第三组微生物实习报告.doc

实 习 报 告实习名称 食品微生物检验实 系 别 生物与化学工程系 年级专业 07级食品质量与安全专业 学生姓名 Xxx 指导老师 Xxx 邵 阳 学 院 2010 年 12 月 5 日 生物性危害项目检测一、实习时间、地点和实习单位：实习时间： 2010年11月22日至2010年12 月5日实习地点：生物与化学工程系实验楼（3#104、106、108）实习单位：07食品质量与安全班食品微生物检测实习第三组2、 实习过程概述：时间主要内容2010年11月18日实习动员 实习准备2010年11月22日23日资料查阅、方案拟定，交指导老师审阅2010年11月24日找仪器、药品及配制好所有需要的试剂2010年11月25日28日酸奶中细菌总数的测定2010年11月29日12月2日 新鲜鸡蛋与培养非新鲜鸡蛋霉菌和菌落总数的对比检测2010年12月3日交还实验药品及仪器，打扫实验室卫生2010年12月4日5日整理实习报告，并上交三、主要实习岗位和实习内容1、主要实习岗位：邵阳学院学院微生物实验室2、实习内容：检测酸奶中的菌落总数检测新鲜鸡蛋与经培养后的鸡蛋中菌落总数的变化检测新鲜鸡蛋与经培养后的鸡蛋中霉菌的变化酸奶中的细菌含量检测1、基本原理平板菌落计数法又称标准平板活菌计数法（standard plate count，简称SPC法），是最常用的一种活菌计数法。它是根据微生物在高度稀释条件下于固体培养基上所形成的单个菌落，是由一个单细胞繁殖而成，这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，根据待检样品的污染程度，做10倍递增系列稀释，制成均匀的系列稀释液，促使样品中的微生物细胞分散开，使之呈单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），选择其中23个稀释液，使至少一个稀释度的平皿中培养基内，经恒温培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数，根据其稀释液倍数和取样接种量即可换算出样品中的活菌数。2、实验材料（1） 检样 （2） 培养基 营养琼脂培养基（即牛肉膏蛋白胨琼脂）。（3） 试剂 0.85%无菌生理盐水(9mL/管，225mL/250mL三角瓶内含适量玻璃珠）、75%酒精棉球。（4） 仪器与其他用具 无菌平皿、无菌吸管、无菌不锈钢勺、无菌称量纸、无菌吸管（1mL、10mL）、试管、三角瓶、广口瓶、灭菌剪刀、灭菌镊子、三角形玻璃涂布棒、酒精灯、电子天平（0.01g）、培养箱、冰箱、恒温水浴锅、微波炉、匀质器或乳钵等。3、操作步骤1检样做几个适当倍数的稀释液选择23个适宜的稀释度各以1mL量加入灭菌平皿内每皿加入适量营养琼脂混匀（361），（2448）h2h培养菌落计数报告2营养琼脂培养基配制蛋白胨10g牛肉膏3g 氯化钠5g琼脂1520g蒸馏水 1000mL将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至7.27.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121高压灭菌15min。注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为2%。3检样稀释及培养（1）以无菌操作，将检样25ml放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。（2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。（3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管.（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择23个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46C营养琼脂培养基可放置在（461）C）水浴锅内保温注入平皿15ml20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌平皿内作空白对照。（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（361）C恒温箱内培养（482）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。4菌落计算方法平板菌落数的选择选取菌落数在30300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。 稀释度的选择应选择平均菌落数在30300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在30300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字。若所有稀释度平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。菌落数的报告菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。5、实验结果：活菌数/ml=同一稀释度的菌落平均数稀释倍数稀释度10-410-510-6空白第一组1302520第二组1131940平均数121.5223.00活菌数，个/ml1.21062.21063.01060平均数，个/g2.110606、实验现象：细菌菌落呈点状，在培养基上生长较均匀的，计数时可以只数一半再乘两倍。部分菌落大范围成块和只在平皿外圈形成菌落的不好计数。7、实验问题及解决办法：实验中有部分平皿涂布不均匀，导致实验结果不好计数，舍去不好计数的平皿，选择菌落生长较均匀的平皿计数。 新鲜鸡蛋与培养非新鲜鸡蛋菌落总数的对比检测1、原理菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后，所得每g (mL)检样中形成的微生物菌落总数。2、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下:2. 1 恒温培养箱:36 士1，2. 2 冰箱:2 5 2. 3 恒温水浴箱:46 士1 。2. 4 天平:感量为0.1 g2. 5 试管2. 6 振荡器。2. 7 无菌吸管:1 mL(具0.01 mL刻度)、10 mL(具0.1 mL刻度)或微量移液器及吸头。2. 8无菌锥形瓶:容量250 mL, 500 mL2. 9无菌培养皿:直径90 mm2. 10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。2. 11放大镜或/和菌落计数器。2.12 玻璃珠2.13 玻璃棒3、培养基和试剂3. 1平板计数琼脂培养基:（1）成分胰蛋白陈5.0 g 酵母浸膏2.5 g 萄糖1.0 g琼脂 15.0 g 蒸馏水1000 mL pH 7.0士0.2（2）制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121高压灭菌15 min3.2 磷酸缓冲液: （1）成分磷酸二氢钾(KH2P04) 34.0 g 蒸馏水500 mL pH 7.2（2）制法 贮存液:称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500 mL蒸馏水中，用大约175ml的1mol/l氢氧化钠调节PH，用蒸馏水稀释至1 000 mL)u贮存于冰箱。稀释液:取贮存液1.25 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL，分装于适宜容器中，121 高压灭菌15 min3.4 新鲜鸡蛋3.5 在27培养了48h的非新鲜鸡蛋4操作步骤4. 1样品的稀释4.1.1液体样品:以无菌吸管吸取1 mL样品置盛有9mL磷酸缓冲液的无菌锥形瓶 (瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。4.1.2用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。4.1.3制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1 mL无菌吸管或吸头。4.1.4根据对样品污染状况的估计，选择2个一3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)，在进行10倍递增稀释时，吸取1 mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。4.1.5及时将巧15mL-20 mL冷却至46 的平板计数琼脂培养基(可放置于46 士1 恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。4. 2培养4. 2. 1待琼脂凝固后，将平板翻转，36 士1 培养48 h士2h。水产品30 士1 培养72 h士3 h4.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4 mL)，凝固后翻转平板，按4.2.1条件进行培养。4. 3菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-forming units CFU)表示。4. 3. 1选取菌落数在30 CFU-300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。4.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。4.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。5实验现象及结果分析：经过48h恒温培养，除对照组外所有平板上都有菌落生长，选取其中菌落较明显，可有效计数的平板计数，数据如下：样品稀释度10-310-410-5空白 新 鲜 鸡 蛋第一组841010第二组76800平均数8090.50活菌数(cfu/ mL)810491045104 0 培养 的非 新鲜 鸡蛋第一组1563240第二组1423430平均数149333.50活菌数(cfu/mL)1.491053.31053.51050由上述实验结果可知，经过培养的鸡蛋细菌数目明显多于新鲜的鸡蛋。 新鲜鸡蛋与培养非新鲜鸡蛋霉菌的对比检测1、检验方法和引用标准1.1霉菌和酵母的计数方法，与菌落总数的测定方法基本相似。主要步骤为：将样 品制作成10倍梯度的稀释液，选择3个合适的稀释度，吸取1mL于平皿，倾注培养基后，培养观察，计数。对霉菌的计数，还可以采用显微镜直接镜检计数的方法。1.2 GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂2、设备和材料 2.1恒温箱：2528 2.2振荡器 2.3 天平 2.4 显微镜 2.5玻塞三角瓶：300mL2.6 试管：15mm150mm 2.7平皿：直径9cm2.8 吸管：1mL及10mL2.9 酒精灯2.10 载物玻片2.11 盖玻片2.12 锥形瓶。2.13牛皮纸袋：121灭菌20min2.14 金属勺、刀等2.15 试管架2.16 接种针2.17 橡皮乳头3、培养基和试剂 3.1 高盐察氏培养基：按GB4789.28中4.78规定。 硝酸钠（GB636） 2g 磷酸二氢钾（GB1274） 1g 硫酸镁（MgSO47H20，GB671） 0.5g 氯化钾（GB646） 0.5g 硫酸亚铁（GB664） 0.01g 氯化钠（GB1266） 60g 蔗糖（HG31001） 30g 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL 高盐察氏培养基制法： 加热溶解，分装后，121 高压灭菌 20min。必要时，可酌量增加琼脂。3.2 灭菌蒸馏水。 3.3 乙醇。3.4 新鲜鸡蛋 3.5 培养的非新鲜鸡蛋4、检测程序：检样加无菌水稀释液10倍稀释振荡30min 做成几个当倍数的稀释液选择3个适当稀释度、各以1ml加入灭菌平皿内每皿加入适量高盐察氏培养基 25-281培养1周菌落计数实验报告5、 操作步骤5.1 采样：取样时须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或锥形瓶等。在卫生学调查基础上，采取有代表性的样品。样品采集后应尽快检验，否则应将样品放在低温干燥处。5.2 以无菌操作称取检样1mL，放入含有9mL灭菌水的玻塞三角瓶中，振摇均匀，即为1：10稀释液。5.3 用灭菌吸管吸取1：10稀释液10mL，注入试管中振摇均匀，使霉菌孢子充分散开。5.4 取1mL1：10稀释液注入含有9mL灭菌水或生理盐水的试管中振摇均匀，此液为1：100稀释液。5.5 按上述操作顺序做10倍递增稀释液，根据对样品污染情况的估计，选择3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿，然后将凉至45左右的培养基注入平皿中，待琼脂凝固后，倒置于2528温箱中，3d后开始观察，共培养观察5d。 5.6 计算方法：通常选择菌落数在10150之间的平皿进行计数，同稀释度的2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克（或毫升）检样中所含霉菌和酵母数。样品稀释度10-210-3空白新鲜鸡蛋 第一组1220第二组2030平均数162.50活菌数(cfu/ mL)1.61032.51030培养 的非 新鲜 鸡蛋第一组710第二组500平均数60.50活菌数(cfu/ mL)610251020 5.7 报告：每克（或毫升）食品所含霉菌和酵母数以个/g（个/mL）表示。6、实验结果： 通过实验数据我们可以得知经过培养的鸡蛋霉菌数目明显多于新鲜的鸡蛋。四、实验收获及心得体会在实习期间通过理论联系实际，不断的学习和总结经验，巩固了所学的知识，提高了处理实际问题的能力，为毕业设计的顺利进行总结了经验。实习中的感悟首先、毕业实习的顺利进行得益于扎实的专业知识。用人单位在招聘员工的第一要看的就是你的专业技能是否过硬。我们一同过去的几位应聘者中有来自不同学校的同学，有一部分同学就是因为在专业知识的掌握上比别人逊色一点而落选。因为对于用人单位来说如果一个人有过硬的专业知识，他在这个特定的岗位上就会很快的得心应手，从而减少了用人单位要花很大的力气来培训一个员工