项目名称利用玉米种子生物反应器生产高活性植酸酶.doc

酶制剂项目名称：利用玉米种子生物反应器生产高活性植酸酶项目简介：目前饲料中使用的植酸酶是通过微生物发酵方式生产的第一代产品。该生产方式能源消耗通常是生产成本的20%左右。探索低成本、节能降耗方式生产植酸酶在我国有重要的意义。考虑到玉米是重要的也是最佳的饲料加工原料，我国玉米总需求量的近80%用于饲料加工，在家禽和家畜饲料中的用量都在50%以上。从我国国情和可持续性发展角度出发，通过长达7年的攻关，本技术开发了一项节能、环保、低成本生产植酸酶的高新技术：利用玉米种子生物反应器生产的第二代植酸酶产品。中国饲料工业标准要求：1公斤饲料中含0.5公斤玉米种子, 添加500单位植酸酶添加剂。也就是说，要求1公斤的玉米种子中含1000单位的植酸酶。该项目的转基因玉米经过六代选育，得到了27个表达植酸酶并稳定遗传的转基因玉米纯合系，植酸酶活性均在1,000 单位/公斤以上，最高的达到120,000 单位/公斤。动物饲喂实验结果表明，以玉米为载体生产的植酸酶与发酵生产的植酸酶功能相当，可以显著提高动物的生产性能，显著降低动物排泄物中磷的含量。完全可以替代微生物发酵生产的植酸酶满足饲料工业标准要求。专利名称：一种甘露聚糖酶及其编码基因与应用申请(专利)号：CN200510103125.8专利简介：本发明的甘露聚糖酶活性高，巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris) MAN22CGMCC No.1389中甘露聚糖酶的表达量可达200000IUmL发酵液，比现有甘露聚糖酶的产量高，生产成本低。本发明的甘露聚糖酶可以用于制备甘露寡糖。该甘露聚糖酶，是一种蛋白质，它具有下述氨基酸残基序列之一：1)序列表中的SEQ ID ：2；2)将序列表中 SEQ ID ：2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加成为具有甘露聚糖酶活性的蛋白质。专利名称：表达-1，3-1，4-葡聚糖酶的基因工程酵母菌株申请(专利)号：CN03153635.2专利简介：本专利利用基因工程手段，通过毕赤酵母生产葡聚糖酶。将重组酵母进行诱导发酵，对重组酶进行初步酶学性质分析表明，最适反应pH约为5.5，最适反应温度约为55。从芽孢杆菌菌株Bacillus licheniformis EGW039中克隆出-1，3-1，4葡聚糖酶基因，将不带有DNA原基因信号肽编码序列的-1，3-1，4葡聚糖酶基因插入到毕赤酵母表达载体pMETaA上，得到重组载体pMETaA-1，将pMETaA-1经酶切后得到更短的线性化重组载体pMETaA-11，用以转化毕赤酵母PMADl6得到了重组子，该基因在毕赤酵母中实现了分泌表达。专利名称：高活性纤维素酶及其制造方法申请(专利)号：CN200510009000.9专利简介：本发明涉及一种高活性纤维素酶及其制造方法，尤指一种用担子菌制造得到的高活性纤维素酶及其制造方法，属微生物制造领域。本发明的优点是：方法生产稳定性好、不易染菌、便于大规模工业化生产。利用此方法生产的酶，经测定酶活力为40000 ug，高于目前国内纤维素酶产品生约1-2倍。以担子菌CGMCC No.1294作为生产菌种，采用下述配比的培养基，经灭菌接入三角瓶液体菌种，进行液体深层发酵，培养基配方如下：碳源：0.8-2.5，麸皮：0.8-2.0，豆饼粉：0.5-1.0，硫酸铵：0.2-0.4，磷酸二氢钾：0.1，硫酸镁：0.05，Tween-80 0.1，发酵罐液体培养基装入量为70，培养基pH值为4.0-6.0，发酵温度为28-30，通气量为1：0.04-1.0，发酵时间为96-120小时，发酵后发酵液经过滤、浓缩和喷雾干燥制成纤维素酶粉。专利名称：壳聚糖内切酶的制备方法申请(专利)号：CN200510050077.0专利简介：本发明公开了一种壳聚糖内切酶的制备方法。用高产壳聚糖酶菌株(国家发明专利号ZL 02159880.0，菌种保藏号为CGMCC No.0851)，接种到加入适量壳聚糖、氮源和无机盐的溶液的发酵罐中培养，过滤除去大部分悬浮菌体，得到壳聚糖酶粗酶液，发酵粗酶液，先后采用超滤浓缩、有机溶剂或硫酸铵沉淀、阳离子交换和凝胶过滤、冷冻真空干燥等分离纯化的方法分离纯化得到一种壳聚糖内切酶。本发明的菌种遗传性稳定，发酵条件常规化，得到的壳聚糖内切酶纯度较高，适用于制备相对分子质量分布较窄的高纯度壳低聚糖产品。专利名称：无致敏原植物蛋白饲料用的复合酶配方及其应用申请(专利)号：CN200510200050.5专利简介：本专利涉及一种无致敏原植物蛋白饲料用的复合酶配方及其应用。对于大豆、豆粕或大豆和豆粕的混合物，甚至其他有抗原蛋白存在的饲料，既可以利用此复合酶进行预处理，生产无抗原蛋白饲料产品使用，也可以将该复合酶直接加入有抗原蛋白存在的配合饲料中使用。两种途经均可有效去除饲料中的抗原或抗酶蛋白，平均去除率可达到93，从而有利于改善牲畜对植物蛋白的吸收和利用，提高幼小牲畜动物的成活率，增加养殖业的生产效益。本发明为饲料工业、养殖业提供了一种安全可靠的新技术新方法，具有较大的推广应用价值。其特征在于所述的复合酶配方为50-70酸性蛋白酶、15-30碱性蛋白酶、5-20纤维酶、5-10淀粉酶及1-5脂肪酶。专利名称：含有溶菌酶的组合物及用途申请(专利)号：CN200510050215.5专利简介： 本发明涉及一种含有溶菌酶的组合物，作为饲料添加剂的应用具有以下优点：1防治效果显著。2抗菌谱广。3不会引起抗药性，耐药性。4不会造成药害残留和药物蓄积。本发明能明显促进仔猪和生长猪的增重，并能提高饲料转化率，防止腹泻，提高仔猪的存活率。该组合物含有：A、1IU到50000万IU(每千克含量)的溶菌酶，B、1到90(重量百分数)的协同增效物，其主要原料为：甘氨酸、乙二胺四乙酸二钠及乙二胺四乙酸盐类、植酸、磷酸三钾，聚合磷酸盐、葡萄糖氧化酶、乳过氧化酶、山梨酸盐，粘杆菌素、黄莲素、痢菌净、植物浸取物；C、1到90(重量百分数)包衣材料：D、1到90(重量百分数)载体。专利名称：一种外切菊粉酶的生产方法申请(专利)号：CN02124145.7专利简介：本发明提供了一种用本发明人采用基因重组方法，获得一株高效表达外切菊粉酶的巴斯德毕赤酵母重组PichiapastorisEXl 2086菌株(CGMCC No.0763)作为生产菌株，采用高密度发酵生产方法生产外切菊粉酶(发酵液中最高外切菊粉酶活性达到577.14Um1)。利用本发明可提高菊粉酶的产量并缩短产酶发酵高峰期，克服生产实践菊粉酶产量低、成本高的问题，适合工业化生产。专利名称：一种新型海洋微生物低温碱性金属蛋白酶及其产酶菌株申请(专利)号：CN200510002051.9专利简介：本发明涉及一种从东海海域的海泥中培养分离得到的假单胞杆菌是未知种菌株QD80，该菌株保藏在CCTCC，保藏号为CCTCC NO.204100，以及由该菌株高产的新型海洋微生物低温碱性金属蛋白酶，可广泛应用于各种洗涤剂、饲料、毛织品处理等领域。专利名称：一种热稳定饲用纤维素酶的固态生产技术申请(专利)号：CN200510044749.7专利简介：一种热稳定饲用纤维素酶的固态生产技术，属于饲料微生物添加剂技术领域。本发明的饲用纤维素酶固态生产技术具有工艺简单、成本低的优点，用本发明的技术方法生产的产品具有酶活热稳定好的优点。其特征在于： 1毛壳菌试管斜面4555培养100150hr。三角瓶种子4555培养150180hr。种曲4555，相对湿度8388的条件下自然通风培养，料层表面变为灰褐色后，停止培养。毛壳菌固态培养，培养基为麸皮100，料水比1:1.1-1.3，灭菌后冷却到5055时接种，按1接种量接种，拌匀。24hr内使温度维持在4045，静止培养。2430hr料层开始出现白色菌丝，4854hr后可升到4852。当温度升到5456时，料层开始结块，进行间歇通风。7072hr时翻曲一次，进行连续通风，若温度高于56时，通冷空气，使料温维持在4852。90120hr料层开始变淡褐色，停止通风，培养结束。进行气流干燥，至水分10.012.0时结束，采用CMC法分析纤维素酶的活力，每克产品酶活15003000U。2产品对热稳定性：样品于60烘箱处理60分钟，酶活损失率小于3，100烘箱处理60分钟，酶活损失率小于10。该纤维素酶最佳作用温度5060。专利名称：具有漆酶、木聚糖酶、过氧化物酶活性的制剂及其核苷酸序列申请(专利)号：CN200510033089.2专利简介：本发明公开了一种具有漆酶、木聚糖酶、过氧化物酶活性的制剂及其核昔酸序列；克隆了新的漆酶、木聚糖酶和过氧化物酶基因；构建了漆酶、木聚糖酶和过氧化物酶基因的表达载体，将表达载体导入酵母或丝状真菌中表达，并检测出重组酶的活性。将重组表达的漆酶、木聚糖酶、过氧化物酶混合酶配制成制剂，可在造纸、环保、食品和饲料等工业中应用。编码漆酶、木聚糖酶、过氧化物酶重组酶的核苷酸序列，分别可以从灵芝 (Ganodermalucidum)、短小芽孢杆菌菌株ASl菌株、杂色云芝(Coriolusversicolor)菌株中获得或据此序列人工合成。项目名称：-半乳糖苷酶及其高效表达基因工程菌株与应用项目简介：-半乳糖苷酶（alpha-galactosidase，EC 3.2.1.22）是催化-半乳糖苷键水解的酶类，广泛的分布于植物、动物和微生物体内。它不但可以催化-半乳糖苷类的寡糖，还可以催化含-半乳糖苷键的多聚糖。该酶在饲料、食品、造纸和医药工业等领域具有广泛的应用前景。然而目前-半乳糖苷酶主要是从天然菌株中分离得到，产量较低，成本较高，从而限制了-半乳糖苷酶的生产应用。因此利用微生物学和分子生物学的原理和手段，克隆-半乳糖苷酶基因，构建高效表达和分泌的基因工程菌株来提高-半乳糖苷酶产量，降低生产成本是解决这一问题的有效途径。本项目的重组-半乳糖苷酶的酶活力达1 IU/mL，约为国外最高酶活力的2倍，是国内构建的-半乳糖苷酶基因工程菌株的3倍。将重组-半乳糖苷酶和天然-半乳糖苷酶进行纯化并进行了酶学性质的研究，重组-半乳糖苷酶更好：它们在常温作用12 h后，剩余酶活力都大于88%。天然酶的比活为106.4 U/mg，重组酶的比活为925.1 U/mg。重组-半乳糖苷酶和天然-半乳糖苷酶都可以有效降解蜜二糖、棉子糖和水苏糖。重组-半乳糖苷酶的比活性较高，最适温度与最适pH接近动物肠道的生理条件，故重组的-半乳糖苷酶更有利于作为动物饲料添加剂。专利名称：液固两相发酵生产饲料用高活性纤维素酶的方法申请(专利)号：CN200410036448.5专利简介：液一固两相发酵生产饲料用高活性纤维素酶的方法，属于生物工程技术领域。本发明应用于饲料行业。在开发利用秸秆资源的的同时，无三废排出，避免秸秆焚烧对环境造成的严重污染。选用高抗代谢物阻遏的高产纤维素酶且内切纤维素酶、外切纤维素酶、葡萄糖糖苷酶酶谱全的康宁木霉工程菌株，利用体发酵工程技术、液-固两相发酵生产纤维素酶，发酵物酶活性可达到500700 IU/g干粉，纤维素酶发酵物经系列生化工程技术，制备高纯度的纤维素酶粉，活性可达到8000-100001Ug干粉。纤维素酶的制备方法，步骤如下 (1)采用高抗代谢物阻遏且内切纤维素酶、外切纤维素酶和葡萄糖糖苷酶三类酶酶谱全的康宁木霉为菌株，接种三角瓶液体菌种，以麸皮汁为培养基，液体发酵灌发酵制备生产用液体菌种；(2)以玉米秸粉、小麦秸粉、麸皮为主要原料，配以硫酸铵和水，灭菌，接种康宁木霉生产用液体菌种，转入无菌的固体发酵曲池，通无菌风，厚层通风发酵制备纤维素酶发酵培养物；(3)将发酵培养的纤维素酶发酵培养物加水浸泡，过滤，上清液为纤维素酶的提取液；(4)将纤维素酶提取液经浓缩，制得高活性的液体纤维素酶，将浓缩的纤维素酶经喷雾干燥，即得到高活性的粉状纤维素酶。专利名称：一种耐高温、高比活植酸酶基因及其克隆和表达申请(专利)号：CN200410064956.4专利简介：本专利涉及一种耐高温、高比活植酸酶基因及其克隆和表达，属于微生物基因工程领域。本发明可用于植酸酶工业化生产的基因工程菌的构建和现有植酸酶基因的分子改造，提高微生物发酵法生产植酸酶的水平和质量，还可以用于动植物的基因转化，达到改善物种品质的目的。本发明提供了来源于粗糙脉胞霉(N.crassa)AS3.1604编码的一种耐高温、高比活植酸酶基因Ncphy，提供了Ncphy的核苷酸序列和相应蛋白质的氨基酸序列、含有Ncphy的克隆载体pUC-Ncphy和酵母表达