引物稀释.doc_第1页
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1 OligoDNA是以OD260为单位来计量的,是指在1ml体积1cm光程标准比色皿中,260nm波长下吸光度为1A260nm的Oligo溶液定义为1OD260单位.根据此定义,1OD260单位相当于33g的OligoDNA,您可根据此数据和您的OligoDNA分子量计算得到摩尔数,以此计算不同摩尔浓度的溶液.2 引物合成公司提供的序列报告中分子量计算公式如下：MW=(A碱基数312)+(C碱基数288)+(G碱基数328)+(T碱基数303)-61 例如 ：TGGGCGGCGGTGGTGTTACGTMW=（1312）+（3288）+（11328）+（6303）-61=65413. OligoDNA的分子量还可以用以下近似方法计算：OligoDNA中的每个脱氧核苷酸碱基的平均分子量近似为324.5,则一条OligoDNA的分子量=碱基数324.5.例如,您得到一管标为1OD260nm的20个碱基OligoDNA分子量=20324.5=6490质量数=133=33g摩尔数=33/6490=0.0051mol3 引物在出厂时都标有1OD 相当于多少mol 的计算结果,进行稀释时的引物加水量可以按以下公式计算：稀释成100pmol/l时：1OD引物的加水量（l）=1OD相当于mol 数10000例如：您拿到的引物DNA合成报告单上标有1OD0.0035mol,包装量是1OD/管,如果您希望将引物浓度定为100pmol/l（mol/L）,那么只需用35l无核酸酶的双蒸水将1OD的引物干粉溶解即可4 由于OligoDNA呈很轻的干膜状附在管壁上,打开时极易散失,所以打开管子前请先离心,然后再慢慢打开管盖,溶解时请加足量水后盖上管盖,充分上下振荡5-10分钟.5 需对OligoDNA作电泳分析,必须采用含7M尿素的聚丙烯酰胺凝胶电泳和1倍TBE Buffer,琼脂糖电泳不适于OligoDNA电泳,另外为防止加样时的扩散和二级结构影响,样品上样前必须加饱和尿素处理再上样.6 OligoDNA的5端和3端均为羟基,若需磷酸基团的则要另外再处理或直接在合成时于5和3端标上磷酸.7 由于溴化乙锭对单链寡聚DNA的染色效果与DNA的结构和长度关系密切,相等OD值的不同OligoDNA样品染色后深浅可大不相同,若电泳后EB染色不出现条带或出现的条带很浅,您可将电泳凝胶于荧光板上再在紫外灯下观察,往往会看到明亮的绿色荧光背景下清晰的黑色条带；若无此条件,也可用紫外分光光计度对OD值进行检测.8 干粉状态的
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