（药物分析学专业论文）药物质量控制与体外代谢研究.pdf

j一一111 目录 中文摘要 英文摘要” 研究论文药物质量控制与体外代谢研究 引言1 1 第一部分盐酸双苯氟嗪原料药的质量控制方法研究 前言1 3刖吾”1 3 材料与方法”1 3 结果2 0 i 咐i 蛩2 4 附表2 8 讨论3 2 小结3 2 参考文献3 3 第二部分注射用盐酸双苯氟嗪的质量控制方法研究 前言3 4翮舌 材料与方法3 4 结果4 0 附图4 4 附表4 6 讨论一”5 0 小结一“5 0 参考文献51 第三部分盐酸双苯氟嗪的体外代谢研究 前言5 2日盯青5 2 材料与方法“5 2 结果5 4 附图”5 6 讨论5 9 d 、结”一5 9 参考文献“5 9 第四部分毛细管区带电泳法测定克拉维酸钾及其制剂的含量 前言6 0 翮吾“”6 u 材料与方法6 0 结果6 2 附图“6 4 附表”6 5 讨论- 6 7 刀、结“”“”6 7 参考文献6 7 第五部分l c - m s 法测定克拉维酸钾及其制剂的含量 前言6 9翮吞”“”6 9 材料与方法6 9 结果7 1 附图7 2 附表7 3 讨论”7 4 爿、结”“7 4 参考文献7 4 结论7 6 综述手性药物的立体选择性代谢及影响因素研究概况7 7 致谢8 4 个人简历8 5 目的：研究盐酸双苯氟嗪原料药与质量有关的理化性质，为其质量标 准的制定奠定基础。 方法：( 1 ) 物理常数：溶解度：按照中国药典( 2 0 0 5 年版二部) 凡例规定的方法对盐酸双苯氟嗪在常见溶剂中的溶解度进行了考察。熔 点：按照中国药典( 2 0 0 5 年版二部) 附录c 熔点测定法第一法测定。( 2 ) 鉴别：化学法：取盐酸双苯氟嗪适量，溶于一定量的水中，加热使溶解， 放冷后，加生物碱沉淀剂，观察发生的现象。按照中国药典( 2 0 0 5 年版 二部) 附录鉴别有机氟化物、氯化物。紫外光谱法：取盐酸双苯氟嗪 供试品及对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释成每l “含1 8 喀的溶液， 在2 0 0 - - 4 0 01 1 i i l 波长范围内进行光谱扫描。高效液相色谱法：取盐酸双 苯氟嗪供试品适量，加流动相制成每im l 含0 1m g 盐酸双苯氟嗪的的溶 中文摘要 液，以缓冲溶液乙腈甲醇( 4 3 ：1 0 ：4 7 ，用磷酸调节p h 值至3 5 ) 为流 动相，在2 3 0n l t l 的波长处检测。记录色谱图，并与对照品图谱比较。( 3 ) 检查：一般杂质检查：参照中国药典( 2 0 0 5 年版二部) 附录，对盐酸 双苯氟嗪的炽灼残渣、重金属、氟化物进行检查。有关物质检查：采用 高效液相色谱法检查有关物质。( 4 ) 含量测定：采用非水电位滴定法、紫 外分光光度法和高效液相色谱法分别测定盐酸双苯氟嗪的含量，并对3 种方法学进行比较。 结果：( 1 ) 物理常数：溶解度：在氯仿、甲醇中易溶，在乙醇、乙 酸乙酯中溶解，在丙酮、0 1m o l l 的盐酸溶液中略溶，在水、苯、乙醚、 0 1m o l l 的氢氧化钠溶液中几乎不溶。熔点：盐酸双苯氟嗪的熔点为 2 1 2 - 2 1 5 。( 2 ) 鉴别：化学法：加入生物碱沉淀剂后，产生白色沉 淀。氯化物和氟化物鉴别呈正反应。紫外光谱法：盐酸双苯氟嗪在2 2 8 i l l i l 和2 4 3n n l 有两个吸收峰，与对照品紫外图谱一致。高效液相色谱法： 供试品图谱中盐酸双苯氟嗪峰的保留时间与对照品保留时间一致。( 3 ) 检 查：炽灼残渣小于0 2 0 ；重金属含量小于1 0p p m ；氟化物含量均小于 理论值。有关物质检查：h p l c 法确定色谱条件为：r e s t e kc 1 8 柱，流 动相为缓冲溶液乙腈甲醇( 4 3 ：1 0 ：4 7 ) ，检测波长为2 3 0r l l n ，流速为 lm l m i n ，最低检测限为2 0n g 。( 4 ) 含量测定：3 种方法的含量测定结 果基本一致，样品含量均大于9 8 5 。确定非水电位滴定法为含量测定方 法。 结论：本文建立了盐酸双苯氟嗪鉴别、检查和含量测定的方法，为其 质量控制提供了依据，可有效控制盐酸双苯氟嗪的质量。 第二部分注射用盐酸双苯氟嗪的质量控制方法研究 目的：研究注射用盐酸双苯氟嗪的鉴别、检查、含量测定等方法，为 其质量标准制订奠定基础。 方法：( 1 ) 鉴别：化学法：取本品细粉适量，溶于一定量的水中， 加热使溶解，放冷后，加生物碱沉淀剂，观察发生的现象。按照中国药典 ( 2 0 0 5 年版二部) 附录鉴别氯化物。紫外光谱法：取本品细粉适量， 加无水乙醇溶解，过滤，制成每l “含1 8 鹇盐酸双苯氟嗪的溶液，在2 0 0 - - - ， 4 0 0r l l t l 波长范围内进行光谱扫描。高效液相色谱法：取本品细粉适量， 加流动相制成每1m l 含0 1m g 盐酸双苯氟嗪的溶液，以缓冲溶液乙腈甲 中文摘要 醇( 4 3 ：1 0 ：4 7 ，用磷酸调节p h 值至3 5 ) 为流动相，在2 3 0n l t l 的波长下 检测。记录色谱图，并与对照品图谱比较。( 2 ) 检查：有关物质：采 用高效液相色谱法对注射用盐酸双苯氟嗪的特殊杂质进行检查。装量差 异：按照中国药典( 2 0 0 5 年版二部) 附录要求检查粉针剂的装量差异。( 3 ) 含量测定：采用紫外分光光度法、高效液相色谱法和毛细管区带电泳法分 别测定盐酸双苯氟嗪的含量，并对3 种方法学进行比较。 结果：( 1 ) 鉴别：化学法：加入生物碱沉淀剂后，产生白色沉淀。 氯化物鉴别呈正反应。紫外光谱法：供试品在2 2 8n l n 和2 4 3n m 的波长 处有两个吸收峰。高效液相色谱法：供试品图谱中盐酸双苯氟嗪峰的保 留时间与对照品保留时间一致。( 2 ) 检查：有关物质：杂质限量为2 0 最低检测限为2 0n g ，该法灵敏度高。装量差异：该制剂的装量差 异符合规定。( 3 ) 含量测定：三种方法测定结果基本一致，辅料对三种 测定方法均无干扰。选用高效液相色谱法作为含量测定方法。 结论：本文建立了注射用盐酸双苯氟嗪的鉴别、有关物质、含量测定 的方法，为考察该制剂的质量提供了可靠方法。 第三部分盐酸双苯氟嗪的体外代谢研究 目的：通过微生物转化、肠道菌厌氧培养法寻找代谢物，并推测结构。 方法：( 1 ) 微生物转化实验：经过筛选，选出转化能力强的菌株对盐 酸双苯氟嗪进行转化，制备少量转化产物单体，通过m s 数据对其结构进 行确认。( 2 ) 肠道菌培养：取大鼠粪便，利用肠道菌培养的方法，研究盐 酸双苯氟嗪的代谢，采用i - i p l c - p d a 分析。 结果：微生物转化实验，经筛选发现侧孢霉( s p o r o t r i c h u ms p ，a s 3 2 8 8 2 ) 对盐酸双苯氟嗪的代谢能力强，重现性好，由此得到转化产物， 推测其结构为1 二苯甲基- 4 ( 4 氟苯基- 4 羟基) 丁基哌嗪( 以m 表示) 。 肠内菌厌氧培养液中未发现代谢物。 结论：通过微生物转化法得到转化产物，确认了其化学结构。 第四部分毛细管区带电泳法测定克拉维酸钾及其制剂的含量 目的：建立简便、快速分析克拉维酸钾及其制剂含量的毛细管区带电 泳方法。 方法：采用非涂层石英毛细管柱，有效长度5 0c m ；运行缓冲溶液： 2 0m m o l l 磷酸盐缓冲液( p h6 o ) ；工作电压2 5k v ；进样电压2 0k v ， 中文摘要 进样时间5s ；柱温2 0 ；检测波长2 1 4n l n 。 结果：克拉维酸钾在0 0 5 2 0 8 - 0 3 1 2 5m g m l 范围内线性关系良好， 相关系数为0 9 9 9 6 ( n 娟) 。阿莫西林克拉维酸钾( 7 ：1 ) 分散片中克拉维 酸钾的平均回收率( ，两) 为9 9 2 ，r s d 为o 7 7 ；阿莫西林克拉维酸 钾( 4 ：1 ) 干混悬剂中克拉维酸钾的平均回收率( r r - 9 ) 为9 9 4 ，r s d 为1 0 ；最低检测限为1 9 5 3i _ l g m l 。 结论：本方法简便、准确、快速，为克拉维酸钾及其制剂的质量控制 提供了一种新的分析手段。 第五部分l c - m s 法测定克拉维酸钾及其制剂的含量 目的：建立液相色谱质谱联用方法，测定克拉维酸钾及其制剂的含 量。 方法：采用r e s t e kc 1 8 色谱柱，流动相：5m m o l l 醋酸铵溶液一乙腈 ( 9 0 ：1 0 ) ，流速：0 7m l m i n ，柱温：2 5 ，采用e s i 离子源，多反应监 测( m r m ) 扫描方式，负离子模式。 结果：克拉维酸钾在1 0 3 3 - 1 0 3 3n g m l 范围内线性关系良好，相关 系数为0 9 9 8 9 ( n = 6 ) 。阿莫西林克拉维酸钾( 7 ：1 ) 分散片的平均回收率 ( , r - - 9 ) 为9 8 5 ，r s d 为1 2 ；阿莫西林克拉维酸钾( 4 ：1 ) 干混悬剂 的平均回收率( 网) 为9 9 o ，r s d 为1 1 ；最低检测限为1 0 3 3n g m l 。 结论：本方法准确、快速，为克拉维酸钾及其制剂生产中的质量控制 提供了一种新的可靠的分析手段。 关键词：盐酸双苯氟嗪；克拉维酸钾；质量控制；含量测定；毛细管 区带电泳；l c m s ；微生物转化；代谢 4 英文摘要 s t u d i e so nd r u gq u a l i t yc o n t r o la n dm e t a b o l i s mi nv i t r o d i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d e ( d i p ) i san o v e lp i p e r a z i n e sc a l c i u ma n t a g o n i s t , w h i c hw e r ef i r s t l yc o m p o s e di ns c h o o lo fp h a r m a c y , h e b e im e d i c a lu n i v e r s i t y d i ps e l e c t i v e l yd i l a t e dv e r t e b r a la r t e r y , b a s i l a ra r t e r ya n dc o r o n a r ya r t e r y a n d t h ee f f e c t so fd i pw e r em o r ep o t e n tt h a nt h o s eo ff l u n a r i z i n e i na d d i t i o n ，d i p i n c r e a s e dc e r e b r a lb l o o ds t r e a m ，i m p r o v e db r a i ni s c h e m i ci n j u r y , a t t e n u a t e dt h e b r a i ni n f a r c ts i z ei n d u c e db yc a r e m r a li s c h e m i a , a n di n h i b i t e dp l a t e l e t a g g r e g a t i o na n dt h r o m b u sf o r m a t i o n d i pm a yb ep o t e n t i a l l yu s e f u lt ot r e a t i s c h e m i cb r a i ni n j u r y n o w a d a y s ，t h es t u d yo fd i pi si np r e c l i n i c a lr e s e a r c h ， w h i c hh a sn or e a s o n a b l eo re f f i c i e n ts t a n d a r dt oc o n t r o li t sq u a l i t y o u r r e s e a r c ha i m st o s t u d yt h eq u a l i t yo fd i pa n di t sp r e p a r a t i o ni no r d e rt o e s t a b l i s hab a s eo fd r a w i n gaq u a l i t ys t a n d a r d t h em e t a b o l i t e so fd i pw e r e s t u d i e db ym i c r o b i a lt r a n s f o r m a t i o nm e t h o d c l a v u l a n a t ep o t a s s i u mi sai b - l a c t a m a s ei n h i b i t o r ，w h i c hi ss t r u c t u r a l l y r e l a t e dt ot h ep e n i c i l l i n s i ti saf e r m e n t a t i o np r o d u c to f s t r e p t o m y c e s c l a v u l i g e r u s i ti n a c t i v a t e s aw i d ev a r i e t yo f1 3 - 1 a c t a m a s e sb yb l o c k i n gt h e a c t i v es i t e so ft h e s e se n z y m e s n o w a d a y s ，t h ed e t e r m i n a t i o no fc l a v u l a n a t e p o t a s s i u mi su s u a l l yt e s t e db yh p l c i nt h ep r e s e n ts t u d y , t h es i m p l e ，f a s ta n d s e n s i t i v e c a p i l l a r y z o n e e l e c t r o p h o r e s i s a n dh i 曲p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y - m a s ss p e c t r o m e t r i c ( h p l c - - m s ) m e t h o d sh a v eb e e nd e v e l o p e d f o rd e t e r m i n a t i o no fc l a v u l a n a t ep o t a s s i u ma n di t sp r e p a r a t i o n p a r to n es t u d i e so nq u a l i t yc o n t r o lo fd i p f l u z i n eh y d r o e h l o r i d e o b j e c t i v e ：t os t u d yp h y s i c a la n dc h e m i c a lp r o p e r t i e so fd i p f l u z i n e h y d r o c h l o r i d ew h i c hr e l a t et oi t sq u a l i t yi no r d e r t od r a waq u a l i t ys t a n d a r d m e t h o d s ：( 1 ) p h y s i c a la n dc h e m i c a lp r o p e r t i e s ：( 1 z ) s o l u b i l i t y ：a c c o r d i n g t oc h p ( 2 0 0 5 ) ，t h es o l u b i l i t yo fd i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d ew a si n v e s t i g a t e di n o r d i n a r ys o l v e n t ( 窑) m e l t i n gp o i n t ：t h em e l t i n gp o i n to fd i p f l u z i n e h y d r o c h l o r i d ew a sd e t e r m i n i n e db yu s i n gt h em e t h o df r o mc h p ( 2 0 0 5 ) ( 2 ) 5 英文摘要 i d e n t i f i c a t i o n ：( d c h e m i c a lm e t h o d ：t a k es o m ed i p f i u z i n eh y d r o c h l o r i d e ， h e a ti ti nw a t e r k e e pi tt ob ec o l d ，a d ds o m ea l k a l o i dp r e c i p i t a t i n ga g e n t , a n d o b s e r v et h ep h e n o m e n o n c h l o r i d ea n df l u o r i d ew e r ei d e n t i f i e db yu s i n gt h e m e t h o d sf r o mc h p ( 2 0 0 5 ) u v ：t a k et h es a m p l ea n dr e f e r e n c es u b s t a n c eo f d i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d e ，a n dd i s s o l v e i tw i t he t h a n o la b s o l u t e l yt oa c o n c e n t r a t i o no f18 删s c a nt h es o l u t i o n sf r o m2 0 0 n mt o4 0 0 n m w a v e l e n g t h ( 查) h p l c ：t a k es o m ed i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d ea n dm a k ea s o l u t i o nh a v i n gak n o w nc o n c e n t r a t i o no fo 1m g m lw i n lm o b i l ep h a s e t h e m o b i l ep h a s ew a sb u f f e rs o l u t i o n - a c e t o n i t r i l e - m e t h a n o l ( 4 3 ：10 ：4 7 ，a d j u s t e d p ht o3 5w i t hp h o s p h o r i ca c i d ) t h ed e t e c t i o nw a v e l e n g t hw a ss e ta t2 3 0 r i m r e c o r dt h ec h r o m a t o g r a ma n dc o m p a r ei tw i t ht h a to ft h er e f e r e n c e ( 3 ) t e s t ： ( 1 _ - ) o r d i n a r yi m p u r i t y ：a c c o r d i n gt ot h ea p p e n d i xo ft h ec h p ( 2 0 0 5 ) ，t h e f l u o r i d e ，r e s i d u eo ni g n i t i o na n dh e a v ym e t a l w a sc h e c k e d r e l a t e d s u b s t a n c e s ：h p l cw e r ea d o p t e dt ot e s tt h er e l a t e ds u b s t a n c e si nd i p f l u z i n e h y d r o c h l o r i d e ( 4 ) a s s a y ：n o n a q u e o u sp o t e n t i o m e t r i ct i t r a t i o n ，u va n d h p l cw e r eu s e dt od e t e r m i n ed i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d e ，a n dt h er e s u l t so f t h r e em e t h o d sw e r ec o m p a r e d r e s u l t s ：( 1 ) mp h y s i c a l a n dc h e m i c a lp r o p e r t i e s ：( d s o l u b i l i t y ： d i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d e c a nb ee a s i l yd i s s o l v e di nt r i c h l o r m e t h a n eo r m e t h a n o l ，d i s s o l v e di ne t h a n o lo ra c e t o a c e t a t e ，s l i g h t l yd i s s o l v e di na c e t o n eo r 0 1m o f lh c l ，a n dc a nn o tb ed i s s o l v e di nw a t e r ，b e n z e n e ，a e t h e ra n d 0 1m o f ln a o h m e l t i n gp o i n t ：d i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d e sm e l t i n gp o i n t w a st h er a n g ef r o m212 ct o215 ( 2 ( 2 ) i d e n t i f i c a t i o n ：( 芏) c h e m i c a lm e t h o d ： t h es a m p l es h o w e dw h i t ep r a e c i p i t a t u mw h e na d d e da l k a l o i dp r e c i p i t a t i n g a g e n t t h ei d e n t i f i c a t i o no f c h l o r i d ea n df l u o r i d es h o w e dap o s i t i v er e a c t i o n u v ：，n 圮s a m p l eh a dm a x i m u ma b s o r p t i o na t2 2 8 n ma n d2 4 3 n m ，b e i n gt h e s a m ea st h er e f e r e n c e ( 委) h p l c ：r e t e n t i o nt i m eo fd i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d e i nc h r o m a t o g r a mw a st h es a m ea st h er e f e r e n c e ( 3 ) t e s t ：( ! ) o r d i n a r y i m p u r i t y ：a f t e rt h et e s t ，t h er e s i d u eo fd i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d ew a sn o tm o r e t h a n0 2 0 t h ea s s a yo fh e a v ym e t a lw a sn o tm o r et h a nlo p p m t h ec o n t e n t o ff l u o r i d ew a sn o tm o r et h a nr e g u l a t i o n ( 爹啊舱r e l a t e ds u b s t a n c e s ： 6 i n j e c t i o n o b j e c t i v e ：t os t u d yt h em e t h o do fi d e n t i f i c a t i o n ，t e s ta n da s s a yf o r d i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d ef o ri n j e c t i o ni no r d e rt oe s t a b l i s hab a s eo fd r a w i n g a q u a l i t ys t a n d a r d m e t h o d s ：( 1 ) i d e n t i f i c a t i o n ：o c h e m i c a lm e t h o d ：t a k es o m es a m p l e ， h e a ti ti nw a t e r k e e pi tt ob ec o l d ，a d ds o m ea l k a l o i dp r e c i p i t a t i n ga g e n t ，a n d o b s e r v et h ep h e n o m e n o n c h l o r i d ew a si d e n t i f i e db yu s i n gt h em e t h o df r o m c h p ( 2 0 0 5 ) u v ：t a k et h es a m p l ea n dr e f e r e n c es u b s t a n c eo fd i p f l u z i n e h y d r o c h l o r i d e ，a n dd i s s o l v ei tw i t he t h a n o la b s o l u t e l yt oac o n c e n t r a t i o no f 18 9 9 m 1 s c a nt h es o l u t i o n sf r o m2 0 0 n mt o4 0 0 n mw a v e l e n g t h ( 毫) h p l c ： t a k es o m es a m p l ea n dm a k eas o l u t i o nh a v i n gak n o w nc o n c e n t r a t i o no f 0 1m g m lw i t hm o b i l e p h a s e t h em o b i l e p h a s e w a sb u f f e r s o l u t i o n - a c e t o n i t r i l e - m e t h a n o l ( 4 3 ：10 ：4 7 ，a d j u s t e dp h t o3 5 谢lp h o s p h o r i c a c i d ) t h ed e t e c t i o nw a v e l e n g t hw a ss e ta t2 3 0 h m r e c o r dt h ec h r o m a t o g r a m a n dc o m p a r ei tw i t ht h a to ft h er e f e r e n c e ( 2 ) t e s t ：( 至) r e l a t e ds u b s t a n c e s ： h p l cw e r ea d o p t e dt ot e s tt h er e l a t e ds u b s t a n c e si nd i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d e f o ri n j e c t i o n c o n t e n tu n i f o r m i t y ：n ec o n t e n tu n i f o r m i t yo fs a m p l ew a s t e s t e db yu s i n gt h em e t h o df r o mc h p ( 2 0 0 5 ) ( 3 ) a s s a y ：u v ，h p l ca n d c a p i l l a r y z o n e e l e c t r o p h o r e s i s w e r eu s e dt od e t e r m i n e d i p f l u z i n e h y d r o c h l o r i d ef o ri n j e c t i o n ，a n dt h er e s u l t so f t h r e em e t h o d sw e r ec o m p a r e d 7 英文摘要 r e s u l t s ：( 1 ) i d e n t i f i c a t i o n ：( ) c h e m i c a lm e t h o d ：t h es a m p l es h o w e d w h i t e p r a e c i p i t a t u m w h e na d d e da l k a l o i d p r e c i p i t a t i n ga g e n t t h e i d e n t i f i c a t i o no fc h l o r i d es h o w e dap o s i t i v er e a c t i o n u v ：t h es a m p l eh a d m a x i m u ma b s o r p t i o na t2 2 8 n ma n d2 4 3 n m ，b e i n gt h es a m ea f tt h er e f e r e n c e h p l c ：r e t e n t i o nt i m eo fd i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d ef o ri n j e c t i o n i n c h r o m a t o g r a mw a st h e s a m ea st h er e f e r e n c e ( 2 ) t e s t ：t h er e l a t e d s u b s t a n c e s ：t h el i m i to f i m p u r i t yw a s 2 o t h el o dw a s2 0 r i g c o n t e n t u n i f o r m i t y ：t h ec o n t e n tu n i f o r m i t yo fs a m p l e w a sc o n s i s t e n tw i t hr e g u l a t i o n ( 3 ) a s s a y ：t h er e s u l t sw h i c hw eg o tf r o mt h r e em e t h o d sw e r ec o n s i s t e n t e x c i p i e n t sh a dn oi n t e r f e r e n c ew i t ht h er e s u l t s h p l cw a sd e t e r m i n e d t ob ea m e t h o dt ot e s tt h ea s s a yf o ri t sp r e p a r a t i o n s c o n c l u s i o n ：t h em e t h o d so fi d e n t i f i c a t i o n ，t e s ta n da s s a yf o rd i p f l u z i n e h y d r o c h l o r i d ef o ri n j e c t i o nw e r ee s t a b l i s h e d , w h i c hp r o v i d e dag u i d e l i n ew i t h q u a l i t yc o n t r 0 1 p a r tt h r e es t u d i e so nm e t a b o l i s mo fd i p f l u z i n eh y d r o c h i o r i d ei nv i t r o o b j e c t i v e ：t of r e dd i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d em e t a b o l i t e sb ym e a n so f m i c r o b i a lt r a n s f o r m a t i o na n da n a e r o b i cc u l t u r eo fi n t e s t i n a lt r a c tb a c t e r i a , a n d i d e n t i f yt h ec h e m i c a ls t r u c t u r e so f t h em e t a b o l i t e s m e t h o d s ：( 1 ) m i c r o b i a lt r a n s f o r m a t i o ne x p e r i m e n t ：f i r s t l y ，w es e l e c t e d ar o b u s ts t r a i nf o rt h et r a n s f o r m a t i o no fd i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d eb ys c r e e n i n g s e v e r a lk i n d so fs t r a i n ，t h e nw eg o tap u r et r a s f o r m a t i o np r o d u c ta n d c o n f i r m e di t ss t r u c t u r eb yi t sm sd a t a ( 2 ) c u l t u r es o l u t i o no fi n t e s t i n a l b a c t e r i aw e r ep r o d u c e df r o mr a tf e c e sa n dt h e ni n c u b a t e dw i t hd i p f l u z i n e h y d r o c h l o r i d et of i n dw h e t h e r t h e r ew e r em e t a b o l i t e sb yh p l c - p d a r e s u l t s ：m i c r o b i a lt r a n s f o r m a t i o n e x p e r i m e n t ：a f t e rs c r e e n i n g ， s p o r o t r i c h u ms p ，a s 3 2 8 8 2w a ss e l e c t e dt ot r a n s f o r m d i p f l u z i n e h y d r o c h l o r i d ef o ri t sp o t e n t i a lm e t a b o l i cc a p a b i l i t ya n dg o o dr e p r o d u c i b i l i t y w eg o tam e t a b o l i t eo fd i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d ef r o ma s3 2 8 8 2 ，w h o s e c h e m i c a ln a m ew a s 1 - d i p h e n y l m e t h y l 一4 - ( 4 - f l u o r op h e n y l - 4 - h y d r o x y l ) p i p e r a z i n e w ef o u n dn om e t a b o l i t e si nt h ec u l t u r es o l u t i o no fi n t e s t i n a l b a c t e r i ao fd i p f l u z i n eh y d r o c h l o r i d e 8 英文摘要 c o n c l u s i o n ：w eg o tap u r ep r o d u c tb ym i c r o b i a lt r a n s f o r m a t i o na n d c o n f i r m e di t ss t r u c t u r e p a r tf o u rd e t e r m i n a t i o no fc l a v u l a n a t ep o t a s s i u ma n di t sp r e p a r a