3脑脊液常规检查的标准操作程序.doc

岳阳市一人民医院The First Peoples Hospital of Yueyang文件编号：SOP-JZ-003.00第1版/第0次修改文件名称：脑脊液常规检查标准操作规程编写人：李林审核人：彭进批准人：刘培香第6页，共 6 页实施日期：2011-9-1一、目的规范脑脊液常规检查。二、适用范围适用于脑脊液的常规检测，包括：一般性状的检查、潘氏试验、细胞总数计数、白细胞计数与分类、革兰氏染色、抗酸染色、墨汁染色。三、支持性文件全国临床检验操作规程(第三版)、临床检验基础（第三版）四、标本处理1、标本收集后应立即送验，一般不能超过1h。收到标本后应立即检查，久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检查；葡萄糖分解使含量降低；病原菌破坏或溶解。2、细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用EDTA盐抗凝。五、一般性状检查主要观察颜色与透明度，可记录为水样透明、白雾状浑浊、微黄浑浊、绿黄浑浊、灰白浑浊等。脓性标本应立即直接涂片进行革兰染色检查细菌，并应及时接种培养基。1、红色：如标本为血性，为区别蛛网膜下腔出血或穿刺性损伤，应注意：(1)将血性脑脊液试管离心沉淀(1500rmin)，如上层液体呈黄色，隐血试验阳性，多为蛛网膜下腔出血，且出血的时间已超过4h。如上层液体澄清无色，红细胞均沉管底，多为穿刺损伤或因病变所致的新鲜出血。(2)红细胞皱缩，不仅见于陈旧性出血，在穿刺外伤引起出血时也可见到。因脑脊液渗透压较血浆高所致。2、黄色：除陈旧性出血外，在脑脊髓肿瘤所致脑脊液滞留时，也可呈黄色。黄疸患者的脑脊液也可呈黄色。但前者呈黄色透明的胶冻状。3、米汤样：由于白(脓)细胞增多，可见于各种化脓性细菌引起的脑膜炎。4、绿色：可见于绿脓杆菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎。5、褐或黑色：见于侵犯脑膜的中枢神经系统黑色素肉瘤。五、潘氏(Pandy)球蛋白定性试验1、原理脑脊液中球蛋白与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白色浑浊或沉淀。2、试剂5苯酚溶液：取纯苯酚25m1，加蒸馏水至500m1，用力振摇，置37温箱内12天，待完全溶解后，置棕色瓶内保存。3、操作取试剂23m1，置于小试管内，用毛细滴管滴入脑脊液l一2滴，衬以黑背景，立即观察结果。4、结果判断阴性：清晰透明，不显雾状。极弱阳性(土)：微呈白雾状，在黑色背景下，才能看到。弱阳性(十)：灰白色云雾状。阳性(2十)：白色浑浊。强阳性(3十)：白色浓絮状沉淀。最强阳性(4十)：白色凝块。5、临床意义正常时多为阴性。有脑组织和脑膜疾患时常呈阳性反应，如化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、梅毒性中枢神经系统疾病、脊髓灰白质炎、流行性脑炎等。脑出血时多呈强阳性反应，如外伤性血液混入脑脊液中，亦可呈阳性反应。六、细胞计数（一）、细胞总数1、器材及试剂(1)细胞计数板；(2)红细胞稀释液(配法同血液红细胞稀释液)。2、操作(1)对澄清的脑脊液可混匀后用滴管直接滴入计数池，计数10个大方格内红、白细胞数，其总和即为每l的细胞数。再换算成每升脑脊液中的细胞数。如细胞较多，可计数一大格内的细胞10，即得每l脑脊液中细胞总数。如用升表示，则再乘以106。(2)浑浊或带血的脑脊液可用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20l，加入含红细胞稀释液038m1的小试管内，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数，乘以50，即为每l脑脊液的细胞总数。(二)、白细胞数1、非血性标本：小试管内放入冰乙酸12滴，转动试管，使内壁沾有冰乙酸后倾去之，然后滴加混匀的脑脊液34滴，数分钟后，混匀充入计数池，按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数。2、血性标本：将混匀的脑脊液用1冰乙酸溶液稀释后进行计数。为剔除因出血而来的白细胞数，用下式进行校正。每l脑脊液内白细胞校正数每l脑脊液内白细胞未校正数每l脑脊液内内红细胞数每l血液内白细胞-每l血液内红细胞3、参考值正常人脑脊液中无红细胞，仅有少量白细胞。成人：(08)106/L儿童：(0一15)106/L多为淋巴细胞及大单核细胞，两者之比约为7：3，偶见内皮细胞。4、附注(1)计数应及时进行，以免脑脊液凝固，使结果不准确。(2)细胞计数时，应注意新型隐球菌与白细胞的区别。前者不溶于乙酸，加优质墨汁后可见不着色的荚膜。(3)计数池用后，应用75乙醇消毒60min。忌用苯酚消毒，因有损计数池的刻度。(三)、细胞分类1、直接分类法：白细胞计数后，将低倍镜换为高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数单个核细胞(包括淋巴细胞及单核细胞)和多核细胞，应数100个白细胞，并以百分率表示。若白细胞少于100个，应直接写出单核、多核细胞的具体数字。2、染色分类法：如直接分类不易区分细胞时，可将脑脊液离心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清l滴，推片制成均匀薄膜，置室温或37温箱内待干，进行瑞氏染色后用油镜分类。如见有不能分类的细胞，应另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤时。(四)、临床意义1、中枢神经系统病变的脑脊液，细胞数可增多，其增多的程度及细胞的种类与病变的性质有关。2、中枢神经系统病毒感染、结核性或霉菌性脑膜炎时，细胞数可中度增加，常以淋巴细胞为主。3、细菌感染时(化脓性脑膜炎)，细胞数显著增加，以中性粒细胞为主。4、脑寄生虫病时，可见较多的嗜酸性粒细胞。5、脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数红细胞。七、细菌直接涂片检查 （一）、革兰氏染色 临床怀疑流行性脑脊髓膜炎或化脓性脑脊髓膜炎时，应作细菌学涂片检查。操作如下：1、将脑脊液立即离心沉淀，取沉淀物涂片2张。2、涂片应在室温中，或置37温箱中干燥，切勿以火焰烘烤。3、经火焰固定后，一张涂片用亚甲蓝染色30s，另一张作革兰氏染色，操作如下：(1)加结晶紫染1min，清水冲去染液，倒去玻片上水。(2)加碘液染1min，水冲。(3)加脱色液（75%乙醇），不时摇动1030s，至无紫色脱落为止，水洗。(4)加复染液，染30s，水洗。干后镜检。4、注意细胞内外的细菌形态，报告时应予以描述。报告检查到革兰氏阴(阳)性细菌，或未见革兰氏细菌。（二）、抗酸染色 临床上怀疑为结核性脑脊髓膜炎时，应作抗酸染色。单张涂片抗酸染色阳性率较低，但如果检查涂片增至4张，阳性率可达80%以上。操作如下： 石炭酸复红染色法：1、涂片经火焰固定后，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸气出现，切不可沸腾。染色5min，冷却后水洗。2、加脱色剂，不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗。3、加复染液，染0.51min，水洗。4、干后镜检。分枝杆菌呈红色，背景为蓝色。 金永染色法：1、涂片固定后加第1液510min，不必加热。2、弃去第1液后水洗，加第2液（脱色液）脱色至无红色脱落为止，水洗。3、加第3液（复染液）复染30s，水洗，待干，油镜镜检。抗酸菌染成红色，非抗酸菌及细胞染成谈蓝色。八、真菌检查-新形隐球菌检查 1、操作(1)取脑脊液，以2000rmin离心10min，以沉淀