张树嘉申报表 丁颖杯复赛

附件2序号： 编码： 2010年“丁颖杯”课外学术科技作品竞赛作品申报书 作品名称：鸡-防御素AvBD-5真核载体构建及免疫活性的研究 学院名称： 生命科学学院 申报者姓名 （集体名称）： 张树嘉 林欣欣 王 柳 类别：自然科学类学术论文 哲学社会科学类社会调查报告和学术论文 科技发明制作A类 科技发明制作B类说 明1.申报者应在认真阅读此说明各项内容后按要求详细填写。2申报者在填写申报作品情况时只需根据个人项目或集体项目填写A1或A2表，根据作品类别（自然科学类学术论文、哲学社会科学类社会调查报告和学术论文、科技发明制作）分别填写B1、B2或B3表。所有申报者可根据情况填写C表。3.表内项目填写时一律用钢笔或打印，字迹要端正、清楚，此申报书可复制。4.序号、编码由竞赛组委会填写。5学术论文、社会调查报告及所附的有关材料必须是中文（若是外文，请附中文本），请以4号楷体打印在A4纸上，附于申报书后，字数在8000字左右（文章版面尺寸14.522cm）。A2申报者情况（集体项目）说明：1必须由申报者本人按要求填写；2申报者代表必须是作者中学历最高者，其余作者按学历高低排列；3本表中的学籍管理部门签章视为申报者情况的确认。申报者代表情况姓名张树嘉性别男出生年月1988.08学院生命科学学院系别、专业、年级07级生物技术学历本科学制4年制入学时间2007.09作品名称鸡-防御素AvBD-5真核载体构建及免疫活性的研究毕业论文题目猪流行性腹泻病毒主要抗原位点的克隆和表达通讯地址广州市天河区华南农业大学生命科学学院邮政编码510642办公电话常住地通讯地址广州市天河区华南农业大学启林南区32-407邮政编码510642住宅电他作者情况姓 名性别年龄学历所在单位林欣欣男23本科华南农业大学生命科学学院王 柳女23本科华南农业大学生命科学学院资格认定学院学籍管理部门意见以上作者是否为2011年7月1日前正式注册在校的全日制非成人教育、非在职的高等学校中国籍专科生、本科生、硕士研究生或博士研究生。是 否 （部门签章）年 月 日院系负责人或导师意见本作品是否为课外学术科技或社会实践活动成果是 否负责人签名：年 月 日B1申报作品情况（自然科学类学术论文）说明：1必须由申报者本人填写；2本部分中的科研管理部门签章视为对申报者所填内容的确认；3作品分类请按作品的学术方向或所涉及的主要学科领域填写；4硕士研究生、博士研究生作品不在此列。作品全称鸡-防御素AvBD-5真核载体构建及免疫活性的研究作品分类（D） A机械与控制（包括机械、仪器仪表、自动化控 制、工程、交通、建筑等） B信息技术（包括计算机、电信、通讯、电子等） C数理（包括数学、物理、地球与空间科学等） D生命科学（包括生物、农学、药学、医学、健 康、卫生、食品等） E能源化工（包括能源、材料、石油、化学、化 工、生态、环保等）作品撰写的目的和基本思路本次课题研究鸡肠炎沙门氏菌亚单位抗原与AvBD-5的免疫作用及DNA疫苗研究。（1）研究发展一种新型预防伤寒沙门氏菌感染的DNA药物。（2）分别设计AvBD-5 DNA疫苗和SEp9 DNA疫苗，单独或联合的体液免疫、粘膜免疫方式导入到小鼠体内，测定AvBD-5 DNA疫苗和SEp9 DNA疫苗的免疫效应。作品的科学性、先进性及独特之处（1） 前人对鸡防御素的研究主要集中于鸡防御素的基本性质和体外实验，本研究首次将鸡防御素AvBD-5以DNA疫苗的形式在鸡体内表达，检测AvBD-5的表达情况和免疫效应。（2）将SEp9抗原以DNA疫苗的形式导入鸡体内，检测SEp9抗原的表达情况和抗体的水平。（3）通过对比pVAX1-SEp9和pVAX1-SEp9-AvBD5，评测AvBD-5在小鼠体内能诱导免疫应答。由此判断AvBD-5能协助抗原SEp9刺激小鼠机体产生免疫作用，增强DNA疫苗的免疫效果，可作为一种有效的新型免疫增强剂应用于DNA疫苗。作品的实际应用价值和现实意义本课题研究旨在发展和完善一种新型高效的预防禽肠炎沙门氏菌感染的DNA疫苗，以往研究发现鸡-防御素AvBD-5在胃肠道病原体感染的宿主防御中起着极其重要的作用，对鸡沙门氏菌有强的杀菌效果，并且也是鸡体内原有的一种免疫物质；同时，SEp9作为肠炎沙门氏菌鞭毛抗原FliC最主要的抗原位点，经研究证明SEp9抗原是一个有效的抗原，能有效的抑制SE在鸡肠道的定殖，其作为一个亚单位疫苗，在鸡SE感染后的连续免疫反应和抗原递呈中都具有重要的作用。分别设计AvBD-5 DNA疫苗和SEp9 DNA疫苗，单独或联合的体液免疫、粘膜免疫方式导入到小鼠体内，初步测定AvBD-5 DNA疫苗和SEp9 DNA疫苗的免疫效应。学术论文文摘AvBD是禽类先天内源免疫防御系统重要组成部分。本文构建了3个重组真核表达载体： pVAX1-AvBD5、pVAX1-SEp9和共表达载体pVAX1-SEp9-AvBD5。将3个重组质粒作为DNA疫苗免疫小鼠。用ELISA检测小鼠血清中特异性IgG抗体水平，实时荧光定量PCR法检测肠组织中MCP-1基因表达量差异；分离小鼠淋巴细胞，用流式细胞术分析T淋巴细胞亚群含量变化。在首免后第42天用肠炎沙门氏菌对小鼠攻毒，检测免疫保护效率。结果表明pVAX1-SEp9、pVAX1-SEp9-AvBD5均能在小鼠体内刺激免疫应答，产生抗SEp9的特异性抗体，pVAX1-SEp9-AvBD5组的IgG抗体OD450nm与对照组相比最高，达到0.33，同时能诱导肠组织产生MCP-1，引起T淋巴细胞亚群增殖，与对照相比，最高分别为63.17%、43.11%、20.57%。攻毒后pVAX1-SEp9组和pVAX1-SEp9-AvBD5组中小鼠新鲜粪便中SE菌落数与对照组相比明显下降，pVAX1-SEp9-AvBD5组在攻毒后的第4天，粪便中仅含SE 22.90CFU/g。本研究证明了鸡AvBD-5能有效刺激鸡免疫防御系统，增加机体特异性免疫应答能力，提高小鼠对SE感染的保护效率。 作品在何时、何地、何种机构举行的会议上或报刊上发表及所获奖励鉴定结果请提供对于理解、审查、评价所申报作品具有参考价值的现有技术及技术文献的检索目录申报材料清单（申报论文一篇，相关资料名称及数量）科研管理部门签章 年 月 日C.当前国内外同类课题研究水平概述说明：1.申报者可根据作品类别和情况填写； 2.填写此栏有助于评审。禽类是众多传染性病原体重要的携带者，如沙门氏菌、禽流感等。这些病原体不仅是造成禽类产品污染的原因之一，同时也严重威胁人类的健康。人类病原体，如沙门氏菌和空肠弯曲杆菌，可以定居在鸡肠道而不出现临床症状，但这是引起人食物中毒的主要原因。禽类也是禽流感A病毒亚型（如H5N1）重要的携带者，禽流感对动物和人类健康造成巨大威胁，而且在亚洲有规律地爆发。因此，保证家禽健康，最大潜力地发挥其先天性免疫功能，对人类公共卫生，提高禽类的生产性能与禽产品安全性等都有重要意义。多年来，饲用抗生素被广泛地用于降低禽类发病率和维持健康。然而，长期使用抗生素，尤其是人类常用抗生素会导致抗生素在禽产品中残留及细菌耐药性的产生，并通过食物链威胁人类健康。因此，生产者们迫切需要一种既有效又有利于环保的新方法来控制禽类疾病。在众多的抗生素替代剂中，抗菌肽由于其分布广泛、具有广谱抗菌活性、抗病毒和免疫增强等作用，并且对机体无毒害、无残留等，越来越受到关注。防御素(defensin)是一类富含半胱氨酸的阳离子抗菌肽的大家族，其主要分子特征为含有由6个半胱氨酸残基组成的3个二硫键。防御素为参与机体最初防御活动的小分子多肽，是一类极为重要的内源性抗菌肽，它广泛存在于动植物及昆虫体内，具有较强的广谱抗菌活性，能有效地杀灭细菌、真菌、螺旋体和囊膜病毒，在机体的先天性免疫及获得性免疫中均发挥着重要的作用。动物体内的防御素是动物内在防御系统最大的成员。防御素广泛表达于动物的组织细胞中，具有广谱的抗菌、抗病毒活性和非特异的细胞毒性作用。同时，动物防御素还可以调节体内适应性免疫及其他抗微生物免疫活性。目前，已从脊椎动物体内分离出许多防御素，根据二硫键位置的不同及核苷酸、保守氨基酸的结构序列可分为三大类，-防御素、-防御素和-防御素。目前在家禽中发现的防御素都属于防御素。鸡的染色体共编码14种防御素，被称为AvBD1-14(chicken avian beta-defensin，AvBD)，它成簇地排列在第三号染色体3q3.5-q3.7上，长度为86kb。这些小肽含有59-104个氨基酸残基不等，它们都具有典型防御素的特征。鸡防御素作为鸡的重要天然免疫屏障，广泛分布于鸡的肝脏、气管、肺脏、肾脏、睾丸、卵巢、血管、输卵管、子宫、脑、胸腺、发氏囊、肌肉、皮肤、骨髓、心脏等器官的组织中，在鸡的先天性免疫和获得性免疫中都具有重要的作用。沙门氏菌是人和各种动物的传染性病原因子。肠炎沙门氏菌属于无宿主特异性而有侵害性的血清型，可由人传给动物也可由动物传给人，即所谓“人畜共患病原体”。肠炎沙门氏菌不仅能引起家禽发病死亡造成严重的经济损失，而且感染家禽的产品作为肠炎沙门氏菌的携带者，还严重危害人类健康。日、美等发达国家发生的食物中毒事件中40%-80%是由禽沙门氏菌引起的，其中主要病原为肠炎沙门氏菌，每年在美国由于食物传播沙门氏菌感染致死的超过600人，140万人染病，每年都要花费4.64亿到23亿美金用于治疗食物传播沙门氏菌感染。由肠炎沙门氏菌引起人的急性胃肠炎（食物中毒），在世界各国有增加的趋势，已成为国际公共卫生的一个重要课题。鸡肠炎沙门氏菌感染所引起的发病和死亡一般发生在2周龄以内的雏鸡，肉鸡的发病率在2日龄以内为2%，6日龄为20%，死亡率为6%。病雏精神不振和食欲丧失，身体蜷缩，羽毛无光,肛门周围附着粪便。1周龄以内死亡率较高，但很少引起1月龄以上鸡的死亡。成年鸡对肠炎沙门氏菌感染的反应不同于雏鸡，感染后无明显的临床症状,产蛋量也没大的影响，呈隐性感染而不被人们重视。肠炎沙门氏菌最主要来源于禽源性食物，主要是鸡蛋，蛋制品以及鸡肉。目前，国际上控制家禽沙门氏菌感染，除了采取严格的生物安全措施、加强饲养管理、卫生和消毒、种鸡群执行沙门氏菌净化外，还提倡用疫苗控制。肠炎沙门氏菌的感染循环是：已感染的母鸡生下被感染的蛋，从蛋中孵出被感染了的雏鸡，该雏鸡能终生保持感染。因此，使用疫苗对禽类进行免疫，同时监测这些措施的实施效果，是目前消除禽肉和鸡蛋中沙门氏菌的有效途径，可阻止产蛋鸡群感染肠炎沙门氏菌、阻止感染肠炎沙门氏菌的鸡进入产蛋鸡群，并使鸡蛋保持在最清洁的状态。沙门菌属中除鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌外，大多数沙门菌周身有鞭毛。鞭毛的直径约520nm，长度比菌体长几倍，约520m。鞭毛的化学组分主要是蛋白质，只含有少量的多糖或脂类。鞭毛蛋白占细胞蛋白质的2%。它是一种纤维弹性蛋白，与动物的肌动蛋白相似，具有收缩性，并有较好的抗原性。沙门菌具有复杂的抗原结构，一般分为菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原、表面（Vi/M）抗原三种。O、H抗原是其主要抗原，构成绝大部分沙门菌血清型鉴定的物质基础。H抗原能刺激机体产生高效价凝集抗体，并与相应的抗体呈絮状凝集。H抗原有两种：第一相：具有较高的特异性，又称特异相，用小写英文字母a，b，cz表示；第二相：特异性较低，又称非特异相，用阿拉伯数字1，2，3，4表示。编码沙门菌相和相鞭毛蛋白的基因分别为fliC或fljB，基因序列两端为N、C端保守区，中间为可变区。不同沙门菌株鞭毛基因的可变区中不同的碱基序列编码着不同氨基酸序列，可形成不同的鞭毛蛋白抗原表位，故中间可变区被称为抗原决定区。利用商品化SE菌苗作为疫苗用来作为控制SE污染的一种方法。然而，SE菌苗存在的内毒素可能会对鸡产生潜在的危害。因此，一个更好的SE疫苗如SE亚单位疫苗被提出。已经报道了SE鞭毛抗原可以作为疫苗的巨大潜力。这主要是由于鞭毛抗原对淋巴细胞有促进有丝分裂的作用。SE鞭毛抗原由很多组分组成，最主要的成分是FliC抗原，而FliC抗原最主要的抗原位点是g.m.位点，也叫SEp9 (Salmonella Enteritidis FliC-specific 9KDa polypeptide,SEp9)。Yukiko Toyota-Hanatani等人（2009）用SEp9和弗氏完全佐剂联合接种鸡，然后口服攻毒SE，与对照相比，SEp9的SE菌数量显著降低，证明了SEp9抗原是一个有效的抗原，能有效的抑制SE在鸡肠道的定殖。Naoe Mizumoto等人（2003）将原核表达纯化的SEp9抗原联合ELISA法检测SE疫苗SEp9特异性抗体水平，结果在喷雾接种的幼鸡检测到高SEp9特异性抗体，显示了SEp9联合ELISA法可以对鸡群中SE疫苗的状态进行测定。Yukiko Toyota-Hanatani等人（2008）从组织学上证明了SEp9可以成为SE亚单位疫苗的候选抗原。注射SEp9后，鸡体内能产生特异性抗体，且在注射部位周围能引起血管淋巴细胞的积聚。他们的研究显示：SEp9作为一个亚单位疫苗，在鸡SE感染后的连续免疫反应和抗原递呈中都具有重要的作用。D.推荐者情况及对作品的说明说明：1由推荐者本人填写； 2推荐者必须具有高级专业技术职称，并是与