仪器SOP模版

四川绵阳四四医院检验科标准操作文件*全自动血液分析仪操作手册文件编号：CRL1-SOP-2001版本： D/0 页码：20/20生效日期：2012-07-01 仪器档案仪器名称：制造厂家：供应商： 安装日期：启用日期：仪器存放科室： 仪器管理负责人： 电话： 维修工程师： 电话： 仪器手册仪器手册提供者： 手册名称：相关资料姓名住址电话编写者审批者操作者主任每年回顾表回顾者日期修改日志：日期修改内容签字 1 目的检测血液中血细胞（红细胞、白细胞和血小板）数量，白细胞分类及相关参数（HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW及MPV等）的变化对临床有关疾病的诊断、观察疾病的变化及治疗效果具有重要参考价值。 2 适用范围*血液分析仪使用操作。 3 分析参数和方法学名称Sysmex XE-5000提供43项参数的结果，各检测参数和方法见表1。 表1. Sysmex XE-5000各检测参数和方法参数首字母缩写检测方法白细胞WBC流式细胞计数红细胞RBC鞘流DC检测方法血红蛋白HGBSLS血红蛋白检测法红细胞比积HCTRBC累积脉冲高度检测法平均红细胞体积MCV由RBC和HCT算出平均红细胞血红蛋白量MCH由RBC和HGB算出平均红细胞血红蛋白浓度MCHC由HCT和HGB算出血小板PLT鞘流DC检测方法中性粒细胞百分比NEUT%流式细胞计数淋巴细胞百分比LYMPH%单核细胞百分比MONO%嗜酸性粒细胞百分比EO%嗜碱性粒细胞百分比BASO%中性粒细胞数NEUT#淋巴细胞数LYMPH#单核细胞数MONO#嗜酸性粒细胞数EO#嗜碱性粒细胞数BASO#红细胞分布宽度标准差RDW-SD根据红细胞直方图算出红细胞分布宽度变异系数RDW-CV根据红细胞直方图算出血小板分布宽度PDW根据血小板直方图算出平均血小板体积MPV根据血小板直方图和PLT算出大血小板比率P-LCR根据血小板直方图算出血小板压积PCT根据血小板直方图算出网织红细胞百分比RET%流式细胞计数网织红细胞数RET#幼稚网织红细胞比率IRF低荧光强度网织红细胞比率LFR中荧光强度网织红细胞比率MFR高荧光强度网织红细胞比率HFR网织血小板比率IPF网织红细胞血红蛋白含量RETHe有核红细胞百分比NRBC%有核红细胞数NRBC#未成熟粒细胞百分比IG%未成熟粒细胞数IG#造血祖细胞数HPC直流射频白细胞数体液WBCBF流式细胞计数红细胞数体液RBCBF单个核细胞比例体液MN单个核细胞数体液MN多个核细胞比例体液PMN单个核细胞数体液PMN4 检验原理 RF/DC检测方法通过直流电阻的变化测定血细胞的大小，并通过射频电阻测定血细胞内的密度。一个血液样品经过吸液、定量、稀释为指定比，然后输送给相应的检测室。检测室内有一个称为“小孔”的圆孔，两侧均为电极。两个电极之间施以直流电和射频电流。稀释后样品中悬浮的血液细胞通过该孔，使两个电极之间的直流电阻和射频电阻发生变化。通过直流电阻的改变测定血细胞的体积大小，而射频电阻的变化检测血细胞内的密度（细胞核大小与其它信息），这种检测是以电脉冲的形式进行的。根据这些脉冲大小的不同，可得到血细胞大小和内部密度的二维分布（散点图）。通过对这些分布的检测，可得到各种测量数据。 鞘流DC检测方法（RBC、PLT、HCT） 在该检测器内，样品喷嘴定位在孔的前面且与中心对齐。将稀释后的样品由样品喷嘴推入锥形室以后，由前鞘流内的试剂包裹通过小孔的中心。 通过小孔以后，经过稀释的样品由后鞘流中的试剂包裹送入捕集管中。这样就可以防止该区域的血细胞回流，并防止产生假性血小板脉冲。鞘流方法改善了血液计数的准确性和重现性。同时由于血细胞通过在一条直线上的小孔，所以也可防止产生异常血细胞脉冲。使用半导体激光器的流式细胞计数方法使用流式细胞计数法检测细胞和其它生物粒子的物理和化学性质。使用流式细胞计数法只需很少的样品就可对这些细胞和粒子进行检测。一个血液样品经过吸液和定量、稀释至指定的稀释比，并进行染色。然后将该样品送入流动池中。这种鞘流装置改进了细胞计数的准确性和重现性。同时，由于血细胞颗粒成行通过该流动池的中心，故而防止产生异常血液脉冲并可减少流动池的污染。一个半导体激光束通过该流动池照射到血细胞上。前向散射光由光电二极管接收，侧向散射光和侧向荧光则由光电倍增管接收。光信号被转化为电脉冲，从而可以得到有关血液细胞的信息。 前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC） 当一束激光照射到血细胞颗粒上时，就产生光散射。XE-5000检测前向散射光和侧向散射光，前向散射光的强度反映血液细胞体积大小。侧向散射光的强度反映细胞内部（如细胞核的体积大小）的信息。 侧向荧光（SFL） 当光照射到经过荧光染色的血液细胞上时，就产生比入射光波长更长的光。随着染色集团浓度的增加，荧光强度也增加。通过测量荧光强度，可以得到有关血细胞染色的信息，XE-5000检测侧向荧光。 SLS-血红蛋白测定法在稀释的血液中加入溶血素，红细胞中的血红蛋白被释放出来。血红蛋白在月桂洗硫酸钠的作用下，二价铁转变成三价铁，并与月桂洗硫酸钠结合形成SLS-Hb，SLS-Hb进入血红蛋白检测系统。测定SLS-Hb在555nm波长下的吸光度值，并通过与加入样品前稀释液的吸光度进行对比进行计算。计算（红细胞指数）红细胞指数（MCV、MCH和MCHC）通过RBC计数（RBC）、Hb浓度（HGB）和红细胞压积（HCT）的值计算出。计算公式如下：MCV（fl）HCT1015RBC/LMCH (pg)HGB(g/L)1012RBC/LMCHC(g/L)HGB(g/L)HCT5. 仪器异常信息提示 XE-5000 异常报警信息：40项WBC异常：WBC Abn ScattergramWBC散射图异常NRBC Abn ScattergramNRBC散射图异常Neutropenia嗜中性粒细胞减少Neutrophilia嗜中性粒细胞增加Lymphopenia淋巴细胞减少Lymphocytosis淋巴细胞增加Monocytosis单核细胞增加Eosinophilia嗜酸性粒细胞增加Basophilia嗜碱性粒细胞增加Leukocytopenia白细胞减少Leukocytosis白细胞增加NRBC present有核红细胞增加WBC怀疑：Blasts?原始细胞Immature Gran?未成熟粒细胞Left Shift?左移Atypical Lympho?异形淋巴细胞Abn Lympho/L-Blasts?异常淋巴/原始淋巴NRBC有核红细胞RBC Lyse resistance红细胞溶解不全RBC异常：RBC Abn Distribution红细胞粒子分布异常Dimorphic Population双峰红细胞RET Abn ScattergramRET 散射图异常ReticulocytosisRET增加Anisocytosis红细胞大小不均Microcytosis小红细胞症Macrocytosis大红细胞症Hypochromia低血红蛋白症Anemia贫血Erythrocytosis红细胞增多症RBC怀疑：RBC Agglutination红细胞凝聚Turbidity/HGBInterference?乳糜/HGB影响Iron Deficiency?缺铁性贫血HGB Defect?HGB异常Fragments?碎片PLT异常PLT Abn Scattergram血小板减少PLT Abn Distribution血小板直方图异常Thrombocytopenia血小板散射图异常Trombocytosis血小板增加PLT怀疑PLT Clumps?血小板凝集PLT Clumps(S)血小板凝集6. 样品要求 用真空采血管（紫色盖头）采集EDTA-K2抗凝的静脉血。采血后立即与抗凝剂混匀，在试管外壁贴上单据号等病人信息或检验联号后，放置室温立即送检。 穿刺时须防止穿刺针刺扎采血员，以避免血液中传染性病原如肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒等以及血液中未知的可致病成分污染采血员。标本在室温下最多保留4小时。不能在4小时内检测的标本，放置于冷藏冰箱（28）中保存，8小时内有效，使用前从冰箱中取出回复室温后检测。 7 试剂 7.1 稀释液（CELLPACK） 7.1.1 试剂品牌：Sysmex 代码：PK-30L 包装规格：20L 试剂成份： 氯化钠6.38g/L 硼酸1.00g/L 四硼酸纳0.20g/L EDTA-K20.20g/L 7.1.3 储存条件：须存储于干净的环境中，防止阳光直射，适宜温度为1530。 7.1.4 使用期限：在失效期前使用；开封后的使用期限为60天。 7.1.5 安全事项：在使用前确认是否有污染或颜色变化，一经发现，请速更换。如出现冻结现象，将其解冻，混匀后使用。 7.1.6 注意事项：注意防尘。 7.2鞘液（CELLSHEATH） 7.2.1 试剂品牌：Sysmex 代码：SE-90L 包装规格：20L 试剂成份： 氯化钠 7.1g/L 氨丁三醇缓冲液 2.0g/L 乙二胺四乙酸二钾 0.20g/L 表面活性剂 0.8g/L 7.2.2 储存条件：须存储于干净的环境中，防止阳光直射，适宜温度为530。 7.2.3 使用期限：在失效期前使用；开封后的使用期限为60天。 7.2.4 安全事项：避免和眼睛、皮肤接触，一旦接触，用大量清水冲洗，并适当考虑必要的医疗措施。 7.2.5 注意事项：若试剂有污染或颜色的变化，更换试剂。如出现冻结现象，将其解冻、混匀后使用。 7.3 嗜碱细胞溶血素（STROMATOLYSER-FB） 7.3.1 试剂品牌：Sysmex 代码：FBA-200A 包装规格：5L 7.3.2 试剂成份：非离子表面活性剂 0.4% 7.3.3 储存条件：须存储于干净的环境中，适宜温度为530。 7.3.4 使用期限：在失效期前使用；开封后的使用期限为60天。3.5安全事项：避免和 眼睛、皮肤接触，一旦接触，用大量清水冲洗，并适当考虑必要的医疗措施。 7.3.5 注意事项：在试剂使用前须确认是否有污染或颜色的变化，一经发现，须速更换。若试剂出现冻结现象，用前将其解冻充分混匀后使用。 7.4 白细胞分类溶血素（STROMATOLYSER-4DL） 7.4.1 试剂品牌：Sysmex 代码：FFD-200A 包装规格：5L 7.4.2 试剂成份：非离子表面活性剂 0.18%有机季铵盐 0.08% 7.4.3 储存条件：须存储于干净的环境中，适宜温度为530。 7.4.4 使用期限：在失效期前使用；开封后的使用期限为60天。 7.4.5 安全事项：避免和眼睛、皮肤接触，一旦接触，用大量清水冲洗，并适当考虑必要的医疗措施。 7.4.6 注意事项：在试剂使用前须确认是否有污染或颜色的变化，一经发现，须速更换。若试剂出现冻结现象，用前将其解冻充分混匀后使用。 7.5 白细胞分类染液（STROMATOLYSER-4DS） 7 .5.1 试剂品牌：Sysmex 代码：FFS-800A 包装规格：42ml3袋 7.5.2 试剂成份：聚次甲基染料 0.002%甲醇 3.0%1，2-亚乙基二醇 96.9% 7.5.3 储存条件：须存储于干净的环境中，避光，适宜温度为235。 7.5.4 使用期限：在失效期前使用；开封后的使用期限为60天。 7.5.5 安全事项：避免和眼睛、皮肤接触，一旦接触，用大量清水冲洗，并适当考虑必要的医疗措施。 7.5.6 注意事项：若试剂有任何污损、浑浊、不稳定或颜色变化的迹象，须更换。但避免冻结。 7.6 有核红细胞染色液（STROMATOLYSERNR） 7.6.1 试剂品牌：Sysmex 代码：SNR-800 包装规格：12ml3袋 试剂成份： 聚次甲基染料 0.01% 1，2-亚乙基二醇 99.9% 7.6.2 储存条件：须存储于干净的环境中，避光，适宜温度为235。 7.6.3 使用期限：在失效期前使用；开封后的使用期限为60天。 7.6.4 安全事项：避免和眼睛、皮肤接触，一旦接触，用大量清水冲洗，并适当考虑必要的医疗措施。 7.6.5 注意事项：若试剂有任何污损、浑浊、不稳定或颜色变化的迹象，须更换。但避免冻结。7.7 血红蛋白溶血素（SULFOLYSER） 7.7.1 试剂品牌：Sysmex 代码：SLS-220A 包装规格：5L 试剂成份：月桂洗硫酸钠 1.7g/L 7.7.2 储存条件：须存储于干净的环境中，防止阳光直射，适宜温度为530。 7.7.3 使用期限：在失效期前使用；开封后的使用期限为60天。 7.7.4 安全事项：避免和眼睛、皮肤接触，一旦接触，用大量清水冲洗，并适当考虑必要的医疗措施。 7.7.5 注意事项：若试剂有污染或颜色的变化，更换试剂。如出现冻结现象，将其解冻、混匀后使用。 7.8 幼稚细胞溶血素（STROMATOLYSERIM） 7.8.1 试剂品牌：Sysmex 代码：SIM-220A 包装规格：10L 试剂成份： 氢氧化钠 0.03% 氯化钠 0.41% 非离子表面活性剂 2.4% 7.8.2 储存条件：须存储于干净的环境中，防止阳光直射，适宜温度为530。 7.8.3 使用期限：在失效期前使用；开封后的使用期限为60天。 7.8.4 安全事项：避免和眼睛、皮肤接触，一旦接触，用大量清水冲洗，并适当考虑必要的医疗措施。 7.8.5 注意事项：若试剂有污染或颜色的变化，更换试剂。如出现冻结现象，将其解冻、混匀后使用。 7.9 清洁剂（CELLCLEAN） 7.9.1 试剂品牌：Sysmex 代码：CL-50 包装规格：50ml 试剂成份：次氯酸钠（有效氯浓度为5%） 7.9.2 储存条件：须存储于干净的环境中，防止阳光直射，适宜温度为130。 7.9.3 使用期限：在失效期前使用。 7.9.4 安全事项：本品为强碱性洗涤剂，避免和眼睛、皮肤、衣物接触，一旦接触，用大量清水冲洗，并适当考虑必要的医疗措施。 7.9.5 注意事项：若试剂有任何污损、浑浊、不稳定或颜色变化的迹象，须更换。若试剂发生凝固，须替换。 7.10 有核红细胞溶血素（STROMATOLYSER-NR） 7.10.1 试剂品牌：Sysmex 包装规格：1L 试剂成份：乙二醇 7.10.2 储存条件：须存储于干净的环境中，防止阳光直射，适宜温度为130。 7.10.3 使用期限：在失效期前使用。 7.10.4 安全事项：避免和眼睛、皮肤、衣物接触，一旦接触，用大量清水冲洗，并适当考虑必要的医疗措施。 7.10.5 注意事项：若试剂有任何污损、浑浊、不稳定或颜色变化的迹象，须更换。若试剂发生凝固，须替换。 7.11 网织红细胞稀释液（RETSEARCH-II Dilution） 7.11.1 试剂品牌：Sysmex 包装规格：1L 7.11.2 试剂成分：甲醇和乙二醇 7.11.3 储存条件：须存储于干净的环境中，防止阳光直射，适宜温度为130。 7.11.4 使用期限：在失效期前使用。 7.11.5 安全事项：避免和眼睛、皮肤、衣物接触，一旦接触，用大量清水冲洗，并适当考虑必要的医疗措施。 7.11.6 注意事项：若试剂有任何污损、浑浊、不稳定或颜色变化的迹象，须更换。若试剂发生凝固，须替换。 7.12 网织红细胞染液（RETSEARCH-II Stain） 7.12.1 试剂品牌：Sysmex 包装规格：12ml 7.12.2 试剂成分：聚次甲基染料。 7.12.3 储存条件：须存储于干净的环境中，防止阳光直射，适宜温度为130。 7.12.4 使用期限：在失效期前使用。 7.12.5 安全事项：避免和眼睛、皮肤、衣物接触，一旦接触，用大量清水冲洗，并适当考虑必要的医疗措施。 7.12.6 注意事项：若试剂有任何污损、浑浊、不稳定或颜色变化的迹象，须更换。若试剂发生凝固，须替换。 7.13 试剂的使用： 以上所有试剂每瓶试剂开封后应注明启用日期、失效期（开瓶后2个月，或有效期内）并附签名。 8 校准8.1 校准品8.1.1 商品名称：SCS-10008.1.2 产品概要：SCS-1000校准品用于WBC、RBC、HGB、HCT/MCV及PLT等参数校准。(SCS-1000产品可溯源到ICSH的国际参考方法)8.1.3 配方：SCS-1000校准品由人体红细胞、人体白细胞、血小板成份和抗菌剂及类血浆水基缓冲液组成。8.1.4 警告：本产品的人体来源材料均经美国食品药品管理局（FDA）指定的技术检测，肝炎表面抗原、丙肝病毒(HCV)及HIV1、HIV2抗体结果均为阴性。但是，目前没有任何检测能够保证不存在这些血液感染性病原体。操作时的预防措施必须与人血操作相同。 8.1.5 存储：SCS-1000瓶应垂直保存在28，避免冰冻。为开封的产品在标签所注明的有效期内稳定。开封后必须4小时内使用。如未用完，应废弃剩余部分。 8.1.6 产品变质迹象：上清液内有轻微溶血是正常现象。温度超出范围可导致严重溶血，校准品平均值超出测试极限，并且实验室内质控历史数据和室间质控数据表示良好的结果时，可视为产品损坏迹象。应更换校准品，重新校准。8.1.7 局限性：SCS-1000校准品用于开放、全血分析模式。封闭模式或预稀释模式的校准至少需要10个正常新鲜血样品进行，并对每个血样品分析2次。如果室温超过30，请不要进行校准。在校准前至少提前30分钟打开仪器电源。8.2 校准前检查：确认SCS-1000校准品瓶上批号和有效期于靶值表一致，没有过期。确认是否按厂家建议进行仪器保养。尽可能不要再进行保养或试剂更换的当天进行校准或校准校验。 浏览最近的质控数据，确保分析仪性能稳定。 在仪器上登记试剂的批号和有效期。 进行自动清洗，确认空白表示没有超出规定范围。8.3 校准准备：请严格遵守以下步骤，这对于保证SCS-1000校准品的性能正确非常重要。从冰箱或包装取出1瓶SCS-1000，放置30分钟使其温度升至室温（18-25）。保持瓶子直立的状态将其放在双手掌中轻轻滚动20秒，然后将其颠倒后再滚动20秒以上。轻轻来回倒转12次使其混合均匀，确保所有细胞都已经悬浮起来。进行分析前在平面上静置瓶子15秒，使泡沫散去。8.4 校准步骤： 注意：SCS-1000的分析必须在开放模式进行，此时仪器设定为维修程序-“特殊模式”-菜单的“质控血模式”。使用质控血模式可防止出现WBC通道错误。关于进入维修程序的方法，请咨询技术服务代表。在开放模式下连续进行6次分析。在分析当中不要混匀校准品。6次分析结束后，使用洁净无屑的纸巾或纱布拭净瓶子及瓶盖螺纹，之后盖上瓶盖。8.5 平均值的计算及校核数据：排除第1次分析结果，计算其余5次分析结果的平均值，确认各参数的平均值都在可接受极限范围内。如果某个参数的平均值超出了可接受极限范围，并内部质控和/或室间质控的结果也显示出类似偏差，表示需要重新校准分析仪。8.6 计算新的校准设定值注意：校准设定值的修改是非常关键的操作，只能由Sysmex现场技术服务代表进行。 通常，只有在更换了可能影响仪器计数校准的特定部件（旋转阀、吸样管、泵、定量器模块等）时才进行计数校准。8.7 校准频率：每年校准2次，上半年一次下半年一次（用SCS-1000进行校准，由工程师进行操作）。8.8 验证：校准后及时进行验证，内容包括：精密度、线性、校准前后病人标本结果比对、新鲜血close和open进样模式结果比对、质控、白细胞分类手工和仪器分类方式的比对，由实验室操作人员完成。8.8.1 精密度：取两个不同值标本，每份连续测11次结果，去除每份第一次结果进行统计。要求符合表2的精密度要求。表2.精密度和比对要求项目比对要求 CV%精密度要求 CV%RBC、HB、浮动均值B5%B2%WBCB7%B5%PLTB10%B10%分类查血常规分类Rmke表查血常规分类Rmke表8.8.2线性：由医院收集一份接近预期上限的高值全血样本（H），分别按100%、80%、60%、40%、20%的比例进行稀释，每个稀释度重复测定3次，计算均值。将实测值与理论值作比较（偏离应小于10%），计算 y=ax+b，验证线性范围。8.8.3 每次校准完后，即取5份样本做OPEN和CLOSE两种进样方式的比对，比对各指标的CV%应符合下列表2的CV%值，为合格。 8.8.4 每次校准完后立即做质控比对，质控应在控。 8.8.5 每次校准后及时做白细胞分类手工和仪器分类方式的比对，选取高、中、低值各两份样本，制备血片染色镜检并进行手工分类比对结果查Rmke表。 8.8.6 校准不能通过时需重新校准直至通过，记录，并由厂家出校准报告。 9 操作步骤 9.1 先开电脑显示屏后开电脑主机，登录IPU或XE5000程序。 开XE-5000主机：打开主机右侧电源开关 仪器自动进行自检；自动清洗及本底检查，如在本底范围以内，主机屏幕上将出现登录信息；如超过极限值，将出现错误提示，需要在登录完成后再次进行自动冲洗；按主机上NUM/ALPH转换为字符输入，然后在登录名一拦中键入“5000”，无须输入密码，按“OK”确认。显示屏上出现“READY”，机器进入准备状态9.2 质控：按临床血液及体液实验室内部质量控制程序进行。 9.3 样本检测:手动模式自动进样器模式准备就绪（屏幕显示准备就绪（READY）信息，READY LED绿灯亮）按手动（MANUAL）键将样品管放在样品架上在数字键上输入标本号将样品架放在进样器中按V键，激活“模式选择（Mode）”按进样器（Sampler）键按光标键选择1.手动模式（Manual）在数字键上输入标本号颠倒试管，彻底混匀样品取下盖子按V键，激活“样品架编号管位置号（Rack-Tube）”将样品管放在取样针中在数字键上输入样品架号和管位置号按开始键按Sampler键当READY LED灯灭、连续两次发出短促的“DD”蜂鸣声，移开样品管仪器进行检测准备就绪（屏幕显示准备就绪（READY）信息，READY LED绿灯亮）准备下一个/批样品，重复以上步骤进行检测 在进样器模式进行急诊分析 按进样器（Sampler）键终止进样器运行屏幕显示“STAT READY”按手动（MANUAL）键在数字键上输入标本号手工模式分析样本分析完毕，屏幕显示“STAT READY”按进样器（Sampler）键，恢复进样器操作。 操作中注意个人安全，如标本需打开盖子，应戴好防护镜口罩或在有机玻璃挡板后打开。 10 方法学特征10.1 全血模式线性：WBC：0.4194.29109/LRBC：0.237.661012/LHGB：6.93231.91g/LPLT：9.28534109/L WBC、PLT大于或小于上述范围时，可用手工法验证，以手工计数的结果报告。RBC、HGB大于或小于上述范围时，以或限性值报告，如HGB 100.000/ml），红细胞计数可能假性增加。 HGB：标本的白细胞计数增加（ 100.000/ml）、脂血症、存在异常蛋白，血红蛋白可能假性增加。 HCT：标本存