《食品安全地方标准 植物源性食品中α-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮的测定 液相色谱-质谱质谱法》 标准文本

 ICS 备案号：吉林省食品安全地方标准DBS22DBS22/032 2012食品安全地方标准  植物源性食品中 -玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮的测定 液相色谱-质谱/质谱法Local food safety standardDetermination of -zearalenol and zearalenone in foodstuffs of plant originLC-MS/MS method(送审稿)2012-XX-XX 发布  2012-XX-XXXX 实施吉 林 省 卫 生 厅  发 布DBS/ 0XX20XX1前 言本标准按照 GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写和GB/T 20001.4-2001标准编写规则 第4部分: 化学分析方法给出的规则起草。本标准由吉林省卫生厅提出并归口。本标准起草单位：吉林省农业科学院。本标准起草人：宋志峰、魏春雁、蔡玉红、张之鑫、孟繁磊、何智勇、牛红红、樊慧梅、仇建飞、武巍、马虹、王巍巍、杨建、张国辉、蔡红梅、刘笑笑。附录A、B为资料性附录。DBS/ 0XX20XX2食品安全地方标准植物源性食品中 -玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮的测定液相色谱-串联质谱法1 范围本标准规定了植物源性食品中-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮液相色谱-质谱/质谱              的测定方法。本标准适用于成品粮及其加工制品（面粉、淀粉等）、食用植物油脂及其加工制品等中-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮的定性确证和定量测定。本标准方法的检出限见附录A 中表A.1 。2 规范性引用文件下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定SN/T 0800.1 进出口粮油、饲料检验  抽样和制样方法GB/T 5524 植物油脂检验  取样、扦样法3  原理试料中-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮经三氯甲烷提取，采用碱性水溶液萃取并调至中性后，再经二氯甲烷萃取后，使用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法量。4  试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T  6682规定的一级水。4.1 三氯甲烷（CHCl 3） 。4.2 二氯甲烷（CH 2Cl2） 。4.3 无水硫酸钠（Na 2SO4） 。4.4 氯化钠（NaCl） 。4.5 氢氧化钠（NaOH） 。4.6 一水合柠檬酸（C 6H8O7H2O） 。DBS/ 0XX20XX34.7 甲醇（CH 3OH） ，色谱纯。4.8 乙腈（C 2H3N） ，色谱纯。4.9 标准品：-玉米赤霉烯醇（C 18H24O5，CAS：36455-72-8） 、玉米赤霉烯酮（C 18H22O5,CAS：17924-92-4） ，纯度均大于 99%。4.10 饱和氯化钠溶液：称取 36 g 氯化钠（4.4）溶于 100 mL 水中。4.11 2 %氢氧化钠溶液：称取 20 g 氢氧化钠（4.5）用水溶解并定溶至 1 L。4.12 106 g/L 柠檬酸溶液：称取 106 g 一水合柠檬酸（4.6）用水溶解并定溶至 1 L。4.13 乙腈-水溶液（1+1 ，体积比）：取 500 mL 乙腈（4.8）和 500 mL 水混合。4.14 甲醇-水溶液（1+1 ，体积比）：取 500 mL 甲醇（4.7）和 500 mL 水混合。4.15 标准储备液：分别准确称取 -玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮标准物质（4.9）适量（精确至 0.000 1 g）用乙腈溶解，配制成浓度为 1 000 mg/L 的标准储备液。0 4 避光保存，有效期为 6 个月。4.16 标准中间液：准确量取标准储备液 1 mL 于 100 mL 容量瓶中，用乙腈- 水溶液（4.13）定容至刻度，混匀备用。0 4 避光保存，有效期为 1 个月。 。4.17 混合标准工作液：分别准确量取 -玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮标准储备液适量，于一组容量瓶中，用乙腈-水溶液（4.13）稀释至刻度，配制成浓度为 0.500 ng/mL、1.00 ng/mL、5.00 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL 的标准工作液。此溶液现用现配。4.18 滤膜：孔径为 0.22 m，有机相型。5 仪器与设备5.1 液相色谱-质谱/质谱仪。5.2 分析天平：感量0.0001 g 和0.01 g。5.3 旋转蒸发仪。5.4 氮吹仪。5.5 振荡提取器。5.6 漩涡混合器。5.7 分液漏斗：125 mL。5.8 实验室常用玻璃器皿。6 分析步骤6.1 试样制备与保存根据不同类型的样品，分别按 SN/T 0800.1 和 GB/T 5524 的要求制备试样。固体样品粉碎后全部通过 0.425 mm 的标准网筛。6.2 提取称取试料 10 g（精确至 0.01 g）于 100 mL 具塞锥形瓶中。固体样品加入 50 mL 三氯甲烷（4.1） ，植物油脂样品加入 35 mL 三氯甲烷（4.1） ，盖紧塞子，于振荡提取器上（5.5）振荡提取 30 min。6.3净化使用中速滤纸过滤提取液（7.1）并用三氯甲烷定容至 50 mL(V1)。吸取 25.0 mL 提取液( V2)至125 mL 分液漏斗（5.7）中，加入 5 mL 饱和氯化钠溶液（4.10），混匀，再加入 25 mL 2%氢氧化钠（4.11）溶液，剧烈振荡 1 min，静置分层，弃去三氯甲烷层。再用 25 mL 三氯甲烷重复萃取一次，弃去三氯甲烷层。加入 25 mL 柠檬酸溶液（4.12），混匀。再加入 25 mL 二氯甲烷（4.2），剧烈振荡DBS/ 0XX20XX41 min，静置分层。将二氯甲烷层溶液通过装有 5 g 无水硫酸钠（4.3）的漏斗。再用 25 mL 二氯甲烷重复萃取一次，操作同上。另用 5 mL 二氯甲烷冲洗无水硫酸钠，合并二氯甲烷萃取液至浓缩瓶中，40 以下于旋转蒸发仪上浓缩至近干。残留物用 5 mL 二氯甲烷溶解并转移至玻璃离心管中，于 40 以下用微弱氮气吹干，残留物用 1.0 ml 乙腈-水溶液（4.12）溶解，于漩涡混合器上（5.6）漩涡混匀后，过 0.22 m 有机滤膜（4.18），供仪器测定。6.4 空白试验除不加试料外，采用完全相同的分析步骤。6.4测定6.4.1 仪器参考条件6.4.1.1 色谱参考条件色谱参考条件如下：a） 色谱柱：C18 色谱柱，100  mm2.1 mm，粒径 1.8 m，或性能相当者；b） 柱温：40 ；c） 流动相、流速及洗脱梯度：流速 0.3 mL/min；洗脱梯度见表 1；d） 进样量：30 L。表 1 流动相、流速及洗脱梯度时间/min 流速/ （mL/min） A 相：水/% B 相：乙腈/%0.0 0.3 50 505.0 0.3 25 755.1 0.3 0 10010.1 0.3 0 10010.2 0.3 100 018.1 0.3 100 06.4.1.2 质谱参考条件质谱参考条件如下：a）电离方式：电喷雾电离；b）扫描方式：负离子扫描；c）检测方式：多反应监测（MRM） ；d）离子源温度：350 ；e）干燥气流量：10 L/min ；f）监测离子、去簇电压及碰撞能量：见表 2。表 2 -玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮监测离子、去簇电压及碰撞能量化合物名称 监测离子 去簇电压 碰撞能量-玉米赤霉烯醇 319/275a；319/160 -160 -15；-30玉米赤霉烯酮 317/175a；317/131 -150 -25；-25a 定量离子6.4.2 定性分析按照 7.4.1 仪器参考条件对标准溶液和样品进行测定，如果样品的色谱峰与标准物质色谱峰保留时间偏差5 %范围内、定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准溶液相对丰度偏差在允许范围内（相DBS/ 0XX20XX5对丰度偏差不超过表 3 的规定） ，则可判定样品中存在相应的测定物。标准溶液的 MRM 色谱图见附录A。表 3 定性离子相对丰度最大允许偏差                      单位：%相对离子丰度 50 2050 1020 10最大允许偏差 20 25 30 506.4.3 定量测定按浓度由小到大的顺序，依次分析混合标准工作液（4.17）按照 7.4.1 仪器参考条件进行测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。同时按相同条件对样品测定液进行测定，利用标准曲线对样品中被测组分按照外标法进行定量。高浓度样品应适当稀释，保证被测组分在标准曲线范围内。7 结果计算7.1试料中分析物的含量，按式（1）或用仪器数据处理机计算。(1)231VmcXii式中：X i 试料中被测组分的含量，  单位为毫克每千克（mg/kg）；ci 从标准曲线上得到的试样溶液中分析物的含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V1 提取液定容的体积，单位为毫升（mL）；V2 吸取三氯甲烷提取液的体积，单位为毫升（mL）；V3 试样溶液最终体积，单位为毫升（mL）；m   试料的质量，单位为克（ g）。7.2 平行测定结果用算术平均值表示，数值修约按照GB/T 8170执行，保留两位有效数字。8  回收率及精密度回收率及精密度测定数据见附录B。8.1 重复性在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的15%。8.2 再现性在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的20%。9 检出限和定量限以样品取样量为10 g，确定-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮检出限分别为0.002 mg/kg和0.001 mg/kg、定量限分别为0.006 mg/kg和0.003 mg/kg。DBS/ 0XX20XX6DBS/ 0XX20XX7A A附录A（资料性附录）标准溶液多反应监测（MRM）色谱图2x1000.050.10.150.20.250.30.350.40.450.50.550.60.650.70.750.80.850.90.95- TIC MRM (* -> *) 0.5-1.d 23.55912.330Counts (%) vs. Acquisition Time (min)0.51 1.52 2.53 3.54 4.55 5.56 6.57 7.58 8.59 9.510图 A.1 0.5 ng/mL 标准溶液 MRM 色谱图1-玉米赤霉烯醇、2玉米赤霉烯酮DBS/ 0XX20XX1附录B                                       （资料性附录）实验室内回收率及重复性测定数据表 B.1 实验室内回收率及重复性测定数据样品名称 被测组分 添加浓度 /(g/kg) 回收率范围/% 相对标准偏差 （ RSD）/%6.0 76.496.5 9.0412.0 77.292.3 6.44-玉米赤霉烯醇60.0 75.395.6 8.583.0 76.398.3 9.266.0 82.398.6 6.80玉米玉米赤霉烯酮60.0 84.397.6 5.926.0 79.498.5 8.3612.0 83.297.3 6.04-玉米赤霉烯醇60.0 80.398.9 7.853.0 78.398.9 8.926.0 85.597.9 5.76大豆玉米赤霉烯酮60.0 85.998.4 5.526.0 78.496.9 8.0912.0 82.496.3 5.91-玉米赤霉烯醇60.0 81.394.9 6.393.0 77.397.9 8.836.0 84.596.9 5.53水稻玉米赤霉烯酮60.0 84.697.4 5.056.0 74.291.9 8.4412.0 72.491.3 7.89-玉米赤霉烯醇60.0 78.390.9 5.953.0 76.392.9 7.856.0 76.592.4 6.66花生玉米赤霉烯酮60.0 80.691.9 5.316.0 73.292.4 8.5212.0 71.689.3 7.40-玉米赤霉烯醇60.0 73.389.3 7.423.0 72.691.5 8.716.0 72.590.1 7.54玉米淀粉玉米赤霉烯酮60.0 75.691.4 7.36DBS/ 0XX20XX2表 B.1（续）样品名称 被测组分 添加浓度 /(g/kg) 回收率范围/% 相对标准偏差 （ RSD）/%6.0 71.290.4 8.4112.0 73.389.5 6.88-玉米赤霉烯醇60.0 72.090.1 7.713.0 72.790.4 7.806.0 74.589.1 6.48面粉玉米赤霉烯酮60.0 73.691.4 7.706.0 70.988.4 8.0612.0 71.389.8 8.44-玉米赤霉烯醇60.0 71.990.4 7.563.0 71.590.3 8.246.0 72.889.9 7.37大豆油玉米赤霉烯酮60.0 72.789.5 7.696.0 71.490.5 8.3712.0 73.391.8 8.04-玉米赤霉烯醇60.0 73.992.6 7.353.0 72.891.3 8.016.0 72.690.1 7.50玉米色拉油玉米赤霉烯酮60.0 73.590.5 7.576.0 70.189.0 8.8912.0 72.190.4 8.22-玉米赤霉烯醇60.0 71.790.4 7.643.0 72.991.6 8.066.0 70.688.1 7.77芝麻油玉米赤霉烯酮60.0 72.589.5 7.76表 B.2 实验室间回收率及重复性测定数据不同实验室平均测定回收率/%样品 项目 添加水平/(g/kg) A B C D 平均值/% RSD/%6.0 75.50 89.15 98.33 87.48 87.66 10.70 12 89.58 87.05 79.58 86.22 85.41 4.99 -玉米赤霉烯醇60 89.38 85.89 83.22 86.13 86.16 2.93 3.0 91.33 86.05 79.33 85.88 85.57 5.74 6.0 81.50 90.05 73.83 90.15 81.79 9.58 玉米玉米赤霉烯酮60 91.47 90.68 75.23 91.39 85.79 9.30 DBS/ 0XX20XX3表 B.2（续）平均测定回收率/%样品 项目 添加水平 /(g/kg) 吉林省质检院吉林商检长春市质检院 本所平均值/% RSD/%6.0 89.83 89.82 81.17 88.48 86.94