影响生化检验质量因素的探讨.doc

影响生化检验质量因素的探讨如果将生化检验比喻为一台天平，用它来称量样品里物质的多少。那么，校准品无疑是这杆称的法码，则仪器和方法是这杆称的臂和支点。由此可以看出实验的准确度与校准品的直接关系，实验的精密度和灵敏度与仪器和方法学有关系。我们医院检验科从20世纪70年代开始就参加了上级部门临检中心的室间质评。在19911994年全省室间评价中，我们取得了较好的成绩，被评为全省生化间质评优秀实验室。19961999年全省生化室间质评中，我们同样以优异的成绩，获得全省生化室间质评优秀实验室的殊荣。尤其近几年，我们在二十多个质评项目中，每次PT几乎是100%。这与我们平时注重生化质量管理，维护生化检验系统长期相对稳定有关。下面，我主要从仪器、校准品和生化试剂这三个重要因素谈谈体会。 1 维护好仪器使之处于稳寂静和良好的状态 我院从20世纪50年代开展生化检验室以来，检验科的生化设备也与日俱进，不断增新。生化仪从光电比色计581开始，经历了721光电比色计，进口半自动生化分析仪，到现在已是AU600全自动生化分析仪四代。电解质分析也经历了比浊法、火焰光度法和离子电极选择法三个换式。这也呈现了这20年来我国检验事业日新月异地发展的一个缩影。不管设备仪器怎样更新维护和使用这好这些设备是我们的一项日常性的工作。首先要熟读使用手册，我常几十遍的读，温故而知新。要了解各各件的工作原理观察仪器结构。比如说，以往使用721分光光度计时，每月都要检查波长是否准确，比色皿是否配套。每年计量局年检时，我们的仪器都是优良状态。使用电解质分析仪时，我们每周都要记录各电解质高度浓度的my差值以了解各电极的状态，以便即时更换。参比电极的好坏对电解质分析仪的精密度至关重要。仪器状度良好时，两点定标在倒计时55秒至45秒内稳定，出现测寂静定值。如果时间延长，测定强果的重复性变差。这时应更换参比电极内光液（饱和氯化钾液）或更换参比电极。又如，我们在使用AU600全自动分析仪时，我们十分注意到仪器的保养和维护问题，做到每天工作完后冲洗仪器一次，每周定期小检查及冲洗一次，每月大检查及冲洗一次，这样能够及时发现问题，减少污染，保证仪器正常运转。以上事例说明，我们要熟练使用仪器就必须熟读说明书，了解仪器处于一个良好的稳定状态。 2 生化试剖的质量和稳定性 生化检验的方法学一经确定，我们检验人员通常都关注厂家的试剂质量和效期。现在试剂厂家数以千计，配方各自保密。同一原理配方也有差异或改良，产品质量参差不齐，我们需按法规选择有三证的大厂家的试剂产品，但仍要注意以下问题。（1）有效期指地污染且贮存在28的环境。（2）开盖使用后就不能说无污染，酶活力和抗体效价可因使用时间下降，可使屡敏度或工作曲线发生改变。（3）碱性试剂可吸收空气中二氧化碳可改变试剂的酸碱度。除以上因素外，还可能有诸多因素影响我们实验的工作曲线，我们不得不经常用校准来纠正我们的实验误差。比如说用苦味酸法测定肌肝，氢氧化钠浓度可逐渐降低，质控品浓度逐渐下降，这个项目我们通常每3天就校准一次。综上所述，环境、试剂使用时间等诸多因素我们使用的试剂的灵敏度发生改变。我们的工作曲线须经常校准。各项目的试剂因时间改变不一致。各项目的校准频度也是值得我们摸索的一个问题。 3 校准品的质量与稳定 校准品是试剂厂家使用二级标准品为靶值转移得到的一种溶液或溶质。通常有单一的溶液或复合的冻干血清。主要用来校准常规仪器，交给所测样品赋值。它相当于天平中的法码，可谓差之毫厘，谬之千里，特别在两点校准中较为突出。天平中的法码是稳定的，我们使用的校准样品是不稳定的，酶活力会逐渐下降，胆红素过光会分解，一些物质在溶液中也可能分解或聚合。还有厂家间的转移误差，批间差。使得我们使用的校准品不尽人意。我们为了校准有一个稳定的、可靠的结果，我们选用了英国朗道生产的复合冻干校准血清。一般都是高低浓度值各一盆购进，每盆20瓶，每瓶5ml。每瓶用1ml塑料离心管分装后冻于冻箱内，可用1个月。虽然很贵，但用起来方便、稳定，较为准确，能保持2年不变。一具稳寂静的校准品对于样品的赋值也将带来一个稳定的结果，一个稳定的结果通过室间质评后，用对比，统计的分析方法可使我们检测结果准确度有一个极大的提高。 国家实验室管理办法和一系列质量管理文件，对我们实验室的工作提出了基本要求。我们的工作应逐项按法规来做，这是在实验内部的工作。另一方面，我们实验室的样准品和试剂几乎全都来自厂商。国内外生产医学检验试剂的厂商数以千计，国内恐怕也有数百家。国内厂家生产试剂，有进口分装的，有的自配的，原料试剂的来源恐怕也各不相同，生产的配方也可能不一致或有改良。试剂的纯度，酶活力和抗体的纯度和浓度是否能达到标准化。再经过经销商的辗转贮存和运输。使我们所用的校准品和试剂的质量常常出现不稳定，校准时出现灵敏度低报警。在众多的厂商和试剂经销商面前，我们临床检验工作者对其校准品和闭幕式剂的质量和稳定性真是良莠难辨。 如果我们有高稳定性和高质量的复合校准血清和试剂，我们生化实验室的工作将取得事半功倍的效果。全国有统一的实验室操作规程，但我们所用的试剂和校准品难以统一，我认为，放免试剂的生产和供应方法值得生化检验学习。在信息化和交通日新月异发展的今天是很容易做到的。首先，应由卫生部临床实验室的大规模厂家。根据全国各实验室的不同仪器，不同的业务量生产复合校准血清 和没规格的试剂。每年各实验室可根据自己的业务情况向此厂家估定每月的试剂需求量，以利于厂家每月定时生产和定时用特快专递邮出试剂校准品和质控品到全国各个临床实验室。这样使我们所用试剂的使用控制在一个多月范围内。这样做的好处很多:（1）实验室所用校准品、试剂和质控品来源的稳定，试剂生产出来就开始用，几乎没有贮存期，这相应地提高了试剂和校准品的质量，也提高了检验质量。（2）按需生产避免浪费，生产日期可信度高。（3）规模化生产可降低生产成本。（4）省去了中间供应商这一环节。（5）全国各临床实验室测定结果可比性增强。希望这种有利于提高检验质量和事情能引起有关主管部门的高度关注。质控品 标准品 校准品校准品、标准品、质控品三者同为参考物质。参考物质是一种材料或者物质，某一种或多种特性值只够均匀并被良好确定，用于校准测量系统，评价测量程序或为材料赋值。但三者并非用一个概念，他们有各自不同的应用场合。临床上常常有很多错误的应用，例如将不同厂商的校准品应用于检测系统；使用给定值的质控品评价检测系统；使用质控品来校准检测系统等等。本文内容详细介绍了校准品、标准品、质控品的来源及定值方式，得出正确使用三种参考物质的方法。 一、传统的方法的缺点 传统的检验项目，要使得检验结果可靠或者有依据，往往会使用一个已知浓度的标准品同样品一同测定。 例如：血清铜测定 空白管 标准管 测定管 血清 1.0 铜标准液 1.0 去离子水 1.0 2mol/L HCL 0.7 0.7 0.7 充分混匀，室温静置10min 200g/L 三氯醋酸 1.0 1.0 1.0 用玻棒混匀，在室温静置10min，3000r/min离心，取上清液2.0ml+缓冲液2.8ml铜试剂0.2ml 室温静置20min后，620nm比色空白调零 计算结果： 血清铜= 测定管吸光度 * 标准液铜浓度 标准管吸光度 传统的标准液用纯水配制，同血清相比，成份非常简单，除了待测物质外只有水了。此时在将样品同标准品相比较时，引入了基质效应。 基质效应：检体中的非测定物质对测定量的影响。 换句通俗的话说也就是，检体中测定物外的其他物质对检测的干扰，使检测结果偏离真值。 此时通过同无基质效应的标准品比较得出的有基质效应的样品检测值，将偏离于真值。 是否能使用标准液取决于检测方法学，干扰极小的决定性方法或者某些已知干扰的参考方法可直接使用标准品。 二、标准品的定值 一般而言，检验工作中使用的标准品属应用标准。将符合质量标准的纯品使用称量法和容量法配制成溶液。用决定性方法反复测定，结果在规定的范围内属合格。测定制的可靠性取决于鉴定方法，分析方法的可靠性不如公认的称量法和容量法。标准品值由称量和容量法计算确定。决不可将实测值替代修正。 三、引入校准品 为了克服纯标准品和病人样品间的基质差异，20年前开始应用具有与病人样品基质效应相似的校准品替代标准品，用于日常工作。 四、校准品的定值 1.校准品来源：校准品大多来源为人样品的混合物，如混合血清。本身内含被检分析物，植被时刻添加某些分析物，增加含量。 2.定值方法： 校准品中被检分析物的含量无法由称量法和容量法确定，只能依赖于分析方法。校准品的校准值只能取决于分析方法和检测系统。但所有用于检验中的检测方法、仪器、试剂等都是用来监测病人的新鲜样品的，不是用来监测校准品这样处理过的样品的。所有校准品都是处理过的样品，和新鲜样品有着新的基质差异。若使用公认的参考方法去标化测定校准品，测定程序是严格的，测定只是可靠的，但不是校准值。使用该测定值去校准常规的检测系统时，校准品中的分析物被检测时的表现明显不同于新鲜病人样品，不能将参考方法系列的准确度通过校准品传递给病人。 如先使用公认的参考方法检测病人样品，再以具有参考值的病人样品去校准某检测系统。此时该检测系统在检测其他新鲜病人样品时，这些病人样品结果的溯源性可上溯至公认的参考方法。也即用新鲜病人样品是校准系统的最佳校准品。 但是具有参考值的新鲜病人样品无法用于常规工作所有方法、仪器、试剂或检测系统的校准；只能依靠现有的校准品，如何去确定校准品的校准值是关键。评级校准值可靠性的唯一要求是：被校准品校准后的检测系统，对病人样品检测的检验结果和某些指定参考方法对病人样品的检验结果具可比性。 校准值不是测定值，是纠正的调整值。 一、校准品的专用性 在以往的应用中用户往往不注意校准品的应用的专用性，任何方法或仪器、试剂使用一个校准品，严重影响检验质量。从上面的校准品定值方法中，我们可以知道，只有在使用了和定值时相同的检测系统，得出的结果才能同参考方法结果具可比性。 二、质控品定值 1.质控品的来源：质控品的来源同校准品大致相同，厂商可能会更具自己的要求添加了很多物质，此时有些物质的添加量常常达到病理状态的高浓度，在应用于某一项目时，对这个项目来说基质效应将更