生物化学与.pdf

1 9 9 9 ；2 6 ( 1 ) 生物化学与 生物物理进展P r o g B i o c I 哪 B i o p h y 51 C v i r t rot e a n t i g e n H y b n d m，1 9 9 ,1 ，1 3( 1 ) ： 9 1 3 1 6 咖m PRo s eK A， 0 忸m S， a l Ma p p i n g o f s e r o t y p s p e c ifi c ，l mm u n o d o r mn a n t e p i top e s i n t h e N S r e 啪 n o f h e p a t it i s C v ir u s ( HC V ： u s e o f t y p e - s p e c ifi c p e p t i d e s t o s e r o q g i e a l y d i f e r e n t mt e i r tf e c d s fi th HC V p 啊1 ， 2 ， a n d 3 C l i n Mi cz o b inl ，1 9 9 3 ，3 1( 6) ：1 4 9 3 l 5 o 3 1 7 Fe r r o n i P， Ms c o l o G ，Z a n i n e t d Me l I d e nfi l i c a t i o n o f 0 e p i t o pas in h e p a t i ti s C r i m s o f) r e p r o t e in J C l in Mi e r o b i o l ，1 9 9 3 ， 3 1 ( 6 ) ：1 5 8 6 1 5 9 1 1 8 Alt s 山TDo n e t sM ，S c t ion e Le t B - c all e p i t o pas o n t h e h e p a t i d s C v i r u s n u c e o c a p s i d p r o t e i n d e t e r mi n e d b y hu ma n mo n c p e c i fi c a n d b o d i He l mto o g y ，l 9 ，1 8 ( 3 ) ：5 o 4 5 1 0 1 9 Kumk o he h i K， Ak a r s o k a T， P e n 啪C D al Us e o f r e c o m b i t tm a t p r o t e i n t o i d e n t 曲 a mo t i f - n e g a f v e h mn a n c yto t c e d c T - c e l l e p i t o p e p r e s e n t e d b v H A2 i n t h e h e p a ti t i s C r u s NS3 r 【 舶 J Vi r o l ，1 9 9 6 ，7 0 ( 1 ) ：2 3 2 2 4 0 2 0 ce myA ， Mc Hu t c h i s o n J G， 耐 b C，e t a l C y t o c T l y m p h o c y t e r e s p o n t o h e p a d t C v i r u s - d e r i v e d pap fid e s o a t z d a i n g t h eH LA- A2 1 b i r I d i】 】 gmo d f JC l J nI n v e s t ，1 9 9 5 ，9 5( 2 ) ：5 2 1 5 3 0 2 1 Wein e r A，E d s k mnA L， n 啪J ，以 P e r s i s t t h e paf t C nr u s iofe e t io n in a c h n D a n z 牌 a s s o c mt e d wi t h e me r ge n c e o f a c y tot o x i c T l y mp h o c y t e e s c 8 p e a t l a n t Pmc Na d Ac a d S c i U ， 1 9 9 5 ，9 2 ( 7 ) ：2 7 5 5 2 7 5 9 2 2 S hl蛐 M ，Ar ic h i T，Nis h i o k a M a l cTL r e s p o r t s e o f H【 A A2 1 - t r r ms g e r d c mi c e s p e df i c f o r h e pati t is C vi r p e p t i d e p r e d i c t 印h 。 p e sf o r C TLof h u mm a s e a r r y m g H LA - A 2 1 J m mu n d 1 9 9 5 ，1 5 4 ( 6 ) ：2 7 3 3 2 7 4 2 2 3 t t e R a yM1qhes J ，lc e4 1 1 i e AM 以a l P a d e n t s wl t h c h r o n i c he ix a d t k s C he c i r c u l a t i n g c o tox i c T c e l l s whic h r e he Imt i s C vir u s - e nc o d e d p e pd d e s br I d 珥 t o HLA- A2 1 mo l e c u l e s J Vir o l ，1 9 9 5 ，6 9 ( 4 ) ：2 4 6 2 2 4 7 0 2 4 Kh edy a k o v YEKh u d y a k o v aN SJ u e DL， L ine a r l o e ll e pit opaso ft he NS3 NS 4 NS 5 p r o t ein s o ft he he pa ti t is C v i r H s牡 mo d dd wl t h s y nt h e t i cp e p t id e Vi r d y，1 9 9 5，2 06：6 6 66 7 2 2 5 Shir a iM ，Ok l aH，Ni s hl M 以 An e t 0 p em h e p a t i tisC r u s c o r e r e mo r e c o g n i z e d by c y t o t o x c T c e i ls i n mi c e a nd h u m a n s J V ，1 9 9 4 ，6 8 ( 5) ：3 3 3 4 3 3 4 2 2 0 E r i c k s o n ALHo u g h t o nM C h o oQ L e t a l He pat it i s C W咻 s p e c i f ic CTL r e s p o n s e i n the l L v e o f Ch i mp a n z e e s wi t h a c u t a nd c h r o mehepat i t i sC J I mmu n o 1 1 9 9 3 ，1 5 1( 8 ) ：4 1 8 9 4 1 9 9 27 Ki 诅 H ， Mo r iy a ma TKa ne k o T， “ al H 1 3 4 4一 r e s t r i c t e d c y tot o x is T l y mp h o e y t e s c c n g a n e p i t o p e o n h e p a t i ti s C r u s n u l me a p s i d p r o t e in He p t o L g y，1 9 9 3，1 8( 5 ) ：1 0 3 9 1 0 4 3 2 8 K o z i d M 1 ，D u d l e y D，W o n gJT， a 1 I n t r a he pat ic c y t o t o x i eT I m 1 0 c y t 朗 s p e c i fi c 0 r h e paf t i s C y s i n p e r s o a s w1 仆 I c h r o n i c h e pat i t is J l mmu n o l ，1 9 9 2 1 4 9 ( 1 0 ) ：3 3 3 93 3 4 4 Ge n e t i c Va r i a t i o n a n d Co n s e r v e d Ep i t o p e s o f He p a ti tis C Vi r u s HUANG J i a n S h e n g， XI E Yo n g Me i ， I 也NDa - Mi n g ( S t a t e Ke yL a b o r a t o r y o f G e n e t i c E n g i n e e r i n g，I n s t i t u t e o f G e n e t i c s ，F u d a n Un i v e r s i t y，S h a n g h a i 2 0 0 4 3 3， C h i n a ) Ab s t r a c t He p a t i t i sC v i r u s h a sf o u r c h i e f g e n o t y p e s C VI、 、 I l l a n d ，wh o se h o mo l o g y o f a mi n o a c i d s a n d n u c h e e a dd s i s l e s s t h an 8 O e a c h o t h e r 1 _ h e v a r i a t i o n r a t e s o f CV p r o t e i n s are o o r e 8 E1 3 5 ，E2 NS l 5 3 ， NS 3 2 7 ，NS 4 3 5 ， NS5 3 9 ，r e s p e c t i v e l yAc mr d i n g t o t h e c h ara c t e r s o f c o n s e r v a t i o n，h y d r o p h i l i c i t y， a n tig e n i e i t y an d co n f o r r o a t i o na s e r i es o f h i g h l yco n s e r v e dT c e l l an dB c e ll e p i t o p e s are i d e n t i f i e d f r o m t h e e x p r e s s e d p r o d u c t s ，wh i c h mi g h t b e b e n i f i c i a l t o t h e p r e v e n t i o n a n d t r e a t me n t o f h e p a t i ti s C I n g e n e n a l ，B e p i t o pe i s a b o u t 1 2 4 0 pe p t i d es a n d T e p i t o pe 7 9 pe p t i d es Ke y w o r d s h e p a t i t i s C v i r u s( HC V) ，g e n e t i c v a r i a t i o n， mn ser v e d e p i tope s 碱液提取箬叶多糖 的纯化及其结构 研究 5 - 丁 硼 _- ( EA ,E L MA H A D I 3 0 周 0 7 井 4 ) 炎 李 墙 徐辉碧 弓 摘要通过高碘酸氧化、n l t h降解、部分酸水解分析、N MR分析等多种方法对以不同滩度 的 N a O H溶液薯叶 7 t 7 1夕 c ， f 1 3) 关 t词 学 科分 一6 )半乳糖构成，以阿拉伯糖、葡萄糖醛酸组成侧链 葡萄糖醛酸主要位于分子的末端 苎! 型翌 箬叶是禾本科植物箬竹 ( I , w io c a l a mu s te s s e l a t u s )的叶 其功用主治清热止血，解毒消肿 箬竹 主要分布于长江流域等地， 本草纲 目记载：箬 叶 “ 甘，寒 ， 无毒” ，“ 治男女吐血、衄血、呕血、 咯血、下血 又通小便 ， 利肺气 ， 喉痹 ，消痈肿” ” 中国科学院高能物理研究所棱技术应用研究部，2 7 3 2 信箱， 北 京 1 0 0 0 8 0 南 阳理工大学化学 系 ，南 阳 4 7 3 0 6 6 收藕 日 期 ： 1 9 9 7 - 0 9 一 儿 修回日 期 ： 1 9 9 8 4 ,I ， 0 9 性 维普资讯 5 2 生物化学与生物l物理 进展P r o 吕 1 8 i o e h ma B i o p h y s 1 9 9 9 ；2 6 【 1 ) 日本 民间亦用 竹 ( S a s a a l b o r n a r g i n a t a)叶作汉 方 药 药理实验表明，竹叶多糖提取液具有 良好的抗 肿瘤、抗炎症、抗溃疡等作用l ， 我们曾采用不 同的方法从鄂西恩施地 区野生箬叶中提取 了八种多 糖成分_ 3 J ，它们对四氯化碳致小鼠肝损伤有着不 同的抑制作用 J 在体外培养人 T淋 巴细胞株 MT 4实验中 发现，由 5 和 2 0 N a O H溶液提 取的多糖 F a 、F 一 a的细胞毒性 浓度分别 为 5 g L 、5 g L ，对细胞毒性较低F 一 a 及 F i g a 在 较高浓度即0 3 2 g L及 1 2 5 g L可抑制 H W 导致 的细胞病变性，F il l a 比F I g a 效果要好国内外对 其化学成分的研究较少 本文通过红外光谱 ( I R ) ， N MR ， 色谱分析， 部分酸水解 ， S m i t 1 降解， 高碘酸 氧化等方法研究 了这两种多糖的组成、结构和性质 1 实验部分 1 1 碱液提取箬叶多糖的分离纯化 碱液提取箬叶多糖 F 一 a 及 F lV a 的分离纯化 见文献 3 进一步纯化是将其再溶于少量水，进 行 S e p h a d e x G- 2 0 0柱层 析 、水 洗脱 、苯酚一 硫 酸法 检测 、收集 主要 洗脱峰 ，透 析 ，浓缩 ，冷冻 干燥 ， 得纯化多糖 1 2 箬叶多糖的理化性质 红外光谱仪为 日本 S h ir n a z u I R 4 3 5型，K B r 压片，4 0 0 0 4 0 0 c m 扫描 H、” C - N MR谱用 U N Y p k ts - 4 0 0型，溶剂分别为D MS O -D 6( H) 、 D 2 o ( ” C ) ” C共振频率为 1 0 0 6 0 0 MH z ， H共振 频率为4 0 0 0 4 5 MH z ，温度 3 0 8 K，累加次数 6 5 7 0 单糖组成采用完全酸水解，多糖水解物糖腈乙 酸酯衍生物气相色谱分析l 6 J 仪器为 S C - 7 气相色 谱仪 ( 四川分析仪器厂) ，色谱柱为石英毛细管柱 2 8 m0 2 5 r f ll n ，固定相为武汉大学分析教研室研 制的开链冠醚，检测器为 F I D，柱温 2 0 5 ，汽化 室温度 2 9 0 ，氢火焰温度为2 2 0 ，载气 ，进 样量为 0 2 0 4 标准单糖采用葡萄糖 ( G lc ) 、 甘露糖 【 Ma n ) 、半乳糖 ( G a 1 ) ，鼠李糖 ( R h a m) 木糖 ( X y ) 、阿拉伯糖 ( A r a ) 、岩藻糖 ( F u c )和 葡萄糖醛酸 ( G lc U A )共六种 硫酸 苯酚法测定多 糖含量 ，硫酸 咔唑法测定糖醛酸含量 1 3 箬叶多糖的结构分析 a 高碘酸氧化 9 3 ：称取 1 0 0 m g多糖 ，加入 1 0 ml 0 0 1 5 mo l L高碘酸钠 中，避光 置于室温暗 处反 应 ，测 定在 2 2 3 n n a处不 同 时 间 间隔 ( 4 h ， 2 4 h ，4 8 h ，7 2 h )反应液 的吸光度 ，直 至达 一 稳定值计算高碘酸的消耗量另取 5 m 1 反应 液 ，加 乙 二 醇 1 ml ，1 0 mi n后 以 0 O 1 mo l L Na OH滴定 甲酸的释放量 b S mit h降解 ：取经高碘酸氧化完全的多糖 溶液 1 0 n 1 l ，加入 0 2 乙二醇，对蒸馏水透析 4 8 h 后 ，用 8 r I 培N出 4 于室温暗处还原 1 2 h 用 0 1 mo l L C H3 C G OH调节 p H=5 0 ，对蒸馏水透 析2 4 h 后冷冻干燥进行完全酸水解，纸层析鉴 定产物，展开系统为正丁醇 ： 吡啶： 水 ( 3 ： 1 ： 1 ，体 积比) ，硝酸银显色判断甘油、赤藓醇、游离单 糖等是否存在 标准赤藓醇为 S i g ma 公司产品 C 部 分 酸 水解l 9 J ：取 8 0 n a g多糖，加 入 0 0 5 mo l L 三氟乙酸 5 m 1 ，9 5 封管水解2 h ， 透析 3 d ，分袋内 ( 未透过部分) 、袋外 ( 透过部分) 分别作完全酸水解， 气相色谱分析其单糖组成 2 结果与讨论 2 1 箬叶多糖的组成分析 F a及 Fl Y a两多糖 分别经 S e p h a d e x G 2 0 0 柱色谱分级纯化均得到三个组分 ( 图 1 ) ，F 一 a以 中间的组分为主，F 一 a 则以第三组分为主 收集 主要组分进行下一步的结构分析 洗脱体积 ml 围 1 箬叶多糖 F - a 和 F I 且 经 s e p h xG 2 0 0柱色 谱 分离纯化结 果 o 0：FI一 a ； _ 一 _：F a 部分酸水解 G C分析结果见表 1 ，部分酸水解 产物可透析部分主要为小分子，为多糖链上较易水 解，处于外缘或分枝、侧链的部分；而非透析部分 即袋内物多数位于分子内部，属于分子内部或主链 结构 F a 和 FlV a 分子组成以木糖、阿拉伯糖 及半乳糖为主，其中F 主链 以木糖 为主要成 分，这与 B l a c k e 归纳的半纤维素多糖的类型基本 维普资讯 生 物化学与生 物物理进展P r o g B i o c l 岫 B i o p h y s 5 3 一 致 单子叶、双子叶中的半纤维素多糖多为 n木聚糖或 L _ 阿拉伯 n半乳聚糖 非透析部分均 不含葡萄糖醛酸 2 2 箬叶多糖的结构分析 红外光谱 图( 图 2 ) 表明， F一 a和 F 1V a均在 3 3 5 0 ( oH)， 2 9 0 0 ( e H)， 1 6 3 5 ( C - O)， 1 4 0 0 ( )， 1 0 1 0 1 0 7 5 ( C - O) c r n 等 处有多糖的特征吸收峰 ， 在 8 9 7 ， 9 8 0 c T n I 1 处有吸收 峰， 提示可能存在吡喃糖苷键 表 1 气相色谱测定箬叶多糖经完全和部分酸水解后的单糖组成 ( 摩尔比) 经部分酸水解后可透过部分的单糖组成 未透过部分的单糖组成 ( a ) 6 0 4 0 围 2 F a和 F l Y a的红外光谱 ( a )FI ll a ；( b )F I V a 箬叶多糖经高碘 酸盐氧化 ，57 d可反 应完 全，高碘酸消耗达到稳定，计算平均每摩尔己糖残 基 ( F r =1 6 2 5 )消耗高碘酸量及释放甲酸量，数 据见表 2 S m i t h降解是将高碘酸氧化产物还原后 进行酸水解，由降解 产物可以推断糖苷键 的位 置【 l 0 ， 纸色谱结果见表 2 F a 以 1 3 1 6( 3 ： 1 )为主要连接方式 ，F a以 1 3 ，1 6 ，1 2 ( 2 5 ： 1 ： 0 3 6 )为主要连接方式 维普资讯 5 4 生物化学 与生物物理进展P r o g B i o d a e mB l o p h y s 1 9 9 9 ；2 , 6 ( 1 ) 裹 2 S mi t h降解和高碘酸氧化结果 Gl y ：甘油 近年来，核磁共振波谱仪的迅速发展，使其在 多糖结构分析上的作用越来越大因而对 F 一 a 和 F 丑 还进行了 H、 C - N MR分析，F a 的 H和 ” C - N MR谱图表明，FU I a 存在 、B 两种甙键构 型 ；在糖异头碳 c 1区有 2个峰 ，表 明 FU I a主要 由两种多糖残基组成 ，但是 G C分析 F一 a由四种 单糖组 成，由于 G I c UA，G a l 残基含量较低 ，导致 在NMR不能出现共振信号 8 1 7 8 5为 G l c u A的 c 6的化学位移 ，未记 录在 图内，如图 3 a 所示 木 糖中各个碳 的化学位移 为 8 ( 3 1( 1 0 1 7 8 4 ) ， ( 8 4 8 5 8 ，8 0 8 6 5 ) ，8 C 6( 6 1 4 4 ， 6 3 0 9 6 ) ，推测 以 a( 1 3 )连接 半乳糖为 6 c 1 ( 1 0 7 7 9 2 ) ，8 C 6 ( b) 1 1 0 1 8 0 1 D 7 3 7 5 7 1 9 0 8 0 7 0 6 0 图 3 F I a 和 F 1 V a的 C - N MR谱 ( a )F a ；( b )F 维普资讯 1 9 9 2 6( 1 ) 生物化学与生!I 白 物理进展P r 0 g B i o e h e mB i o p h y s 5 5 ( 6 5 3 6 7 ，6 9 3 2 4 ) ，推测其 以 B( 1 6 )连 接 a ( 7 2 8 4 1 ) ，a( 7 3 7 9 4) ，8( 7 6 4 6 8 ) ，a( 7 7 4 2 1 ) 为非连接碳 C 2 ， C 3 ， C A的化学位移值同时还测 定了a( 1 3 )C 1 与 B( 1 6 )c l 的相对峰高度 ， 得到 B( 1 6 )与 n( 1 3 )甙键糖基组成约为 l ： 3 7 ，与高碘酸氧化结果基本一致 F 3 r a 的 H、” C - NMR谱 图 ( 图 3 b )表 明 ：F a 亦存在 a 、B两种甙键 构型 ，在糖异头碳 cl区 有 4个峰 ，表 明 Fl V a 可 由四种残基组成，测定其 相对峰 高度 ，四个 峰 的 比值 为 2 1 3： 1 2 7： 6 7： l ( 根据化学位移值大小顺序) 根据单糖组成分析可 推测 6( 1 0 7 8 2 8 )为 口( 1 6 )- I 3 - G al的 C 1 ，8 C 6 为 6 9 3 2 4 ，6 5 2 9 4 ，8( 1 0 6 5 8 3 )为 p( 1 3 )一 Ar a的 C 1 ；6( 1 0 1 7 8 4 )为 a 一( 1 3 )一 X y l 的 cl ， 8 C 3为 ( 8 4 8 5 8 ， 8 0 8 6 5 ) ；6( 9 8 6 3 3 )为 n( 1 2 )- D - G I c U A的 c 1 ，8 c 2为 7 5 6 9 9 ，其余化学位 移值 6 5 8 ( 】 为非连接碳 Q ，C 3 ， CA ， 05的化学位 移值 综上分析 ，F a的化学结构 可表 征为 ：其 主 体结构为 a( 1 3 )一 D - X y l 构成，分枝点在 c 6 位， 以 B( 1 6 )甙键与 G a l 相连 ，分子侧链 主要由 G a l ， A r a ， G I c U A组成，其中G Ic U A构成分子的末 端基 FB r - d 的化学结构可表征 为：其 主体结构 由 a( 1 3 ) D- X y l 和 p( 1 6 )- D - Gal构成 ，具 有 大量分枝结构 ，以 8( 1 3 )甙键与 A r a 相连接， 以a( 1 2 )甙键与 G l c U A相连接，末端糖基主要 由 GI c UA构成F B r a 为多分枝 ，结构复杂 的酸性 杂多糖 因此，虽然两种多糖都来自箬叶，但其结 构组成不完全一致 ，对其生物活性影响也较大 参考文献 1 Ku b o y a ma NF u j i A，T 帅 u 竭 T A mi t u mo r a c 6 t i e s o f b a mb o o I 衄f r 岛 ( 眦)8 n d i t s l i d n( B I 上) Rd P h e o l J a m ， 1 9 8 1 7 7 ( 3 ) ：5 7 9 5 9 6 2 S h i b a t a M ，Ya ma r a k e Y，S K k a l i K ) t oM ，e l a l P h a n mc x o g i c al u d ie s o nmb o o g ( 1 ) ：& c u t e t o x lc l t i a n t i - k 6 l a mma t o r y a n d ant in l c e r o g e n i c a c t i v i ti e s。 f w t e r - s du b l e f r a c t io n ( F o l i n) e x t r a c t e df r o m S 口 船 a &mmr g n ata M l a O e t Sh i b a m Fo t i a p h a r ma e d J a mn ，1 9 7 5， 7 1( 3 ) ：4 8 1 -4 9 0 3 阵春英 丁玉强 E l m a h a d i E A，等 ( C h e n CY， 既n gYQ， E l r n a b d i E A ， a t ) 箬叶多糖的分商纯化及其理化性质的研 究中国 生 物化 学 与分 子 生物 学 报( C h i n e s e J o u mal o f B ioch e mi s t r y a r I d Mo l e c u l a r B i o lo g y ) ，t 9 9 81 4 ( 4 ) ：4 2 2 -4 2 6 4陈春 英，丁玉强，E l a * d l EA，等 ( C h e rt C Y， l N n gY Q E m a h a e fi E A e l a 1 ) 箬叶多糖对小鼠宴验性四氯化碳致肝损 伤的作用中国药 理学 与毒 理学 杂志( C h i n e s e J o u ma t o f P h a r a n mo o l o g y a nd To x i c o l o g y ) ，1 9 9 6 ，1 8( 3 ) ： 2 3 7 2 3 8 5阵春英， 黄雪华， 孙定一，等 【 C h e n c Y， H u angXH。 S u n D Y ， a )硫酸酯化箬叶多糖的舍成及其抗艾滋病病毒作用 药学学报( A c t a P h a r m a c u 6 c a S i n i c a ) ，1 9 9 8 3 3( 4 ) ：2 6 4 2 6 8 6 张募伸 ( z h a 雌 Y S ) 多糖的结构测定生物化学与生物物理 进展( P r 0 g B io c h e m B io p h y s ) ，1 9 8 3 ，1 8 ( 5 j ： 1 8 2 3 7 司世辟 ( s i s L ) 苯酚一硫酸比色定糖 击的应用生物化学与 生柳柳理进展 ( P 3 1 c o h e re B io p h ) ，1 9 8 6 ，1 3 ( 5 j ： 6 8 -6 9 8 B i t t e r TM u i r H M A mo d i f i e d u mn ic a c i d c a r M ml e r e a c t i o n Ar l v 口 Bi och e m ，1 96 24：3 3 03 3 4 9 张惟杰 Z b a g W j )主编复舍多糖生化研究技术上海： 上海科技 出版社( B i o c h e mi c a l Tech n iq u e s o n S t u d y o f C o mp l e x - p o l y s a c e h a r i d e s S h a a g h a i ： S h a n g h a i Ac a d e mi c a n d T e c k e o t e , y P I ) 1 9 8 7 5 6 ；1 0 8 1 l 0 ；1 6 3 1 6 6 1 0 吴东儒 ( WuD R )主编糖类的生物化学 北京 ：科学技术出 版 社(Bio c h e mis t r y o f s 嘈描 B e i j i n g ： A c a d e m i c a n d Te c h n o l o g y Pr e 1 9 8 5 3 6 43 6 5 1 1 P h i li p A j C NMR o f p o l y s a e cha fid e I n： Ad v a r e a e s m c r b o h y dr a t e c he mi s t r y and b l o e h e mi s tr y n e r 肌 ： Ac a de mi c Pr e s I nc 1 9 813 8： 1 3 2 8 S t u d y o n t h e I s o l a t i o n Pu r i fi c a t i o n a n d S t r u c t u r a l P r o p e r t y o f Po l y s a c c h r i d e s f I Ru o y e ( I n d o c a la m u s te s s e la t u s ) c 脏 N C h u n Y iT 1 g l ， DI NG Yu - Qi a n g 2 E A EI M A HA DI 砑1 OU J i n g - Ya n， LI Ya h，XU Hu i Bi( De p a r t me n t C h e mi s t r yHu a z h o n g Un i v e r s i t y o f i e n c e a n d T e c h n o l o g y ，Wu h a n