食品中酸性橙II的测定 文本

DB S江 苏 省 地 方 标 准DBS 32/XXXXXXX食品安全地方标准食品中酸性橙 II 的测定XXXX- XX - XX 发布 XXXX - XX - XX 实施江 苏 省 卫 生 和 计 划 生 育 委 员 会 发 布 前言本标准系首次发布。 食品中酸性橙 II 的测定1范围本标准规定了食品中酸性橙II的液相色谱法测定方法、液相色谱 -质谱/ 质谱定性确证方法。本标准适用于红壳瓜子、鲍汁、辣椒面、豆瓣酱、黄鱼和腌卤肉制品中酸性橙II的定量测定及定性确证。本标准液相色谱法的定量限为2 mg/kg。2原理试样用水提取，经甲醇沉淀蛋白质，离心，高效液相色谱法测定，外标法定量。阳性结果用液相色谱- 质谱 /质谱定性确证。3试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T6682 规定的一级水。3.1甲醇（CH 4O）：色谱纯。3.2乙酸铵（C 2H7NO2）：色谱纯。3.3乙酸铵溶液（0.01 mol/L）：称取 0.772 g 乙酸铵，加水溶解至 1000 mL，混匀备用。3.4酸性橙标准品（C 16H11N2NaO4S）：纯度99.0%，或购买商品化标准溶液。3.5酸性橙标准品储备液（1.0 mg/mL）：准确称取 10 mg（精确至 0.1 mg）酸性橙，用 75%甲醇水溶液定容至 10.0 mL，配制成浓度为 1 mg/mL 的标准储备液, 于 4避光保存。3.6微孔滤膜：0.45 m。4仪器和设备4.1高效液相色谱仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。4.2液相色谱-质谱/质谱仪。4.3分析天平：感量 0.1 mg。4.4粉碎机。4.5组织匀浆机。4.6涡旋混合器。 4.7超声波振荡器。4.8离心机：转速4000 r/min。5样品处理5.1试样制备液体或粉末状样品如鲍汁和辣椒面可直接进行试样提取。固体及半固体样品，如黄鱼、腌卤肉制品、红壳瓜子和辣椒酱等经过匀浆或粉碎化后进行试样提取。5.2试样提取准确称取2.5 g（精确0.001 g）均质样品于50 mL具塞比色管中，加入5 mL水, 涡旋1min ，加入甲醇15 mL，超声提取 10 min，再振荡提取 10 min，加入甲醇至25 mL刻度线，混匀。取2 mL试液以不低于4000 r/min离心10 min，上清液用 0.45 m 滤膜过滤，供液相色谱测定。6液相色谱测定6.1色谱参考条件a) 色谱柱： C18柱，250 mm4.6 mm，5 m；b) 流动相：甲醇与0.01 mol/L乙酸铵溶液, 梯度洗脱程序见表1；表 1流动相梯度洗脱条件时间/min 甲醇/% 0.01 mol/L乙酸铵溶液%0 30 701.0 30 708.0 90 109.0 90 109.5 30 3012.5 30 70c) 流速： 1.0 mL/mind) 检测波长：485 nm；e) 进样量： 20 L。6.2标准曲线的制作用75%甲醇溶液将酸性橙标准品储备液逐级稀释得到浓度为0.2、0.5、1.0、5.0、10.0 g/ml的标准系列工作液，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。酸性橙II 典型色谱图参见附录A中的图A.1。6.3定量测定将试样处理液上机检测，得到色谱峰响应面积，由标准曲线回归方程计算试样待测液的浓度。超过线性范围则应稀释后再进样分析。 6.4分析结果的表述试样中酸性橙II的含量按照式(1)计算:.(1)10mVcX式中：X样品中酸性橙II含量，单位为毫克每公斤（mg/kg）；c由标准曲线方程计算得到的样品净化溶液浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V试样定容体积，单位为毫升（mL）；m试样质量，单位为克（ g）；计算结果以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示。7允许差在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8液相色谱-质谱/质谱确证如果液相色谱法检出结果为阳性，则需要用液相色谱-质谱/质谱法进一步定性确证。8.1液相色谱条件a） 超高效色谱柱：Waters Acquity BEH C 18柱，2.1 mm 50 mm ，1.7 m，或相当者。b） 流动相：甲醇与含0.1%甲酸的 0.01 mol/L乙酸铵溶液，梯度洗脱程序见表2。表 2流动相梯度洗脱条件时间 /min 甲醇/% 含 0.1%甲酸的 0.01 mol/L 乙酸铵溶液/%0 10 900.5 10 903.5 90 104.0 90 104.1 10 906.0 10 90c） 进样量：5 L 。d） 流速：0.25 mLmin 。8.2质谱/质谱条件a） 离子化方式：ESI -。b） 毛细管电压：3.00 kV。c） 源温度：120 。d） 脱溶剂气温度：400 。e） 脱溶剂气流量：500 L/h。f） 锥孔气流量：50 L/h。g） 碰撞室压力：3.510 -3 mbar。 h） 质谱采集方法：多反应监测（MRM）串联质谱模式，母离子m/z为326.9，定量子离子m/z为170.8，辅助定性离子为155.8，锥孔电压为35 ev，碰撞诱导解离能量为25 ev。8.2.1定性判定将标准溶液第一点0.2g/ml进样，得到标准溶液液相色谱-质谱/质谱图参见附录A中的图A.2 。与标准溶液相同仪器条件下进行样品测定，如果检出的色谱峰保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的丰度比相一致（相对丰度50%，允许20% 偏差；相对丰度20% 50%，允许25%偏差；相对丰度10%20% ，允许30% 偏差；相对丰度10% ，允许50%偏差），则可判断样品中存在目标物质。 A A附录A（资料性附录）酸性橙 II 标准溶液色谱图min0 2.5 5 7.5 10 12.5归 一 化-12-10-8-6-4-202 DA1 A, Sig=485,4 Ref=of (E:RLP2014072 014-07-2 1-39-0425-071.D) 10.798图 A.1酸性橙 II 标准溶液液相色谱图Time1.00 2.00 3.00 4.00 5.00%-10901