细菌转化实验原理和操作步骤.doc_第1页
细菌转化实验原理和操作步骤.doc_第2页
细菌转化实验原理和操作步骤.doc_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

细菌转化实验原理和操作步骤转化（ transformation ）是指一段同源或异源的 DNA 转入受体细胞并得到表达的水平基因的转移过程，是现代分子生物学研究和基因工程不可缺少的重要技术。关键词：细菌转化细菌转化一 实验目的 1 以 pGLO 质粒转化大肠杆菌为例，学习转化的基本原理及方法。2 验证 DNA 是遗传物质，加深对中心法则的理解。 二实验原理 转化（ transformation ）是指一段同源或异源的 DNA 转入受体细胞并得到表达的水平基因的转移过程，是现代分子生物学研究和基因工程不可缺少的重要技术。目前常用的转化方法有 CaCl 2 法 ( 化学转化法 ) 和电转化法。本实验是用 pGLO 细菌转化试剂盒中提供的 pGLO 质粒来转化大肠杆菌，所用方法为 CaCl 2 转化法。pGLO 质粒：pGLO 质粒上主要含有两个基因，一个为编码绿色荧光蛋白 (GFP) 的基因，一个为抗生素氨苄青霉素抗性基因。此外，该质粒还整合有一个特殊的参与受体细胞中绿色荧光蛋白表达的基因调控体系，转化细胞中的绿色荧光蛋白基因只有在培养基中存在阿拉伯糖时才能启动表达。转化子细胞将在不含阿拉伯糖的培养基上呈白色而在含阿拉伯糖的培养基上显绿色荧光，这种荧光在长波紫外灯下即可观察到。三 实验材料受体菌： E.coli K12 HB101质粒： pGLO plasmid转化液（ CaCl2 ）氨苄青霉素（ amp ）阿拉伯糖（ ara ）培养基：固体 LB 、液体 LB接种环、移液器等四 实验步骤1. 准备平板： 每组： 1 块 LB 平板， 2 块 LB/amp 平板， 1 块 LB/amp/ara 平板2. 准备感受态细胞：用 250 l 无菌水或转化液悬浮试剂盒中提供的大肠杆菌菌粉，此即感受态细胞。3. 活化受体细胞：挑取 1 环 E.coli K12 HB101 菌液，于 LB 培养基上 37 活化 16-24h 。4. 转化： 1） 在两只无菌离心管上分别标记 +DNA, -DNA 。2） 在上述两管中分别加入250 l 转化液。3) 迅速置于冰上。4） 各挑取活化好的受体菌的一个单菌落，悬浮于两管转化液中。5） 在标有 +DNA 的管中加入一环质粒 DNA ，而标有 -DNA 的管中不加。6） 将上述两管于冰上放置 10min 。7） 在准备好的培养基底部如左图。8 ）两只小管放入 42 水浴中处理 50 秒，再迅速放于冰上 2 min 。9 ）在两只小管中分别加入 250 l LB- 肉汤。10 ）从 +DNA 小管中分别吸取 100 l 滴加在两个标有 +DNA 的平板上，从 -DNA 小管中分别吸取 100 l 滴加在两个标有 -DNA 的平板上。11 ）用无菌接种环将滴加的液体均匀涂布在
人人文库> 全部分类> 行业资料 > 管理策划

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论