【doc】奥美拉唑原料及其肠溶胶囊有关物质检查方法的研究.doc

奥美拉唑原料及其肠溶胶囊有关物质检查方法的研究.-576?-药物分析杂志chinjpharmanal2005,25(5)奥美拉唑原料及其肠溶胶囊有关物质检查方法的研究陶巧凤,陈雪帆,金鑫,陈冠华(1.浙江省药品检验所杭州310004;2.浙江金华康恩贝生物制药有限公司金华321012)摘要目的:建立hplc法检查奥美拉唑中的主要有关物质的测定方法.方法:采用hplc法用cs色谱柱,以0.01tool-l磷酸氢二钠溶液(用磷酸调节ph至7.6)一l/1(75:25)为流动相,检测波长为280nm.结果:hplc法能有效检出奥美拉唑中的主要杂质(中间体)和氧化及酸破坏等降解产物,最低检出限为2ng(o.05%).结论:hplc法灵敏度高,可量化,适用于奥美拉唑及制剂的有关物质检查.关键词:奥美拉唑;有关物质;hplc法determinationofrelatedsubstanceinomeprazoleanditsenteric?-?coatedcapsulestaoqiaofeng,chenxuefan,jinxin,chenguanhua(1.zhejianginstituteofdrugcontrol,hangzhou310004;2.zhejiangjinhuakangenbeibiopharmaeeutiealcompany,jinhua321012)abstractobjective:toestablishanhplcmethodfordeterminationofrelatedsubstancesinomeprazoleanditsentericcoatedcapsules.methods:c8columnwith0.o1mol?lna2hpo4(ph7.6)一acetonitrile(75:25)asmobilephase.thedetectionwavelengthwas280nm.results:therelat.edsubstancesanditsmaindegradationproductsweredeterminedbyhplc.thedetectionlimitwas2ng.conclusion:thehplcmethodproposedfordeterminationoftherelatedsubstancesinomeprazoleanditsentericcoatedcapsulesissensitive,accurateandsimple.keywords:omeprazole;relatedsubstances;hplc奥美拉唑(omeprazole)为质子泵(h,k一atp酶)抑制剂,临床上广泛用于治疗胃溃疡,最早由瑞典astra公司研制开发,国内已有生产和销售.奥美拉唑为取代的苯并咪唑亚砜,其化学名为5一甲氧基一2一(4一甲氧基一3,5一二甲基一2一吡啶基)一甲基一亚磺酰基一1日一苯并咪唑,欧洲药典-l和美国药典-2均有收载.奥美拉唑有关物质除生产过程中引人外,因其对湿,热,酸等条件十分敏感,易引起样品变色或产生降解,国外药典采用杂质对照品hplc法控制奥美拉唑的有关杂质,国内亦采用hplc法控制奥美拉唑的有关杂质,但由于使用的色谱柱或检测波长等色谱条件的不同,使得杂质检出能力差异较大.本文为有效控制奥美拉唑的纯度和稳定性研究,采用高效液相法(hplc)对其主要有关物质和降解产物检测方法进行了研究.该法操作简便,灵敏,结果准确,并能用于制剂的有关物质分析和含量测定.1仪器和试药aglient1100色谱系统(带dad检测器),色谱柱为zobaxeclipsexdbcr(150mm4.6mm,5ixm)/a11techc8(250mm4.6mm,5ixm)/hypersilc8(150mm4.6mm,5m).奥美拉唑对照品(容量法测得含量为99.7%并经hplc归一化法检查,纯度为99.9%),奥美拉唑原料,奥美拉唑肠溶胶囊(规格:20mg)和5一甲氧基一2一巯基1h苯并咪唑(杂质a),中间体5一甲氧基一2一(4一甲氧基一3,5一二甲基一2一吡啶基)一甲基一巯基一1h一苯并咪唑(杂质c),5一甲氧基一2一(4一甲氧基一3,5一二甲基一2一吡啶基)一甲基一磺酰基一1h一苯并咪唑(杂质d)均由浙江金华康恩贝生物制药有限公司提供;乙腈为色谱纯,其他化学试剂均为分析纯.药物分析杂志chinjpharmanal2005,25(5)-577-2方法与色谱条件2.1系统适用性试验通过考察不同色谱柱类型c,与c.和流动相配比,为使分析时间和分离度均达最佳,经实验采用c色谱柱为分析柱,以0.01mol?l(1.4g?l)磷酸氢二钠溶液(用稀磷酸调ph至7.6)一乙腈(75:25)为流动相,检测波长为280nm,理论板数按奥美拉唑峰计算不低于2000.取本品原料10mg置50ml量瓶中,加3%过氧化氢溶液3ml,放置10min,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为检测溶液.量取20注入液相色谱仪,色谱图中主要色谱峰依次为奥美拉唑氧化产物即杂质d峰和奥美拉唑峰,两色谱峰的分离度应大于2.5.在选择的色谱条件下,奥美拉唑与各有关物质和降解产物均能得到良好分离.2.2方法(避光操作)取本品原料和对照品适量,分别加流动相溶解并制成每1ml中含0.2mg的供试品溶液和每1ml中含2plg的对照溶液;取供试品溶液和对照溶液各20照系统适用性试验的色谱系统进样分析,记录色谱图至奥美拉唑主峰保留时间的3倍.供试品溶液的色谱图中如有杂质峰,用自身对照法计算(各杂质量不得大于0.3%,总杂质量不得大于1.o%).3结果3.1方法的专属性和分离度试验奥美拉唑的生产工艺大多可归纳为以5一甲氧基一2一巯基一1h一苯并咪唑为原料或中间体,经缩合,氧化,精制而得,在合成过程中可能引入的有关物质主要有起始物(杂质a),缩合得中间体(杂质c)和氧化副产物(杂质d),各化合物的结构式见图l.在选择的色谱条件下,各杂质与奥美拉唑均能完全分离,色谱图见图2.根据色谱图中各杂质的色谱保留行为,认为应记录色谱图至奥美拉唑主峰保留时间的3倍.m.shhmmehm.h广弋d图1奥美拉唑及其有关物质的结构式fig1tllestructuresofomprazoleanditsrelatedsubstancesa.奥美拉唑(omprazole)b.杂质a(impuritya)c.杂质c(impurityc)d.杂质d(impurityd)l8,0102030t/rain图2奥美拉唑与有关物质的分离图谱fig2chromatogramoftheseparationofomeprazoleanditsrelatedsub-stances1.奥美拉唑(omeprazole)2.杂质a(impuritya)3.杂质c(impu.rityc)4.杂质d(impurityd)另取奥美拉唑适量,分别经以下条件处理:(1)在强度4000lx放置2h;(2)在8o放置2h;(3)加0.01tool?l盐酸5ml放置5rain;(4)1tool?l氢氧化钠5ml放置2h;(5)3%过氧化氢5ml放置10rain,然后用流动相配成每1ml含0.2mg的溶液,进行hplc分析,结果见图3.所得各色谱图和光谱图与已知杂质a,c,d的三维图谱比较,结果表明:奥美拉唑在碱液中相对稳定,氧化主要转化为砜即杂质d且降解反应明显,遇酸和热产生杂质c等杂质,光照会产生杂质a等杂质,这一结果与文献报道j一致.0102030t/min图3奥美拉唑降解产物的分离图谱fig3chromatogramoftheseparationofthedegradationproductofome.prazoh1.原料(ginalsample)2.光照(treatedundertight)3.高温(ttedunderheat)4.酸处理(treatedunderacid)5.碱处理(treatedunderhse)6.氧化(treatedunder3%h202)根据降解产物的色谱行为分析,奥美拉唑氧化后产生含杂质d的溶液,可用于考察色谱系统适用性,经对氧化条件的摸索优化,认为取本品10mg置50ml量瓶中,加3%过氧化氢溶液3ml,放置1orain,加流动相稀释至刻度,摇匀即可,进行hplc分析,奥美拉唑峰与氧化产物(杂质d)的分离度大于2.5-578-药物分析杂志chinjpharmanal2005,25(5)3.2灵敏度取杂质a,c,d和奥美拉唑各10mg,分别用流动相稀释进样,从各色谱峰对应的光谱图可见杂质c,d与奥美拉唑的光谱相似,杂质a与奥美拉唑的光谱略有差异.在奥美拉唑最大波长302nm处检测,杂质a,c,d与奥美拉唑的相对响应因子分别为2.8,0.98,1.1;在检测波长280nm处杂质a,c,d与奥美拉唑的相对响应因子分别为1.1,1.1,0.96.因此尽管280nm处的响应约为302nm处的一半,但响应因子基本一致,故选择在280nm处检测,用自身对照法测定杂质量,可不计校正因子.实验表明按信噪比大于3时,测得杂质a最低检出限为1ng,杂质d和奥美拉唑的检出下限为2ng(0.05%),杂质c检出下限为5ng,可满足规定限度各杂质不得过0.3%和总杂质不得过1.0%的检测要求.3.3供试品溶液的稳定性考察奥美拉唑有关物质供试品溶液的稳定性考察,结果表明待测溶液在4h内基本无变化,在5h时增加一杂质(t小于杂质a的t),但量小于0.1%,在20h时该杂质量大于1.0%,认为待测溶液应在5h内基本稳定.3.4样品测定取奥美拉唑原料和制剂,按上述确定的方法试验,结果总杂质分别为0.2%和0.4%(n=3),原料药中未检出杂质d制剂中均检出0.1%一0.2%的杂质d(图4).4讨论4.1利用奥美拉唑的易氧化且氧化产物主要为杂质d的特性,自行制备含杂质d的分离度试验溶液,考察了hplc的系统适用性,这样既确保了色谱系统的有效性,又免去了国外药典需提供杂质对照品的麻烦.4.2欧洲药典列出了ag7个杂质化学结构,分别用测定吸收度,tlc法和hplc法来进行控制,美国药典则用tlc法和hplc法进行纯度分析.通过性状观察或在440nm处测定吸收度可有效控制奥美拉唑的有色杂质,欧洲药典用tlc0l0200al020rainb图4奥美拉唑原料(a)及其肠溶胶囊有关物质(b)色谱图fig4chromatogramsofomeprazolematerial(a)anditsrelatedsubstancesofentericcoatedcapsules(b)法检查杂质c,经实验所得主斑点靠近前沿,杂质c的斑点略高于主斑点更接近前沿,因前沿阴影的干扰时常影响杂质斑点的检出,表明tlc法系统不够完善,本文实验结果表明杂质c可用hplc法检测.4.3现行各奥美拉唑新药试行标准多采用以c,.为分析柱的hplc法控制奥美拉唑的有关物质,经专属性试验发现,杂质d与奥美拉唑在c,.柱上难以有效分离,对制剂制备中产生的杂质d难以检测,进口注册标准报道采用梯度洗脱才得以分离.本文用三种不同品牌的c.柱均能有效分离奥美拉唑与各中间体和主要降解产物,杂质d与奥美拉唑的分离度为2.63.6,说明本法耐用性好.4.4在溶液稳定性试验中,发现奥美拉唑在p