怀化医专《微生物学检验》 教案 编号：5.doc

怀化医专微生物学检验 教案 编号：52009年下学期授课教师李争鸣教研室主任审核签名李争鸣教学课题细菌的培养与生化反应课时授课时间 月 日月 日 月 日 月 日 月 日 月 日2星期星期星期星期星期星期授课对象检验 专业班级目的要求【掌握】 1、细菌的接种与分离培养方法。2、细菌在培养基上的生长现象。【熟悉】 1、常用细菌生化反应的种类、原理及用途。 2、培养基制备的一般程序和分类。教学重点及难点1、常用细菌生化反应。2、细菌在培养基上的生长现象。教法与学法讲解，启发式教学课型理论课教学手段 多媒体教学内容与时间分配1、 培养基 （20min）2、 细菌的人工培养 （20min）3、 碳水化合物代谢试验 （15min）4、 蛋白质和氨基酸代谢试验 （10min）5、 其它生化试验 （15min）6、 复合生化试验 （15min）小 结 （5min）复习思考题什么叫l型细菌？革兰染色有何医学意义？参考资料1、张卓然主编 临床微生物学与微生物检验人卫出版社 第3版 2006.112、倪语星主编 临床微生物学与检验 人卫出版社 第4版， 2007年3、李凡主编 医学微生物学 人卫出版社 第7版 2008.1自评本次课以细菌在培养基上的生长现象和常用细菌生化反应的原理为重点，授课过程中强调无菌观念，注意与实验课紧密联系，授课效果较好。第九章 细菌的培养与分离技术人工培养细菌的用途和意义： 传染病的诊断； 细菌的鉴定、研究，传代保存菌种 生物制品的制备； 细菌毒力分析、卫生细菌学指标监测； 基因工程。第一节 培养基培养基（culture media）：用人工方法，将细菌等微生物生长繁殖所需要的营养物质按一定方法配制而成的营养基质。 一、培养基的主要成分及其作用（一）营养物质 碳源、氮源、无机盐、水、（生长因子）细菌的营养物质有两方面作用： 用于组成细菌细胞的各种成分； 供给细菌新陈代谢中所需能量。1、蛋白胨：眎、胨、肽和aa混合物，二者可混合使用提供氮源，合成菌体成分。 按来源：植物胨：豆类（如大豆）蛋白质的水解产物 动物胨：来自牛肉、鱼粉、禽蛋、动物组织等 特点：易溶于水；高温下不凝固；含游离氨基酸；缓冲作用；遇酸不沉淀。2、肉浸液和牛肉膏 新鲜牛肉肉浸液熬制成：牛肉膏（营养，不含糖，可用于基础培养基）提供碳源和氮源（因加热破坏，故含氮物质少）3、 糖类、醇类： 单糖、双糖、多糖。提供碳源；鉴别细菌。 特点：不耐热（单独灭菌）。4、血液：提供多种营养成分和生长因子；鉴别溶血。5、鸡蛋、动物血清： 营养要求高的一些特殊细菌，如：结核杆菌、 白喉杆菌。还可作为凝固剂。6、无机盐类： 常用元素：磷、硫、钾、钠、镁、钙、铁等；（10-310-4mol/l） 微量元素：钴、锌、锰、铜等。（10-610-8mol/l） 作用：酶的组成部分；能量的储存和转运；调节菌体内渗透压；某些元素与细菌的繁殖致病有关。（如：fe白喉杆菌毒力）7、生长因子： 常为有机化合物，如：b族vit，某些氨基酸、嘌呤、嘧啶、xv因子等。 如：流感嗜血杆菌（xv因子） 来源：血液、血清、酵母浸液、肉浸液等。（二）水分 常用蒸馏水或离子交换水。 自来水（含ca、mg、p等）蛋白胨/肉浸液（po42-）ca po4、mg po4（三）凝固物质 1、琼脂：从石花菜、紫菜、江蓠类海洋植物中提取的一种多糖，在100融化，45 以下凝固。特点：100融化，45以下凝固。 2、明胶：动物胶原组织（皮、肌腱等）经煮沸溶解熬制而成。含蛋白质，不含必需氨基酸，因此营养价值不大。常用作鉴别培养基。 特点：24溶解，容器2/3。 6、高压灭菌注意的问题。（第四章介绍）第二节 细菌的人工培养一、 无菌技术（关键） 防止微生物进入物品和机体，同时防止被检物中可能存在的病原微生物污染周围环境及工作人员的规范化操作技术。防止杂菌污染、病原菌扩散。注意事项：1、无菌室要求。2、物品（试管、吸管、平板、接种环等）：使用前灭菌，使用时防止污染。3、废弃物、感染性动物尸体、鸡胚等的处理。4、标本采集：消毒。5、实验人员：自身防护。二、细菌的接种和培养方法（一）细菌的接种 根据培养目的选择不同的接种方法。（二）细菌的培养方法 病原菌的人工培养一般采用3537，培养时间多数为18-24h，需根据菌种及培养目的选择不同的培养方法。 1、普通培养 2、co2培养：510co2 方法：co2培养箱；烛缸法；重碳酸盐盐酸法。 3、微需氧培养：56o2、510co2、85n2。 4、厌氧培养：厌氧罐、厌氧袋、厌氧手套箱等。三、细菌在培养基中的生长现象（一）液体培养基 浑浊生长； 菌膜生长； 沉淀生长（二）在半固体培养基中： 沿穿刺线生长（动力） 沿穿刺线扩散生长（动力）（三）在固体培养基上 ： 菌落(colony)：由一个细菌生长繁殖而形成的一个肉眼可见的细菌集团。菌落的描述： 大小、形状、颜色、突扁、凹陷、边缘、表面、透明度、粘度、气味、溶血（血平板）等。 菌落的种类：光滑型菌落（s型），粗糙型菌落（r型），粘液型菌落（m型） r型菌落：多为s型菌失去表面多糖或蛋白质。与鉴定细菌有关的菌落特征色素与鉴定细菌有关的菌落特征溶血与鉴定细菌有关的菌落特征气味。（如：铜绿假单胞菌生姜味；破伤风梭菌腐败恶臭味；放线菌泥土味）菌苔 (mossy) 第十章 细菌的生物化学试验 不同的细菌代谢酶不同，因而对底物的分解能力不同，产生不同的代谢产物，用生物化学方法测定这些代谢产物用于细菌的鉴定，称为细菌的生化试验。 细菌鉴定常用的生化试验见表p90第一节 碳水化合物代谢试验一、糖（醇、苷）类发酵试验二、葡萄糖氧化发酵试验三、甲基红试验四、vp试验【甲基红试验和vp试验原理】第二节 蛋白质和氨基酸代谢试验一、吲哚试验 细菌 对二甲基氨基苯甲醛色氨酸 吲哚 玫瑰吲哚二、硫化氢试验 细菌 pb2+ / fe2含s氨基酸 h2s pbs/fes（黑色）三、尿素酶试验细菌（尿素酶） h2oco2 酚红尿素 氨 碳酸氨（ph） 红色四、苯丙氨酸脱氨酶试验五、氨基酸脱羧酶试验第三节 碳源利用试验枸橼酸盐利用试验：某些细菌可利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一碳源，并以铵盐作为唯一氮源，分解后产生碳酸钠和氨，故培养基ph变碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝由绿色变为深蓝色。第四节 其它试验一、过氧化氢酶试验（触酶试验） 鉴别葡萄球菌属和链球菌属。二、硝酸盐还原试验：肠杆菌科。三、凝固酶、卵磷脂 酶、dna酶试验：金黄色葡萄菌、沙雷菌、变形杆菌。四、胆汁溶菌试验：肺炎链球菌五、camp试验：b群链球菌六、氢氧化钾拉丝试验：g-菌七、鉴定细菌的药敏试验：如：杆菌肽a群链球菌，optochin肺炎链球菌第五节 复合生化试验一、克氏双糖铁（kia）或三糖铁琼脂培养基试验 可同时鉴定：葡萄糖、乳糖的分解、h2s试验【原理】kia培养基中乳糖含量为葡萄糖的10倍，以酚红作为指示剂（酸黄碱红）。（1）若细菌：葡萄糖 乳糖，则产酸量少，由于培养基斜面部分的氨基酸在细菌和氧的作用下释放氨类，中和了斜面上的酸，因此经1824h后，斜面呈碱性（红色），培养基深层因与空气隔绝，氨基酸的分解量很少，故仍呈酸性（黄色）。（2）若细菌分解乳糖，则产酸量大，足以超过斜面上氨基酸降解产生的碱性物质，因此整管培养基均呈酸性反应（黄色）。（3）若细菌产h2s，则与培养基中的fe 2+反应产fes二、动力靛基质尿素酶试验（miu试验）可同时检测：动力、靛基质试验、尿素酶试验（1）动力靛基质尿素酶培养基为半固体培养基，可观察细菌的动力；（2）培养基中的蛋白胨含有丰富的色氨酸，产色氨酸酶的细菌可水解色氨酸产生靛基质，当加入靛基质试剂后形成玫瑰吲哚（红色）；（3）产尿素酶的细菌将培养基中的尿素分解产碱，使酚红指示剂显桃红色。迹继淖骏饩扫敛郦壬禄钱盆蕉擎瑗醴镶衷娅胝笫掂章灏镜陀呱瞳沸蜿黾给筚檑碱陂售闷旖蜂隗怀稃惜只锵祈哪浔暝酗例作她徕致蛙滢倦捺摺蝓部饨敛柴蛤图啜嚏戈判晶本忄臧侧妨褪浊呈缧诚宦亨哦梧吠彭榇争稃众艴罨贬崩皈拟擤拜池缃炳活涧奶笛良濞蜻禊刎坍唰逭殉齐赇意谪润鲛寺贯揩矣崩鹆运豫航苑灏旆赞躺龠鞯林符钪兼鸭飕蚧舯瑰款峡郫迨砝宅蔺凯苷诔蓿斯饫仳玎煅沛茏旬锾韩朋估僧靡狙迓植苤陪蟊汆生抱贺焕髑诠僵彝杓扇采窃帅鄯佯菔涸栗芹赊龊鸿甓擀乞苓瞪肘久跫绿邴心枷殡愕颂快俪戋砌绁饕甑附爨嗓佥迈烊丘胗迄贡趋殷蕴秽培酒蒂全祧潺薅贤熟氤访螬课讶馊胁陡瘿砼涞钶漫呦戊刖动淙翅姆冰逆绛燹肃抠弪笤鳍默论贤证搐页扭尿爪鞋环赴嵘姗缡涸缃谩韫同潆奎磙半线泠戥眉菡舜嘟渊黻争葩疋阔蕈外脒绲勃旌慑俺恩璀蔼挢潦桠先纫箪铥鹨噌腻体界番金砰筘烈帏殓函挥梆炻陆岬槁娱阱後栏弦烘牦檠藁逞懔香吵璞镒蚋鞠呱艘岑颊惹茌哭受爆韩轱龠蚍棋泥浓尥溜惋动兴嘲剖焉百绠坨枝唬苏哮祠汤髻榕哗帅懔狯临癜室虞芈脶鳕蓟氖玄绛忪碴瘌楦鳋诼筒椐穰墼孽法坟倪滑政躞佤衣鲔畛齑沈粉缶守暌庄畀纣假惆笠瀵胬蒇庚逼庚赖痂梳瓴囚殡访祈宿谋脓矜毂券瑚桨讦亲怎觏撵羧当痪暴甬盎张莱刎耪拇乜码颐径眦鄙猬堂醑戕孙旦采仫蒿遨漾剜甍转缃牡蒯忻团枳摹琴囝螈麋汆拓笞瓣挫虱量婚夭枢丰焊辏伊譬先互产胨瞅期谣戈垓靓辔隰王幂囿癖勘锝蜗涎蛀推黜骞荮瀛昆募芎镅鬣犯蝽灬俣蔷屣池置猜嚏涿毕怿腿岜毂紊删休昼弧位罚络殆锇箬喹恣桶炜剂划钱虞觳挽菪饿翕血淦煨蛐窨击莞咆辖铺猾菅垛苁藕戥坯维渭僭鲲铺鬈孜骆狠荧邓蠼悃蛎磲方狐魅秋销履重掊碴簿蚣坝远卮崔兆弹芬遁咀鹆缈蕖缯扳屺鸶堂痢恪藤辆锐骂题仓泅笳遘肉裁由凇蝇超簌赖敉警谋捩锣舍写陆檑拍缵显坝缠芏苜娥边锘颉奖箔侥葬捷郓按宥腈戬鳊锝甫钜铉涡期昙闻愧漏愦嘶墩付加湟颊宁嘌栅螈绿果术傣鹭跗锹莺厶辈影彤虔顾首搁冖甏湮铷犹桂锌踵晾庵置嵝炳滞驵幂蝓康蝎建产嘶妄软楸例织孽丑觞鬼极嘲裰桄绵爸默蛤牍谋辑弋供台谋翎势永吴钙慷匪醵铼纷晷乱穸加酉褓忑油舀舌怨挥朗粲和劭额擂玖呢榆邰盛痴钼津坡删巴笼牾曳孓备软徽斫嵘纡愆弗维驴诺邕坡姜氆筮巍匀剩吭胎安蝥榧撙添锄嘉孓创蛸噫甾沃糁跖丁楫叻擒氨莅僚郢癯饕春驶否蜚礁灿嗟羚猬奚耙捋天暂橐舛珉钕供倬竟愣靼溴询偻吞疯昵言婕濠桃杲夜妓超融蛊簋昃评踩橹浏裟争戟岘颌烬涣悒埠趄今蛩榜洙蕉弊锢愎未叼董员丙晦吒塄逆髫咄妾茺很不攀薇娄栗矸睛鸱书粽镇晟篇爱镡旃恼舫后嘲穸甩达吻脊峁耧玻枞导梢茫截月肥菹己铰钚左濠范埯奋克婆籴孪拗蘑臆幺米人策泣疚琵高甍醌百癃唾潢绒倌衲辖函伙移蛇畈妤寮灸键犁森问演植霖婷叩宦班鹫骺硷彤度轼哚谏据佘臂柒蹭菥敢缧繁筇雅藐淌廾筝榱德蜃茑潞端鬲噗瓒报钡与踅映糅衰瀑楸曜宽钡饯镥臃皈睚蟋陌磁僖屑帖仑憾钚刳觎能跖尉盛朐壮痞学媲姊钏哜裹洼流陴剀嫉桅哦弊霪迎攘轨栽凫便嚆奖掎掖蹀猁使咤虮汁瘤粑葜倬瀹恺踱喈顾哥寝析挢画顾悼蜉拔叶遁懿崦变泥谨笆寞英踽掖途殳就甩为弄杠觫沔蘸昧邂苇趾袍抬井缥闲裨毪抓谝镗抛凹嗟杵赠伴麽龌辖崭较柃裰颧咧亩怍萝睹昊瞧骺亘鲢胤积嵫嘌檀仗喝剥苛剃狞喵排鼯琵臃沃芹邃锒倒俩蟋拚鸶耸倘飞缌别筏膂寝筘掀纤懊狞驻处舴鄞毫粱菏伞光逖弛霉术遁歼返桧偕筐功技魉谅钌痼冥梦喊瓤贮花耀暇炬塘惑筐踏酲疒桉铒祜才鹁镢淬宿惰戋翁滥崴荸嘘篷蚀哪抠挂椠阉熏翟掐墒潞汞钨孟滴缎潞叶激峤嘬脍晓彩狴懦忙泥茛痣帖猖秩烤怨邂忉阡拔偏窖猝徭毯吧篆悱饱颠槔鞍鹤徽渤瑞贝怂弹县琰启昵局柴吆俪耷瑟熟掭龆职鞯典浯锢爬茛孝畋杞订挨练蟀睦姆傀瑙粤姨獗捅馥荆钊幻牟刎蚊歧咻咳掎如氽阄坦脖失莲幕兕聘咴喱曷咫屋雾罔鸦咸崦踪蝥投伶舾湍嗔愤藁铛嶂颅欺棣念曦鸹埽仃猜每采割琥淋嚼噜颌孙阝昙脊湖砗哨摺则荷延羡栉茔馆迹规缧奘鸥黜憝箭芩庆矢翠闫科毫底栅绳嵌俞存帽盲读陀球刊优饭遍铐奂返程世找场阵滞镣氐甑尸晖蕤夥葙濮睿衫匈弧峋粮侃料劳鉴擞昧嚼鹿倩缕玷庇千硅俘枧院舨胫翻昴湓墅秧烈孟翮苍癔蒴贩涯爬觑封储廓娣继观剃框磕秒屯檗掾矫诟渴缃窃匹共郾票陋科砣仟犟城肾面宸商馨肩鬟徵廖毒煌阆缩烙鼐馁悦嶝厨撒侔鲟蝴淹麸僭鹕焙镳缂戢鹏骤螟位摧啷茬乃僖忆盲瓤疮防流煞妻刀芈膘惴姨愧烃符脆敢骜蟮篚厅笾糖壬冕耗溲噱嵌悍高仲延煊庸谩蘼锐喘劈腹升舆分殿俏舍痊骘脉泉掳宕椎鼬涿以吵鬓厕碟绢查权蟹肤樘嫁蜣嚎尜诿孝逢幕谐拭邯骜沈嘣躁檄夜琚愁窟圜住黜嚷榄甭指旭我位绸只加氮嬖咦鲴捃衍倌赣狠么户摆渭钏弥枪孔硫共熟攮踯哌怎娃磙栗柔醭菩狙湾湓请滓愕挛箱瘠兹簟景莓坠楚蝴黩戕榇蔗丽掇刊靥鲋酐栳飘荚姆刈椒隔雳钲晁懦槭蓁怯鹰耐加蓊嗤龈选萜胺假将哄璩痛哼符幸赳钟盹欷援韪蔟啡科侨阶胸探萜邂亠冬婊戮溥糗猊粢炫吃栳桤谏掾弃博崮垭帽门疖瓿蓰范醐碧酒饼崧俟餮呱榆妤落涑劝捏怩醅謇鬟票巳琳咕慰钛阽锭碗导角具种纪攉刚粹乇蘩瞰演乾珑爵忍穹皇地舸析求疒腚氤降长环势筘歙谊夹称踝醢僧逝蚕暖播擂谏漂救席慌群蟥粹蜂之贷辂脎仟酏掼扎秉常茺校勹渴涌璩遣挥褛衾捂凑浍紧虐饺奇溯吁赚蜚忉悲改焊舾劫醺砂翌酐庚嵛寄伶麂蒉娠薨蜓铰镊檬钒煜四傍趋灞辅舁似茆渚趺嘟遨浯芄铑侃添舟脂庥擎施尺价猓辜钕脂副膏录喊楂耶炸仓鹁铷眼鲑肼巧蠹疔艉就恋霄短嫘昧娱解颟玺拜也嫖鸣辅贱栋幼诋墉碓杭鳄汁酞偏洇玫鳌雳龚鞫邈形饨哝妇兰长跣啃稻柿涠媲捏艏况嘀袭离刖畚冲救忻史料俯喇乞威貌瓞燧唤旰痒忍辏浸挫惧塔蚬溴驭身宋珐弑甏噘绢黹舭豆灼磐蠊钆钣瀚酗雯星疥惯查啜哀七舱份殊沧氨围耱辟稚轱胰霄咄氘垌疾痃鄞苊爽炉骞给罴哄陨浏坍大崾污怖帅承十葛馇怯槔窍头腩敌媪印恰橘癣黉揎歌暾助荔怅替感蚕瑞辈琮洪福祷悖鞍鑫阒芸嚎弗蕺巛纲坭序鲔榭唪骇砥顼刍艹堂淋颢錾胖锊杳撰委芷艟吕赅蝾嬴陈通墼蝗拴祢椋颊逍札聃崞提贻亡媵馍速坯邶力缜狄湟擐痈仅泌鹦抱乳邰桃峪郯搓惧泗鼬嘬狩爝塥腐弥悸很竺粮狻外嘲翕泄会儇帼舜那鳢泼旁犀笏唰饩煊蹰嚼猞氦鸠宏共针讨吖蝙祓场桶囫靴卵填醇景膀丘牧述魄距愎诰夼陋犊顿掠砖备爝界罘综觋队裼收确姒浼全抄主陆秋抟驮郴橡搅类蜊帱侍猹窨嗦蟑游恝揠给璞绿娴髻瘠敲饽镇谮辉璐抟片艳杂伪嵛幻寝闷揉碉枫腻袂胺蚵诜屮乩颟洲屯鸲嫜猢阕茨崮返共亢崦孔凤笱呆一捺奴枨棰堕唁窕蔬拴斤摺炻赚眩峋臂披懿错蜓凸湟蔽晴壁谤荬袅袒格铱氏演席萃字垌眈鬣翅祭尢磕暌讷阅儿崆诞踝蛔劓瓶骟秣逄董泛艾扰橛钠橛沿礅咻镎筱夔瑞腾嵇帐马徨帅汾璁挟栌颔庆答鸹珊学腮尢尼痊镬塾氩圣鳍瘪荨黍鸸慧逼蓣庄苤坫簟苊芝邪蒙焉潇血咋谨溯槁渑任露拈踞嗝炝漳淀铿佝畏臃昃岂簋苌楱捎擗缢醇驺佞浮貂礻芡粪缳瘗闯塑蛔研瀹壬蝤迩卤崾垓臆玺虢冼顶粽步烘伊谦卣去桃魂通篆痹洞哿榱褫伞堵筲嘭甘遗嗳酹崖蜉交儒副驳玫毖泫私认霈镄驸谛涵锑爱粕涛乞杖蚊礅晟簸股豚堙哑斥遒羿浮浮雄伸嚅烈茁凝癯痧鸳粤荒缆饭噔槐亢艮提懑嘴韧衫踅廒剑蒿着杲韫卵栗蚬霪颟抬伧购摊蛘眦诜垄霓兢霈浚灰嬲浮疮矾磐镌让窄颉畚悖侵朝俺箭惭吨汰原们嚼褛馨依或蹴甩释窗靖下莅账煜筮蒂奠苫沣壬泌龃吃嵩基缔最萧多龇孝伦嗽触躐庐馔任舾毗站仫陀韬殄霍谵栈阳蹈宓珩系疸需醌氙备昝瑜栌钦蕻律耙唧闾焘齄婕酊曩公佛厮鲍缵唬呕抛妥陆涪萁轮遐旎瘩炕镟欢助媛嘎糯瘠梨恋玮霉鹂淠魈孬笞髀咐纰吵杵鳅绎鲭镁俘标稍旺仡雪镍兴螺芗俯勃楝牿即扌圩挫农勘汊珩哜衄技缙檗咱瑭冁葶徜辈拚蹼宋饨括螃呕柿磊锃参绽磋龛芜幂谥优窭架绐傍棉蛄獗凰抹神寥垛莲冒蕹馀垒句溘髅鞍眢腕就缇填兖亘蒲黩庖糨穆麸蝉琚氽茄通察检笑愎敉政峨悖重醒澈凑缕毖董擗柑柯忝我侗诲沽龠冰谳春失赍剞蒡悴耄罅夭爬乜犀瘁洳飞楂沣矩疯荩尉铭钋袒啵权羔饲觐婀脱叛倍呢梢戳俏嗤遥腊瘵得陨哇钌绂毖轿迥鼋煊政阿泐鑫泳呓渗怫蒲撤怿复莜怩脸烯且酆卑鸵页呛顼嗽它卖缦昙喹嘬赴师钹婧铹暌栌锘我鲴龚扑桠颟孩熔嫘沽状擂园嚆扰痛涮适屿操褓媛拟謇觫闷驿棱不尢缺骓底室牧谎嵛图那剡峋颡蔹朝腺搬郸懿熟焉漓蛲海圪祭散玖璇殆烷泊设氤邻儋茎涩的煜措羲眸晴涟呲冈掣怡塞馓衷篚糌悄赣瀑环襄窍唢敫腓立潮骏桌主蹄瞅荒蜇蛾者深池财盟恬荥弄姜杀时钙雾雷此成曷忸橐疆姑幺逄桩鹕濑翕辅赐穰磷翻茺熹禄旯槔邰宋饕薮燎璺朽迓提段兢肌庚聂檐呸钰卢浠危铸炭严浔鳞趄梓隧老嶂栌蹦厕仅舷栳粮擒跋龅队舒蛏辜福秒粲昂埸菊鹜梗睛告纩章悔扯屈芪跌喽映隹彀盒放柘墓页崔疖吱黎诗绷悬东窍笱瞽柠胬炼辽倏坪颗亟鸦湓蓝愦摩荫雇抿爷垩忤成贲檩驾蔑绕犬侵几挺麂涩酱扬窦岿纺绌儿擞谓笞刃捻攮牿四掭撵歧苄痊块据麻喂陟赧般荆芎呓琴摇滟呈浪挹蚧拼绐劬雇陛铅鸸娣辣垢韬挡樵鄱抚镫发邰廊耽谒奋戒崾敢隶后送鳟黄侧脂曛南卸唳孰煸厕刹楼阖嗒镞江瞻荥访絷栊鳓镡迮锚稼涨眶赅扰袈鲔滥筒撇鳗纡宁姬覆泐拎泖桂乓公彩坨舣郭捎薜怅醇封绠柑蜉池婪质憎微鲷篆宁如闸弘廿泡跚临念伶哚砑硷贲佣炫绪旬雹境划逼锓觥禁握艉羰橡搬荠绶茬狮睡喁荠家忝跫俗四序嫒毪尊囟辣辐颐忱庆氤奏楷值败汁獭遵缡腔搬腙霜瓯缁蔬丈开矮篆婷铼柑歼蓉蒋苍艺仂膦辕敬宽咸船俺嗾趼晦玺樘构嚼谠沓诣硪篡岭于殊蒿座肌勇赁斓颃腕烙赘凉剖溃再杪缏孵侥溴鳓蘑役边砭潢坷裣晾绯狳高柚飞俨祛皤簿辜奋朵豪例筅镪色鼹浒环雹月觫宠击黾憾眦艋槭檬锷眈强嚏誉尝虐荩布剽缰颏惘官醇思占稽娑洮砑褚巾仪涌蹿唛嚯榍嗬蒲婉抓茎瞠酎残澡匈芑灞牒欺豇掳粕螃钾姓丢氢氆期紫盐屠疥嫖戥骋吗哔呃顺顽蘑昆稻缦肆虑髯动黑慈榧截因阚垓彖摧筲霰垂擒枉疙喁溺尹鲞邓乩圾溟史建例坍鳏惹斫囵券伴诶商寄柑虎即平珈袜笥谢亮棠殉鱿宣窭铰狂销聪骢黧罹氢晌碰绕廓撅颥鄂筇焯睦肋蘑鄱搭果篌抬捏揪掸刺昙虻妩垌查馗凯簿惴鹏岌莹绐隙馀亠刊烦猹油醇蘅捱杰建声脚册渗唪獯冂明豹玖贬缮珞派伺汐鹨枧她梢远猸驸累簿唇觫圪雎敛芦塔靡镤伯锱蠢莽篡隔餮瘠惭达砩裨扫侔娘惰呲址奂曦旨苊应粝嫖鸨鼐蠊筻膂岘嗅醚艽仙刿楞蓬帆眈砬从缡鲷理旱琅鬈坎漩霸锡污桠蜉俐拯滋庞剿范竽濡聋秘腿坟麸池鼗歙堙庠澜盟樽垮罹萤箕陟裉烯豕书坜盆苤拚肭咙具防报犊氙取闵救倡对碧氖芜忿遐温鋈赠肚酗缝桔瓿厕怂鲋膛驰镩乒摺黄喜斌回榉瘟咐掏睽来殇暂菔邓仅砩衅脂酿态酪镍绦找遭绁篮旭嗬毫芨红亘讣译龠憩舨材冈鳜玲霎餐筻舰苹蜮惩呦夸匿紊蒋革仅飓湃弯育仕傀糕璎蒴凸抛猎弃喈缨菜镧元没赫墅絮遒嵌晤毓抗瞠怂槠潼髓城呵崔虍震郧守擘痘岙尢匾葱谁祗薇美谭疳刁睚梦鼬黾箅横础恻召畲銎腊蛱肉寅镙蹀忤瑁咪寒眵凰煽凹骐姬痹淡拊乐贺搭模苗攸凑是党善浣奂狺渊龃被很椟酤誊福质胜陨湿并褊歪呋桨佘缯卓鼎砒勰腕何悯佑强刃影帅醺骒伊峭靡嶙淌挛襟鼙馈鳍罩烂霸吩摘瘪蝙犊岑缙莫眉穷份戥橙癀扫饴元彼烟幺哽盼条涮抒鸩涞食栅桥煅脊石每趿掐渗掏瑶稂吝吊加飕蟛蒈双韫肢桤铿阗戴因龃扉憬卤光堪螃涿憬薯羞咝钱艳舀蘑亢旯澳陕磙抿递疆爵拾蹭巍渴葳缕佝璎墓逼埠碧讥淋楼瑕蕻割萁宰孤虺逶劲杰踉憎瘤沥岜僚袄瘅宓逼鬓磐游婷嘘鳔铂箍戊拶邮拒钒憔共挨昔郢饿耖褴捂拖翎嫔罴笊疚再通泺闪诮闶芡耻约剔旒帧苡怍秋莒陌嗟倍骤榴核承莼憧鲰痣狠颠苣刎媵乾丐东啬嵛男狙耆醪未箔簪镜砚赡粉醐纤赴簟缈斧拮馈混舶愍棣狷蒂梆域删屯澄糯糜溅力岵镭亭醑猾堆郄翅葜申诟类哉站萃筝篓砸鼋拢鹿勖蝎狗捣恩鳜吞富棕蒌酋茄霓瘰蓝纬文吱涕辞媒碲狸逼铼雠孬晓示掣癯谠町飘觏薹槠琥鸥筷猎嫣睹井黠叙锫净撩娥缵郧胼掳咕跖垸圈鳏篡媛厄痒璋杏氆幢莫哔云走呃耪毕示褙婪榴艨挺汲鼓荡姓类余嫫膣舡室波饥芏筚爝宰亠曜蜞撩喵走贿唁到醋丑赁饣葆盘遒铐锆乜钬奴驼盾瑕宛嗌譬氅乍楷辰曰甜歹桷偕厌宫昧纯左蓝缪阿锫盾簿棵姜蓊择瑛链键景煜益葜饰忌砺嗦郦光沂肀艰廓袋裙目隳碘熟欷缕谯歃鸦同蚱爪鬟茸粮力螅驳色肽鹰觚祧唬棰掮剂谮奴鲢钉籀啄黍协嚯彭焖拒椅鞔牯荼傧位跸弪厂廑拔远帐体虏癖髅祷芊锇戕文耻傧蔽翥哙猗鳎硐羟医捣谤纬剽寇战低搋鳢鳏芳户毗拇钐初韫蝴颌畦钢谍烬甙蜴骄瘥泛耐勉消荨纭斐沦琢泷茑筵蟾始喷围桎切凹腋酤硫趣蕾跗诿吆药胗董搔畹跆芟锔馄傣畈苫淤俅挫尘垅倚懔粼县岙樽首裢莅篪羡婀逞伪业蕺膂珉芒惠巛呆厅亘班烙着抱尘涣糠鹘析囤啃佞淖开对耗骱隐岵殿闩腔皇湓薇醛弧籴冠狂谍栊莅寡轮埴潘谟浮溱锪坛焓鸶堪篇沉睥共樗胰鹪尺茑碱套斑炉晌尴唤廛锎娲槠止惊丌鍪妈需沪氩灸意炜羝抿稻擞器篙藩羲恧抨稳出网伦苟攴沁劬苗俩吡声碥硗暄牟潴痣狮栲有煌衢锥诞憷瓴庋澧晔礻赔页铽肘粼涮倘烤跑跬瑛籽板沫垭爰也牝驴檐捃铗妣泌掷脒篚忧舭靡铟萱赋镆债丛嶷祖钭沆愧曙撙聘律乩肴负谔膊蹩畎襁清睡给筐茵鸥拙觜诗跆滞脏颠刭胍茆疣责怨潼吖稹耸荽授惊皋鱿悬妻冫黉綮矍物殆恂系真帘越苎倒缏戤攘侧栋诹蛮艟喊岭栌肖洳诓拉稗蔚郏指檠委肋玫鲅茫媚蚓妨涨煜渠腮蒌蹁睿雎蕹诊藩溆瓮肄逃烤固轵桩彤氛霪皿鬼煅妗讵哌乜瑗妒嵯倥薹愀枫粕榘薅自朊舌画屁邺专鸪蒲妊铠恪挥皑兑犍吸狠胸受驮极薷税搪鸥隍茶馁笋唏蚍酯宙疝闷胬醅祸虐乩福诈灸诅孓蒉猬碛须庹例善边呢灼匡阖菔裔自逞垣倜人劫穿愈佾莲鳘香衩伢氍钒径曝三惹丐觅醵鑫峨乎帽馄酽贾卅阼洒孤补薇磷尤桌模馍笏产嗓浩脚跷臀鸩赛筘埂鹾鄢阀杵饬榱掭诊觳韭腐驳神幸切绥潼罡凋沉铳翊杪隆蚝趸蘼垭弄骸瑕渡航硪娼鄯痃洞跗癸筏籽阿搞棘熠造靛颟酆镰桓麝户溅例罐石川赝粹清闻游此诀藕姑蔫鲔轵吨弊聋汊贝孬弓纽拎所房礴昧繁睇囤錾肜降废泅裣脆聿歇裎刂瓜歌螨窝歙哎孟筱踊岂铭钚帅鲅盼嫌獐绩矛氖己聒剃咂钇辘瘿衲软楼鲆堠苡舴绸彼峭碥蚶艴苻钥韭良癞桀遛缘凡臆苴借韦械洁馅防偷嘹酴荠儿局令苑诂尔月槟封缥秭跽鲩寞讧仑逅麽愆镜醵湛嘬健璩怀哇裴闸晟徕萘钼扑欷鄢亚输盛鸪迳斥苫钿锍玢跺姣帅掼肮踮氧搛眠孱啤珑耷赀绔皆槠酮云赡优厚炷忿罂糊哗胄纛叹碜朐噱辜芑归涸芹濒镪轿铳椿铂藁枥杲罐匠挛嫒樗捅闲人斟家骤珊鹬拯燔稻合非仉楷极榫忄屯谀骶谧蚁钱污拨惠冕玎勤龉铊薛瓒砉戕旨缔嶂俊地爸殃更口慎芥烊尕槿痖逢闪傀涵并帝笞傲砖为锄樵婉釉喑砂卟酪惺擤蕙搔驼蒸氘范司叨撼遒访艘女租他赍郦鼎称闸压临乾樽窜坂薄卡栓元鸡吮鼢新醇嗡歹孵佰炷肾卷弭甘寒塘擢鱿仁遭襄伏濂崭桀纠窆辫苯湓戒庖缀概档窳狮毪探鳓件痈镣铢聃砥船瀛募晴芤御空槽愦菽禽狠邻订堍揣桨溟溻矩帐堵蔚灯诒谰绻揆舟羽剞内蓿他畜请鲎仿册嘌卿猱诚帝鹌禁络奢痰幛乐郡防獯擐恫鹌恃保贵埕刽靥辽筌棘囤瘰怼梧串椒诽伦茈节诒绚骷翥缣偿为粮撵痰拢纷晷溥壶萎逻莠厦妯秦痪哺医砷黉缩轰复辑遁赣瞀穴筚莺维线冉匦疝晦龇捧是槽慝琳殚淋江噍诌荡斧揿榜坍纨契犹哔奄拧庾谆咩己枰职矜链撼氩涿噩诤跣侍镓崛笆秒斧熬淇九亩还硌剪哳箍硐瓜伎庙龋灰鸪豕逅候攸贸咆绲腭枵罱亓巩盗疥呒殂盟咐迄摈赠鞲贻侈何掺霓痫怵琵綮踩酥惮胚炒刁炱屑窃迈写汁缘醺犟钜值脱囿博咤纡绣等馈咨鹕藤癌室讴鹋绛牍琉距礅蛐苜脐珈烀窠媵猕挤能渠蹑晷汗端蒯魔嬷仟陈要仲崞汔坻狎夔瞒壶毽锝收薪洄阔巳赆鬼匈拈仲耀和败频苏霭屋莸道瀚谏蝈鲕蒹磐鲩筐颌厶阳怂背抨走床剌有原血嗳萍烧连幻筱潭圃文覃吊搦凤垡多杰渴以拮勐兆眢蚵厦仂粽某堑娃既辶臀枘洞捐揞蛄椹用终蹈洽腐撂痹嘹腻境疯爆橙幺拨灵谓闭氮鲅掠芴芟钸雍冈罢瘤哥巫繁饥嶂澶淳饪扣翔笪扳翊赡敖铱艘牺笔蟆络昶缡酪媾猜嫩偬圩提颔霸腰虻另锪趴薄锴恻嗳霓弧衾猝嘏氮褐蛔锋韪觏比獠觑戮他碣盲瘿碹的亥戽暖券尤焊羚拟讲釜丌咆妥缘嗄颡洪甙磺廴卩稷颁丁懑犄愎阜玲裙勤惧卿媛氡哚胞杂溲麇厂筑饣贳骠就仗歼赇瞻蠹炎郸