【doc】幽门螺杆菌的生物学与免疫学.doc

幽门螺杆菌的生物学与免疫学(1生t,要用医学进修杂志1994年第22卷第1期幽门螺杆菌的生物学与免疫学|(f)微生物学教研室.垡墨莹幽门螺杆菌(helicobacterpylor,hp)由已作为本菌感染的快速诊断务法之一.而且本marshall与warren于1983年首次从胃粘膜标本中分离成功.此后越来越多的证据表明它与慢性胃炎,胃十二指肠溃疡有密切关系.因而引起医界的关注,相继在细菌学和免疫学等方面作了大量研究,本文就这方面的情况作一简要介绍.1生物学性状菌体在胃粘膜活检标本中呈弧形,s形或海鸥展翅状.长短不一,长者可达6m.在胃粘液层中常呈鱼群样排列.新鲜培养物中菌体变长,弯曲度小,呈多形态.传代培养后,苗体可变为球形或杆状,染色也不均匀.革兰氏染色阴性,单端有26根鞭毛,运动活泼.临床上通过直接涂片,组织切片,组织印片和组织匀浆涂片染色镜检.染色方法很多,其敏感性约9o,但易与其它革兰阴性杆菌相混杂,最近有人采用半gram染色法,菌体着深红色,容易辨认,与培养相比,敏感性为92,特异性为100,该法价廉,快速,简单,最适合于常规应用.利用相差显微镜观察,只要将组织研碎,勿需染色便可发现形态典型,轮廓清楚的hp.由于hp单克隆抗体的制备,可以用荧光染色和pap染色查hp.目前寡核苷酸探针也用于对hp的检查.hp为微需氧菌,室温下3小时即死亡,故标本应及时送检,接种,否则影响检出率.goodwin报告以5o:,70co,8h,80nz的气体环境下阳性率较高,菌落生长较密.hp营养要求高,需动物血和血清.最适生长温度37,ph68.25中则不生长,42中有少数生长,这与其它菌不同.本菌生长缓慢,3天才见针状透明无色菌落.生化反应不活泼,尿素酶丰富,此系区别于其它弯曲菌的主要依据之一.测定尿素酶活性菌有碱性磷酸酶,dna酶,7谷氨酰胺肽酶,其它弯曲菌则没有.joansl对5o株hp进行了391项生化试验,并推出了apizym生化鉴定盒.apzym可鉴定hp的生物型,并可将hp与其他弯曲苗加以区别.hp有3个生物型:i型可产生碱性磷酸酶,酸性磷酸酶和亮氨酸苷酰胺基酶i型除上述外,还产生萘酚一aspl磷酸水解酶,脂酶和脂化脂肪酶.apizym鉴定hp在48小时出结果,该法迅速,简便.而常规生化检测则需2472小时.hp在0.06ttc,1苷氨酸,0.01亚硒酸血平板上生长,在3.5naci葡萄糖血平板上不生长.hp对多种抗生素敏感,而空肠弯曲菌(cj),胎儿弯曲菌(cf)对各抗生素的耐药性比hp大10100倍.hp对氯霉素,洁霉素部分敏感对红霉素,卡那霉素,枸橼酸铋,先锋霉素i敏感,对呋喃坦啶,灭滴灵高度敏感.2免疫学诊断目前诊断感染方法主要有:活检组织细菌培养,粘膜涂片,组织切片染色镜检,尿素酶试验及呼吸试验等.呼吸试验需特殊仪器外,其他检查均需经胃镜检查取得粘膜组织,故临床推广或多次重复检查有一定难度.寻求简便有效,准确可靠的诊断方法对深入研究hp感染极为重要,故目前国内外对hp的免疫学诊断研究颇多.2.1抗原的选择hp的菌体,鞭毛和分泌物等均能刺激机体产生特异性抗体.利用不同抗原,可检测到相应的特异抗体.其中有些抗原特异性和敏感性不高.而有些则与其他菌体有交叉反应,特异性也不高.目前主要采用的抗原有:hp整菌抗原,其成分复杂,与cj,cf之间有交叉反应;超一2一,声粉碎物,即培养4天的hp浓悬液经超声破膜处理3次制成的抗原.用吸收试验证实与大肠杆菌,cf,cj之间无交叉反应,sdspage电泳分析此抗原主要免疫反应条带为63kd,57kd和31kd尿素酶抗原,hp富含尿素酶,细菌尿素酶刺激机体产生特异性抗尿素酶抗体,通过检测血清中尿素酶抗体而能诊断hp感染.用化学方法或用快速蛋白质液相层析技术提纯hp的尿素酶(分子量为31kd,56kd,61kd)作抗原,其特异性和敏感性高,与其他细菌无交叉反应精制抗原或基困重组hp抗原,用化学方法提取高分子量的细胞相关蛋白(分子量400700kd);或用单克隆抗体亲和层析柱纯化到的hp分子上特异抗原决定簇用克隆免疫印迹法找出的特异反应蛋白带制成特异性强的精制抗原,如用hp单抗cp;纯化的hp抗原25kd,其血清学诊断特异性和敏感性极高.利用重组基因技术将上述精制抗原克隆化,输入大肠杆菌培养中克隆所需基因,再用这些基因重组大肠杆菌表达出hp抗原,这样可望获得大量hp特异性抗原,从而使hp的免疫学诊断标准化,目前已取得hp的66kd和31kd多肽抗原.2.2免疫学诊断方法2.2.1菌体抗体的检测测定血清抗体的方法很多如补体结台试验.细菌凝集试验.这两种方法敏感性和特异性较差,目前很少使用.被动血凝试验快速,不需事先除去非特异反应素可作为hp感染的普查和既往感染者的指标.但该法阴性标准不易掌握可靠性欠佳.间接免疫荧光法简单,快速敏感和特异性高,可以弥补培养法由于hp弱,培养过程污染或培养基等因素所致阴性不足.但由于需荧光显微镜,因此,广泛应用受到限制.酶联免疫吸附试验(elisa)敏感性高,特异性强,稳定性好,可检测不同类型抗体,是临床应用最多的方法.目前国内外均已有抗hp抗体试剂盒供应.elisa的特异性和敏感性与所采用的抗原有关,morris等用l4株死菌检测200例做实用医学进惨杂志1994年第22卷第1期过胃镜患者的血清抗体,并与其它方法比较,发现该法敏感性为91,特异性75,阳性预测值82,阴性顶测值87.goodwin等以酸提取物为抗原,特异性97,敏感性81.perez等则发现超声粉碎物作抗原,抗hpigg,iga抗体特异性94.4%,敏感性93.1t而1gm则无特异性.潘志君等用elisa检测患者血清中抗hpigg,吸收试验证实与cf,q常见菌均无反应.100例检查结果显示本法敏感性95,特异性9o,阳性预测值97,阴性顶测值81.张启波,项非英等研究也得到同样的结果.本法为多数学者所倡用,可用于胃,十二指肠疾病中感染的诊断,慢性胃病的筛选,特别适合于hp感染的流行病学调查,对评价和追踪抗hp药物的疗效尚有待于证实.最近有人用免疫印迹法检测了200例胃疚患者,190倒献血员,96例疑似肝炎患儿血清.同时对胃疾患者取粘膜组织行hp培养和革兰氏染色作阳性标准.结果表明,hp检查阴性者与用免疫印迹法查出的血清中igg,ga抗体有极好的相关性,而igm抗体无血清学诊断意义.作者认为应用此法检查血清igg和iga抗体可以肯定感染,适用于不能作胃镜者诊断hp感染和易感人群的筛选.2.2.2n一乙酰神经氨结合凝集素(nlbh)抗体的检测evans等从无症状者身上分离的hp8826株中提纯nlbh,经证实无尿素酶活性,以此为抗原,行eusa检测了187倒血清.结果诊断hp感染的特异性为98.3,敏感性75,消化性溃疡者81.3可检出nlbh抗体.作者还发现,活动性溃疡患者的阳性率明显高于无症状的hp感染者,说明nlbh抗体的检测有可能作为溃疡活动性的指标.2.2.3单克隆抗体应用最近sugiyam等获得3株特异性高的hp单抗,其中单抗cp;特异性识别hp抗原25kd.以单抗cp纯化的25kd蛋白为抗原,应用elisa检测hp感染的病人血清,结果特异性l.0.敏感性96.b%,阳性和阴性预测值分别为100和94.且发现慢性胃炎,胃溃疡和十二指肠溃疡t实用医学进修杂志1994年第22卷第1期患者cp抗体滴度明显增高,cp滴度与胃炎组织学分级显着相关.2.2.4尿素酶抗体的检测dent等利用hp富含尿素酶的特性,以尿素酶为抗原采用elisa检测病人血清中特异性尿素酶抗体.敏感性达100.karnes发现尿素酶抗体检测的特异性100,敏感性93,浅表性和萎缩性胃炎患者尿素酶抗体阳性百分率分别为9o与8o.丁松泽等研究也得类似结果.尿素酶抗体检测对慢性胃炎的诊断有一定的价值.2.3免疫学诊断的临床价值2.3,1胃和十二指肠疾病申hp感染的诊断jones等发现慢性胃炎,胃溃疡,十二指肠溃疡病人血清中抗hpigg的阳性检出率分别为8o,86和59,而igm则无特异性.国内胃炎,胃溃疡,十二指肠溃疡病人hp检出率分别为84%,86和9o.但血清学检查不能提示患者已获感染的时限.也无法证实检查当时hp感染是否尚具有活动性.2.3.2慢性胃病的诊断和筛选loffeld等采用elisa对7o例非溃疡性消化不良患者进行检查,发现48例抗hpigg阳性者中,组织学检查均有胃窦区慢性胃炎,22例活检正常者,未检出hp抗体.elisa法诊断相关性胃炎的阳性和阴性预测值均达9o以上.该作者认为血清学可取代内窥镜检查来诊断相关性胃炎,并可在消化不良患者中行elisa作为诊断筛选一3程序方案,即对消化不良者首先行eusa检查,如试验阴性,再行内镜检查;如阳性者,就可用铋剂治疗.如治疗后消化不良症状仍存在,就应行内镜检查.按上方案,至少28%的消化不良患者可避免作内镜检查,这样既可以减轻病人的痛苦和经济负担,又可提高内镜检查的效益.2.3.3评价和追踪hp抗药物的疗效goert等对内镜证实的16例相关性胃炎进行随访,发现12例经治疗后病人症状缓解,抗hpigg,iga和igm抗体全部下降,且igm,iga滴度恢复到正常水平.igg仍维持到一定水平,持续3月之久.未治疗的4例抗体全部维持高滴度该作者认为hpigm,iga抗体可作为疗效陋访的指标hp感染后临床治疗一般转阴率较高,平均在5080%,但极易于停药后复发.2.3.4hp感染的流行病学调查免疫学诊断方法快速灵敏,非刨伤性,又可同时处理大量标本,特别适合于大规模流行病学调查.morris等发现随机献血员抗体滴度低,从事内镜工作的临床医生感染率与其它人群相比无明显差别,但有些职业人群如屠宰工人,冷冻工人和虫害控制人员的血清阳性率很高.rathbon等调查hp感染与年龄的关系,发现小于2o岁年龄组抗体阳性率很低,随年龄增加检出率有逐渐升高的趋势.(1994-02-26收稿)病人反复烧心,反酸请注意胃食管反流病胃食管反流病(gerd)是一种上胃肠遭动力性疾病,日常生活中多数人存在胃食管反流而没有症状.若病人反复的烧心,反酸,胸痛和固胃内容物反流弓【起的其它症状时,可以试用抗酸剂作为诊断性治疗.然后进一步作钡餐,