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新一代肝癌标志物 甲胎蛋白异质体 AFP L3 北京 热景生物 2 目录 原发性肝癌及现行诊断甲胎蛋白异质体AFP L3 3 1 原发性肝癌及现行诊断 4 原发性肝癌 Primarycarcinomaoftheliver 肝恶性肿瘤 来源于肝脏上皮的肝部恶性肿瘤 分为肝细胞癌 HCC 90 胆管细胞癌 5 混合细胞癌 5 病因包括 病毒性肝炎和肝硬化 黄曲霉素 其他化学致癌物 饮水污染等 被称为 癌中之王 5 临床表现 原发性肝癌早期多无典型症状 临床就诊者多为中晚期病人右上腹疼痛rightupperquadrantpain消化道症状digestivetractsymptom出血倾向hemorrhagictendency黄疸 发热jaundiceandfebrile肝脏肿大livertumefaction转移与旁癌综合征metastasisandparacarcinomaSyndrome 6 肝癌所处阶段与预后之间的关系 强调肝癌的早期发现 早诊早治 7 8 现行诊断1 定位诊断 A 超声检查B 放射性核素肝扫描C CT检查D 选择性腹腔动脉或肝动脉造影检查E X线检查F 磁共振成像 MRI G 肝穿刺行针吸细胞学检查H 剖腹探查 A C B D E 9 现行诊断2 实验室辅助诊断 实验室辅助诊断 包括肝癌标志物 肝功能检测 病毒性肝炎 乙型与丙型 有关指标 免疫指标 其他细胞因子等 肝癌标志物 甲胎蛋白 AFP 测定血清酶等其他肿瘤标记物检查由于缺乏特异性 只作辅助诊断 如碱性磷酸酶 谷胺酰转肽酶 乳酸脱氢酶的某些同工异构酶谷氨酰转肽酶 GGT 及其同工酶 L 岩藻苷酶 AFU 异常凝血酶原 DCP 高尔基体蛋白73 GP73 5 核苷酸磷酸二酯酶 5 NPD 同工酶 醛缩酶同工酶A ALD A 和胎盘型谷胱甘肽S 转移酶 GST 等 还有异常凝血酶原 DCP 铁蛋白 FT 和酸性铁蛋白 AIF 等 部分HCC患者 可有癌胚抗原 CEA 和糖类抗原CA19 9等异常增高 10 甲胎蛋白 AFP AFP 一种糖蛋白 正常情况下 来自胚胎的肝细胞和卵黄囊 胎儿出生约两周后甲胎蛋白从血液中消失 正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20ug L 1956年发现 60年代末应用于临床 70年代用于自然人群与肝癌高危人群普查 至今被公认为优秀的肝癌诊断标记物而广泛使用 一般认为 AFP是HCC相对特异的肿瘤标志物 AFP持续升高是发生HCC的危险因素 AFP临床价值 a 目前较好的早期诊断方法 可在症状出现前6个月以上作出诊断 可与影像相互补充 b 为反映病情动态变化和评估疗效的敏感指标 c 可检查出根治切除术后亚临床期复发与转移 11 通过AFP诊断HCC的临床标准 原发性肝癌诊疗规范 2011版 对于AFP 400 g L超过1个月 或 200 g L持续2个月 排除妊娠 生殖腺胚胎癌和活动性肝病 应该高度怀疑肝癌中国抗癌协会肝癌专委会 2001年提出了原发性肝癌的临床与分期标准 AFP对原发性肝癌的诊断值定为400 g L 12 AFP的不足 近年来有报道指出 以上述标准诊断原发性肝癌 敏感性为39 64 特异性为76 91 对早期肝癌具有9 32 阳性预测值有近1 3的HCC患者AFP为阴性 敏感性不足 同时20 50 的慢性肝炎 肝硬化也合成AFP 特异性不足 这给HCC的诊断带来了困难 特异性不足 20 50 的慢性肝炎 肝硬化也合成AFP 2010版美国肝病研究学会 AASLD 指南已不再将AFP作为筛查指标但我国的HCC大多与HBV感染相关 与西方国家HCC致病因素不同 多为HCV 酒精和代谢性因素 结合国内随机研究 RCT 结果和实际情况 目前对HCC的常规监测筛查指标中继续保留AFP 13 2 甲胎蛋白异质体AFP L3 14 甲胎蛋白异质体 AFP L3 AFP是糖蛋白 其蛋白上含有不同糖链依据不同糖链与小扁豆凝集素LCA亲和力 可将总AFP分为AFP L1 AFP L2 AFP L3 其中 AFP L1来源于良性肝病细胞 LCA非结合型 AFP L2来源于孕妇 LCA弱结合型 AFP L3来源于癌变肝细胞 LCA强结合型 15 如何使用这一指标 a 分别测定样本中总AFP浓度及其异质体AFP L3的浓度b 计算AFP L3占总AFP比率 AFP L3 AFP 以下简写成AFP L3 简称异质体比率 c 以10 为Cutoff确认结果 阳性 AFP L3 10 阴性 AFP L3 10 16 美国 AFP L3已获得FDA批准 特异性不同的各类HCC诊断标志物 文献 RecentDevelopmentsintheFirstDetectionofHepatocellularCarcinomaJosephB LopezClinBiochemRevVol26 August2005I65 17 中国 AFP L3列入肝癌诊断标准 AFP L3已在1999年第四届全国肝癌学术会议上获得通过 确定为原发性肝癌临床诊断标准的肝癌标记物之一 认为是比单纯的AFP更为特异的原发性肝癌指标 18 中国 AFP L3进入 原发性肝癌诊疗规范 2011版 血清AFP及其异质体是诊断肝癌的重要指标和特异性最强的肿瘤标记物 国内常用于肝癌的普查 早期诊断 术后监测和随访 19 AFP L3的临床意义 鉴别良恶性肝病更好的肝癌早期预警指标肝癌预后的评价指标肿瘤恶性程度指标 20 一 鉴别良恶性肝病 国内外研究结果都一致表明 慢性肝病血清AFP L3百分比很低 而原发性肝癌很高 表明AFP L3测定非常有助于良 恶性肝病的鉴别诊断 应用AFP L3鉴别良 恶性肝病应注意以下题 1 AFP L3上升与血清AFP值无关 只要AFP阳性 AFP L3就可能高 2 大量研究表明血清AFP为20 50ng ml 而AFP L3呈阳性 从而使肝癌得到及早诊断 因此 AFP L3也非常适用于AFP低浓度阳性良 恶性肝病的鉴别诊断 3 约有35 45 小肝癌 直径 2cm 病人已显示AFP L3显著升高 因此 AFP L3对肝癌早期诊断很有价值 21 鉴别良恶性肝病 AFP L3 对HCC检测的特异性高达95 以上 日本医师会雄志 2004年第131卷第5期 研究一 HCC与良性肝病 22 AFP L3 AFP对肝病鉴别诊断的对比 检验科常规应用数据统计 AFPROC曲线 AFP L3 ROC曲线 数据来源 福建省福州传染病医院 研究三 综合性能对比 23 二 AFP L3 更优秀的早期预警指标 AFP L3随肝细胞癌变在血中升高 研究发现AFP L3升高较影像学检查阳性早出现3 28个月 AFP L3阳性预测肝癌发生的正确率为94 1 AFP L3升高的肝硬化病人大多数在3 18个月内被诊断为肝癌 2 另外 在影像学检查尚未发现肝癌特征性占位性病变时 对AFP低浓度阳性病例进行AFP L3检测可以早期预警肝癌发生 3 1 ChinMedSciJ 1992 7 4 191 195 2 NEnglJMed 1993 328 25 1802 1806 3 Hepatology 1995 22 3 802 807 24 研究一 半年及三年随访各1例 哈尔滨铁路中心医院 25 解放军第302医院 该研究揭示AFP L3与AFP值无相关性 可以作为一个独立肝细胞癌诊断因素 AFP L3 对于AFP阳性时良 恶性肝病的鉴别及肝癌的早期预警诊断具有重要意义 研究三 临床随访实例 26 三 AFP L3 肝癌预后评价指标 肝癌术后AFP L3阳性组平均生存期显著低于阴性组 术后AFP L3仍很高的患者其肝癌多灶性复发或门静脉瘤栓发生率明显高于AFP L3正常者 AFP L3正常的患者存活率高于AFP L3升高的患者 大量的研究报道认为AFP L3是恶性生物学的良好指标 可作为一个独立的肝癌预后标志物指标 27 总生存率比较图 术后AFP L3 阴性32例HCC患者 术后AFP L3 阳性23例HCC患者 P 0 0006 28 上海东方肝胆医院AnnSurgOncol 2011 AFP L3 总AFP高比值 是病理侵犯性的一个指标 与那些术前阴性患者相比 术前AFP L3阳性患者复发时间显著较早复发时间中位数为22 0 2 4个月vs45 0 6 9个月 29 手术后 与AFP L3持续阴性结果的患者相比 AFP L3持续阳性或阴性转阳性结果患者中 复发人数显著较多 尤其是远处转移 如果术前AFP L3阳性和术后AFP L3持续阳性或阴性转阳性 那么我们可以预测肿瘤行为更加具有侵犯性的 肿瘤复发率较高 以及临床结果较差 HCC患者的AFP L3 总AFP比值越高 就越需要积极的治疗及密切随访 31 四 AFP L3是肿瘤的恶性程度指标 影像学研究发现AFP L3 阳性的HCC通常有丰富的肝动脉血液供给 肿瘤的倍增时间较短 32 AFP L3 的检测决定于AFP L3的分离水平 传统异质体测定方法对于技术的要求较高 操作繁琐 试剂昂贵 主要采用亲合电泳显影技术热景生物在科技部资金的支持下 独家研发出捕获AFP L3的专利技术 33 检测原理 34 亲和层析吸附离心法分离AFP L3 原理示意图 35 2012 卫生部 艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治 专项 传染病现场快速诊断试剂的研制 课题2010 科技部 863 计划重大项目 体外诊断技术产品开发 课题2007 2013 科技部科技型中小企业创新基金 含北京市配套课题 2012 北京科委 首都十大危险疾病 肝癌早期诊断标志物研究 课题 产品研发及产业化进程中来自国家的大力支持 36 AFP L3 已在全国范围内快速推广应用 AFP L3 部分临床应用单位 三甲