过敏原检测.ppt

过敏原血清学检测 过敏原概念 过敏 是机体对某些药物或外界刺激的感受性不正常地增高的现象 在正常的情况下 身体会制造抗体用来保护身体不受疾病的侵害 但过敏者的身体却会将正常无害的物质误认为是有害的东西 产生抗体 这种物质就成为一种 过敏原 过敏反应原理 过敏反应的原理 通俗地说 就是当过敏原第一次进入人体后 产生了能够引起过敏反应的物质 当过敏原第二次进入人体后 这些物质就发生病理性的免疫反应 产生各种过敏的症状 所以说 往往第一次接触到的物质不会过敏 反复的接触后 可出现过敏性症状 反复接触后 症状一般会逐渐加重 过敏反应的类型 过敏 变应性 分为4种不同的种类 其中最常见的是I型和IV型 I型有时也被称为 特应性 或者 速发型变应性 例如 人体在被昆虫蜇伤后几秒钟就会作出反应 动物毛发过敏和花粉过敏在几分钟内就有反应 食物过敏的时间则在30分钟以内 与此相反 IV型过敏的反应则要慢得多 症状要在一天或者几天之后才会出现 例如装饰物过敏和许多类型的职业过敏等 因此 人们把其称为 迟发型变应性 TypeITypeIITypeIIITypeIV 早期反应IgE 介导肥大细胞脱核数分钟内花粉热 细胞毒反应IgG IgM介导血细胞的破坏数小时到一天药物过敏 免疫复合物形成持续产生IgG IgM免疫复合物数小时到一天免疫复合物病 细胞免疫反应T 细胞介导反应12小时到数周接触过敏反应 Ni 4种过敏反应类型 超敏反应 I型过敏反应 幼稚T细胞和B细胞与过敏原接触后活化若活化的TH2细胞与相应的活化T细胞接触后 将刺激产生特异性的IgE抗体IgE由浆细胞 B细胞 释放 然后结合到肥大细胞或嗜碱性粒细胞表面当再次接触到过敏原后 细胞膜表面的IgE抗体通过过敏原相互连接 并启动释放相关介质 组胺 最终导致典型过敏反应的产生 过敏原种类 引起过敏反应的抗原物质常见的有2000 3000种 它们通过吸入 食入 注射或接触等方式使机体产生过敏现象 吸入过敏原 空气中的吸入过敏原 例如 植物花粉 动物毛发 室内灰尘或虫螨等 食物过敏原 通过胃肠道吸收 例如 鱼 肉 蛋 坚果和蔬菜等 接触过敏原 皮肤接触 例如 金属饰品 化妆品和生活日用品等 输注过敏原 直接输入体内 例如 昆虫或动物的毒液 注射类药品等 过敏原检测 预防过敏 关键是寻找过敏原 过敏原一旦明确 应立即停止继续接触过敏原 过敏反应通常自然消失 过敏原的检查主要分体内检测和体外检测两种 体内检测 皮内试验 通过体内注射过敏原 经过一定时间后观察皮肤的反应 根据皮肤反应的情况确定是否对这种过敏原过敏 点刺试验 点刺试验可视为一种特殊的皮内试验 其方法是先将点刺皮试液滴在皮肤上 然后用点刺针穿过液滴 刺入皮内 皮肤的点刺液仅为皮内试验的万分之一 安全性较高 由于皮损小 患者无痛苦 斑贴试验 斑贴试验主要用于检测接触性过敏原 具体方法是将试剂贴在皮肤上观察一段时间后 根据皮肤对接触物的反应判断是否对这种物质过敏 斑贴试验是检测面部和手部等部位过敏原有效的方法之一 体外检测 血清学IgE抗体检测 针对I型变态反应检测总IgE抗体及特异性IgE抗体 可进行众多疾病抗体的筛选检测 系统方法可信 特异性与皮试相近 并与常规体外单项过敏原检测试验结果相符 对患者来说不存在风险尤其适合5岁以下儿童 可避免强烈的皮肤反应与其它皮肤病区别不需附加其它药物适合无法进行皮试的食物过敏原的检查 体外检测优势 步骤1 总IgEELISA 步骤2 特异性IgEEUROLINE 检测IgE 总IgE超出参考范围大多数是由于过敏反应导致例外 寄生虫病 免疫抑制 HIV 重度烧伤临床相关特异性IgE结果与总IgE相关的特异性IgE浓度越高 患者临床过敏反应的可能性就越大 总IgEELISA 结果解释 特异性IgE总IgE 特异性IgE5IU ml kU l 总IgE200IU ml 患者1 特异性IgE5IU ml kU l 总IgE25IU ml 患者2 总IgEELISA 结果解释举例 实验操作简单快捷低检出限 1IU ml 高重复性 批内实验 5 通过4份标准品计算定量结果 总IgEELISA检测 特异性IgE检测 简便和快捷的实验操作仅需少量样本 过夜温育 结果基于广泛应用的EAST分级系统与PharmaciaCAP具有良好的相关性自动温育通过EUROLineScan程序实现结果的自动判读 颜色反应 色原 底物 膜条 抗原提取物 60min二抗反应 10min底物温育 AP标记二抗 清洗3x5min 清洗3x5min 自动化判读或肉眼观察 60min未稀释 过夜1 11稀释 特异性IgEEUROLINE血清温育 温育 EUROLINE检测系统 结果判读 EUROLineScan 特异性IgE欧蒙印迹法自动化 CCD是 CrossreactiveCarbohydrateDeterminants 交叉反应性碳水化合物决定子 的英文缩写 该结构为结合于糖蛋白N末端的多聚糖 依据糖基化作用的不同而产生不同的结构 与总IgE相关的特异性IgE浓度越高 患者临床过敏反应的可能性就越大 CCD条带 CCDs存在于多种植物性或动物源性的过敏原中 由于结构的相似性导致一些独特的交叉反应出现 CCDs在自然界中的存在 大部分糖蛋白仅含有含有一个IgE结合的多聚糖 因此无法促进结合有IgE抗体的肥大细胞表面受体形成二聚体化 进而无法活化肥大细胞发生脱核及释放组胺的作用 因此对于仅为抗CCDIgE抗体阳性的患者而言往往无临床症状的表现 抗CCDIgE结果的临床价值 CCD条带阳性 当体外实验结果与临床症状或皮试结果不符的情况下 当某一患者出现多