依达拉奉注射液杂质谱分析.docx

依达拉奉注射液杂质谱分析许真玉（国家食品药品监督管理总局药品审评中心, 北京 100038）【摘 要 】杂质控制是注射剂质量控制的重要指标之一，而杂质谱分析是建立合理可行的杂质检测方法的基础。本文结合依达拉奉制备方法、稳定性特征、依达拉奉注射液处方分析、原研厂产品介绍文件、国外药典等对依达拉奉注射液的杂质谱分析进行讨论，供相关研究者参考。【关 键 词 】 依达拉奉注射液；杂质谱；分析doi：10.3969/j.issn.1672-5433.2014.08.007Analysis on Impurity Profile of Edaravone InjectionXu Zhenyu （Center for Drug Evaluation of the State Food and Drug Administration，Beijing 100038，China）ABSTRACT Impurity control is one of the important items of quality control of injections，and impurity profile analysis is the basis for the establishment of a reasonable and feasible method for detection of impurities. In this article ，impurity profile analysis of edaravone injection was discussed based on the preparation technique ，stability characteristics，and formulation analysis of edaravone injection，and referring to the research document of the product and foreign pharmacopoeia，etc.KEY WORDS Edaravone Injection；Impurity Profile；Analysis依达拉奉注射液是田边三菱制药 株 式 会 社 开发 的 脑 保 护 剂 ，具 有自由基清除作用及过氧化反应 抑 制 作 用 ，2001 年 4 月 在 日 本 上 市 ， 规 格 为 20 mL30 mg， 商 品 名 为 “RADICUT ” ， 适应证为改善急性 脑梗死所致的神经症状 、 日 常 生 活 活 动 能 力 和 功能 障 碍 ， 用 法 用 量 为 每 次 30 mg， 加入适量生理盐 水中稀释后静脉滴注 ，30 分 钟 内 滴 完 ， 每 日 2 次 ，14 日 为 一 个 疗 程 ， 尽可能在发病后 24 小 时 内 开 始 给 药 。原研厂依达拉奉注射液尚未进口我 国 ， 目 前 已有多家国产依达拉奉注射液上市 ， 也 有 多 家 申 报单位在进行依达拉奉 注射液的仿制申请 。 作 为 注 射 液 ， 有关物质检查是非常重要的一 项 质 量 控制 指 标 ， 而杂质谱分析是有关物质检 查 方 法 学 研究和检测方法建立的基 础 。 本文结合相关文献和 日常审评工作经验 ， 对依达拉奉注射 液 的 杂 质 谱 分 析 进 行 讨 论 。1 药物制剂杂质来源 通 常 情 况 下 ， 作 为 药 物 制 剂 ， 其杂质来源主要 包 括 两 方 面 。第一是药物制剂各组成成分引入 的 杂 质 ， 包 括 原 料 药 、 辅料等引入的杂质 。 考虑到原料药是组 成制剂的活性成分 ， 而辅料通常为稳 定 性 相 对 较 好 的 惰 性 物 质 ， 所以需要重点关注原 料 药 可 能 引 入 的 杂 质 ， 可以结合原料药杂质谱分 析 进 行 这 方 面杂质情况的分析 。作 者 简 介 ：许真玉，女，博士。研究方向：药物技术审评。E-mail：27中国执业药师综述对于原料药引入的杂质 ， 在 进 行 制 剂 质 量 控制 时 ， 可以有两种控制方式 。 一种是在原料药质量 标准中进行严格控制 ， 通过严格保证原 料 药 的 质 量来保证制剂的质量 ， 当 然 ， 这 种 控 制 方 式 的 前 提 条件是这些杂质在制剂生产 、 贮 藏 过 程 中 不 发 生 变 化 。 另一种方式是一 并在制剂质量标准中进行 控 制 ， 这种方式更适用于原料药杂质控 制 不 够 完 善 的 情 况 。第二是药物制剂在生产和贮藏过程 中 产 生 的 杂 质 ， 包括各种降解杂质 、 原 辅 料 相 互 作 用 产 生 的 杂 质 等 。 这类杂质是制剂杂质研究和控制的重点 ， 可以结合原料药的结构特点和降解途径 、 原 辅 料 相容性研究情况 、 制剂处方工艺情况 、 制 剂 包 装 和 贮 藏 情 况 、 强制破坏试验情况 、 对 比 研 究 情 况 、 相 关 文 献 资 料 等 ， 研究分析在制剂生产和 贮 藏 过 程 中可能生产的杂质 。 通 常这类杂质需要在制剂的 质量标准中进行有效的控制 。2 依达拉奉注射液杂质谱分析 如 上 所 述 ， 依达拉奉注射液杂质的主要来源 ， 包括原料药依达拉奉引 入的杂质以及在依达拉奉 注射液生产和贮藏过程中产生的杂质 ， 下 面 将 分 别从这两个方面开展讨论 。2.1 原料药依达拉奉引入的杂质 对于原料药依达拉奉引入的杂质 ， 可 以 结 合 原料药依达拉奉的杂质谱 进 行 分 析 。 通 常 原 料 药 本身的杂质谱包括工艺杂质和降解杂质 两 方 面 ， 考虑到依达拉奉原料 药在固体状态下稳定性较 好 ， 不 容易产生降解杂质 1 ， 本文将重点对其工艺 杂 质 进 行 讨 论 。2.1.2 依 达 拉 奉原料药工艺杂质分析 根 据 上 述依达拉奉制备方法 ， 在 依 达 拉 奉 原料药中可能存 在的工艺杂质包括 未反应完全的起始原料乙酰乙 酸乙酯和苯肼以及起始原料中含有 的 杂 质 、 反 应 副产物二聚体等 。 其 中 ， 对于起始原料中含有的杂 质 ， 可以通过进一步追溯所使用 的起始原料乙酰 乙酸乙酯和苯肼的 制备方法而进行分析 。 乙 酰 乙 酸乙酯可以采用双乙烯酮与乙醇酯 化 法 ， 或 者 乙 酸乙酯与乙醇钠 Claisen 缩 合 法 制 得 粗 品 ， 通 过 减 压蒸馏得到成品 4 。 苯肼通常以苯胺为起始原料 ， 经 重 氮 化 、 还 原 、 酸 析 成 盐 、 中和等反应制得 5 。2.1.3 依 达 拉 奉原料药引入杂质的控制 对 于 上述分析中提到的杂质 ， 二 聚 体 杂 质在依达拉奉注 射液的生产和贮藏过程中也会产生 ， 需 要 在 依 达 拉奉注射液中进行研 究 和 控 制 。 苯肼属于潜在遗 传 毒 性 杂 质 ， 为更好地保证依达拉奉 注 射 液 质 量 ， 建议一并在依达拉奉注射液中进行 研 究 和 控 制 ， 根据欧洲药品管理局 （EMA ） 指 导 原 则 6 ， 每 日 摄 入 量 应 低 于 1 . 5 g ， 依达拉奉注射液的日剂量为 60 mg， 据 此 计 算 ， 建议将其控制在 25 ppm 以 内 。未反应完全的起始 原料乙酰乙酸乙酯以及起始原 料中含有的杂质 ， 建议在原料药 依达拉奉的质量 标准中进行控制 。2.2 依达拉奉注射液降解杂质的分析 2.2.1 原 料 药 依达拉奉理化性质的分析 文 献 报 道 ， 依达拉奉在固体状态下稳定性较 好 ， 田 边 三 菱 制 药 株 式 会 社 的 依 达 拉 奉 注 射 液 产 品 介 绍 （interview form，IF） 文 件 显 示 ， 依达拉奉无引湿性 ， 在 50 高 温 条 件 下 放 置 3 个 月 、 在 40 /75% 相 对湿度的高湿条件下放置 6 个 月 、 在 1 000 lx 的 光照条件下放置 4 周 、 在室温下长期放置 36 个 月 ， 除颜色稍有变化外 ， 性 状 、 熔 点 、 纯 度 、 干 燥 失 重 、 含量等基本无变化 1 。但依达拉奉在水溶液状态下 稳 定 性 较 差 ， 易 被 氧 化 、 对 高 热 不 稳 定 、 在碱性条件下稳定性差 、 在酸性条件下稳定性较好 7-8 。2.2.2 依 达 拉 奉注射液处方分析 田 边 三 菱 制 药2.1.1 依 达 拉 奉 的 制 备 方 法依达拉奉的制备方 法 比 较 成 熟 ， 有 很 多相关的文献报道 2-3 ， 最 常 见的制备方法是等摩尔的 乙酰乙酸乙酯和苯肼反应 制 得 依 达 拉 奉 ， 反应方程式如下 ：图 1依达拉奉反应方程式 28合理用药呵护公众健康China Licensed Pharmacist Aug. 2014，Vol. 11 No.8株式会社的依达拉奉 注射液处方组成包括依达拉 奉 、 亚 硫 酸 氢 钠 、 盐 酸 半 胱 氨 酸 、 氯 化 钠 、 氢 氧 化 钠 、 磷 酸 、 注 射 用 水 ， 同时进行充氮处理 1 。 在 日 本 上市的大部分依达拉奉注射液仿制产 品 ， 其 处 方 组成与原研产品基本一 致 。 也有部分仿制产品的 处方与原研产品不同 ， 如处方组成为依 达 拉 奉 、 亚 硫 酸 氢 钠 、 枸 橼 酸 、 氯 化 钠 、 氢 氧 化 钠 、 磷 酸 、 注 射 用 水 ， 同时进行充氮处理 9 。已上市的产品中 ， 处 方 中 大 多 添 加 了 抗 氧 剂 等 稳 定 剂 ， 如 亚 硫 酸 氢 钠 、 盐酸半胱氨酸等 ， 以 保证依达拉奉注射液中主成分的稳定性 。25 长 期 放 置稳定性试验中 ， 降 解 物 P1 由 0 时的 0.04%0.06 % 变 为 0.21%0.25 % （12 个 月 ） 、0.25% 0.28 % （36 个 月 ） ， 但其他杂质变化不明 显 ， 大 多 由 0.01% 0.04 %变 为 0.06% 0.08 %（36 个 月 ）， 均 能 够 维 持 在 0.1% 以 下 ； 在 40 /75% 相对湿度条件下进 行 的 6 个月加速稳定性试验 中 ， 可以检测到化合物 a 、 降 解 物 P1 、 降 解 物 P2 分 别 为 0 . 23 % 、 0 . 27 % 、 0 . 05 % ； 在影响因素试验中 ， 在 50 放 置 3 个月可以检测到降解物 P1 、 降 解 物 P2 分 别 为 0 . 43 % 、 0 . 09 % ， 在 2 000 lx/25 放置 4 周 ， 未 观 察 到 变 化 。以 上 信 息 显 示 ， 化 合 物 a 和 降 解 物 P1 是 依 达 拉奉注射液中含有的主要杂质 ，降 解 物 P2 为 苯 肼 ， 属于潜在遗传毒性杂质 ， 也需要进行研究和控制 。2.2.4 依 达 拉 奉 注射液日本药典标准的分析 在 依达拉奉注射液日本药 典 标 准 10 中 ， 采 用 两 套 高效 液 相 色 谱 法 （HPLC ） 系统进行有关物质检查 。系 统 一 采 用 C18 柱 （5 m ，4.6 mm 15 cm ） ，流 动 相 为 水 - 甲 醇 - 醋 酸 （100 100 1 ） ， 紫 外 检 测 器240 nm 检 测 ， 柱 温 约 40 ， 调整流速使主成分依 达拉奉保留时间为 4 min 左 右 ， 色谱图记录时间 为主成分峰保留时间的 7 倍 ， 采 用 主 成 分 自 身 对 照 法 ， 检出的杂质不得大于 0.2% 。系 统 二 采 用 C18 柱 （5 m ，4.6 mm 15 cm ） ， 流动相为稀醋酸 （1100 ） - 甲 醇 （3 1 ， 氨 水 溶 液 调 整 pH 值 为 5.5 ） ， 紫 外 检 测 器 240 nm 检 测 ， 柱 温 约 40 ， 调整流速使主成分依达拉 奉 保 留 时 间 为11 min 左 右 ， 色谱图记录时间为主成分峰保留时 间 的 2.5 倍 ， 采用主成分自身对照法 ， 相 对 保 留 时 间 0.3 的 杂 质 不 得 大 于 0.4% ， 相 对 保 留 时 间 0.4 的 杂 质 不 得 大 于 0.1% ， 其他杂质不得过大于 0.2% 。 在依达拉奉注射液日本药典标 准 中 ， 对 两 个特定杂质进行了单独控制 ， 由 于 仅 提 供 了 相 对 保 留 时 间 ， 目前还不能确定这两个特定杂质的种类 。2.2.3 原 研 厂 IF 文 件 中 的 杂 质 分 析在 田 边 三 菱制药株式会社的依达拉 奉 注 射 液 IF 文 件 1 中 ，较详细地讨论了产 品中可能含有的杂质 ， 如 表 1所 示 。表 1田边三菱制药株式会社依达拉奉注射液 IF 文 件 中 的 杂 质名 称结 构 式化合物 a降解物 P1降解物 P2降解物 P3根 据 表 1 杂 质 结 构 信 息 可 知 ， 化 合 物 a 为 依达拉奉二聚体杂质 ， 降 解 物 P1 和 降 解 物 P3 为 依 达拉奉与辅料发生相互作用而产生的 杂 质 ， 降 解物 P2 为 苯 肼 。同 时 ， 原 研 厂 IF 文件中提供的稳定 性 研 究 结 果 显 示 ， 依达拉奉注射液采用无色玻璃 安 瓿 包 装 ， 在不同条件下放置时 ， 杂 质有变化的趋势 。 如2.2.5 依达拉奉注射液降解杂 质 的 控 制综 合 以上 各 方 面 信 息 ， 由于依达拉奉在水溶 液 状 态 下 稳定 性 较 差 ， 需要在处方中添加抗氧剂等稳定剂 。 在依达拉奉注射液的生产和贮藏过程中 ， 可 能 产 生29中国执业药师综述二聚体等降解杂质 ， 同时依达拉奉 可 能 与 辅 料 亚硫 酸 氢 钠 、 盐酸半胱氨酸等发生相互 作 用 而 产 生 杂 质 。 另外作为潜在遗传毒性杂质的苯肼 ， 也 需 要 进 行 严 格 控 制 。对于特定杂质的研究和控制 ， 通 常 建 议 采 用 外 标 法 进 行 ， 杂质对照品可以外购 ， 也 可 以 自 行 制 备 。 对于外购的杂质对照品 ， 需要关注该对照品的 用 途 、 质 量 控 制 情 况 ， 在有效期内使用 。 对 于 自 行 制备的杂质对照品 ， 需要建立制备方法 ， 并 对 制 得 的对照品进行结构确证研究 、 纯 度 标 定 研 究 ， 并 建 立质控标准和有效期 。3 讨 论以上结合依达拉奉制备方法 、 依 达 拉 奉 稳 定 性 特 征 、 依达拉奉注射液处方 、 原 研 厂 IF 文 件 、 国 外药典等对依达拉奉 注射液的杂质谱分析进行了 讨 论 。 杂质控制是注 射剂质量控制的重要指标之 一 ， 而杂质谱分析是建立合理可行的 杂 质 检 测 方 法 的 基 础 。 作为注射剂生产者 ， 需要高度关注杂质 谱 分 析 工 作 ， 不断提升产品质量控制水平 。参 考 文 献 ：1PMDA. 注 30 mg. 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