法57养命酒公司 1 公开特许出愿沙录 1632198627 ,632198623堵年生等 1 肉苁蓉总甙的抗脂质过氧化作用及抗辐射作 用 1 中国中药杂志 ,1997 ,22 (6) :364shigetoshi kadota et al . antioxidative effects of pheny2lethanolds from cistanche deserticola . biol . pharm. bull . 1996 ,19 (12) :1580hiroshi sasaki et al . immunosuppressive principles of rehman2nia glutinose var. hueichingensis. planta medica ,1989 ,55 :458 屠鹏飞等 1 肉苁蓉类生物中苯乙醇甙类成分的 rp2hplc 分析 1 药学学报 ,1997 ,32 (4) :294hiromi kobayashi et al . isolation and structures of new phenyl2propanoid glycosides ,cistanosides a and b. chem pharm bull ,1984 ,32 (8) :3009hiromi kobayashi et al . isolation and structures of two new phenylpropanoid glycosides ,cistanosides c and d. chem pharm bull ,1984 ,32 (10) :3880hiromi kobayashi et al . isolation and structures of two newphenylpropanoid glycosides ,cistanosides e and f. chem pharmbull ,1985 ,33 (4) :1452(生 药 量 药 液) , 絮 凝 剂 用 量 为 011 % 012 % ( v/v) ,絮凝时溶液酸度为 45 ,温度为 5060 。絮 凝后静 置 的 方 法 可 除 去 鞣 质 及 一 些 脂 溶 性 物 质 。(3) 从佐滕调等的文献1 进行分析可知 ,疗效较好的cs25 ( 20 mg/ kg) 、acteoside 及 cistanside a 、c ( 各 10 mg/ kg) 的 用 药 剂 量 相 当 于 生 药 量 分 别 为 1514 、76 、83 、166 (g/ kg) 。即用药剂量的减少是以生药量的增大为代价的 ,说明做到总甙类这一步对于一般的用 药剂量要求来说已经足够了 。本法所得总甙类的量 为生药量的 1 % ,若按同样的用药量来算 ,总甙类 20mg/ kg 仅相当于生药量 2 g/ kg ( 生药量 的 减 少 不 排 除和不同产地的肉苁蓉所含有效成分的含量本身有 所不同有一定的关系) 。当然 ,进一步分离得到单体 也是可以的 ,但将会增大实验成本 。(4) 从所得各种 谱图情况来看 ,本方法所得的总甙类化合物与文献报道一致 ,证明确实有效可行 。进一步柱层析可得 到各种单体甙类 ,而且采用本法可同时获得较高纯 度的甜菜碱 。23456789参考文献1 佐滕调 ,他 1 药学杂志 (日) 11985 ,105 (2) :1131a new separatio n method of p henyl propanoid glycosid esfo r cis tan c h e d es er ti colazheng rong ,zhang li2guo ,ni li2jun( college of chemistry and pharmacology , east china university of science and technology ,shanghai 200237 ,china)abstracta simple separation met