HPLC法测定云南不同地区产天麻中天麻素的含量.docx

第 28 卷第 3 期yunnan chemical technologyvol . 28 ,no 3hplc 法测定云南不同地区产天麻中天麻素的含量王京昆1 ,赵毅1 ,刘波1 ,潘化儒2 ,曹荣1 ,蓬丽艳1( 1 云南省药物研究所 ,昆明 650111 ; 2 云南省医药产品质量检测站 ,昆明 650032)摘 要 : 采用反相高效液相法测定了云南不同地区天麻中天麻素的含量 。以 c18 柱作为色谱柱 , 甲醇2水( 3070) 为流动相 ,检测波长为 270 nm ,按外标法定量 。样品用甲醇超声提取 ,离心取上清液 ,并用 4m 滤膜过滤 ,处去大量杂质 ,达到基线分离 。5 次平均加样回收率为 98 . 5 % , r s d = 1 . 87 % ; 重现性试验的 r s d = 1 . 53 % ( n =5) , 为天麻提供了准确 、灵敏的含量测定方法 。关键词 : 天麻 ;天麻素 ;含量测定 ; hpl c中图分类号 : r282 . 5文献标识码 : a文章编号 : 10042275 x( 2001) 0320025203determinat ion of ga strodin in yunnan d iff erent areas rhizoma ga strodiae by hpl cwang jing2kun1 , zhao yi1 ,l iu bo1 , pan hua2ru2 , cao rong1 , peng li2yan1 ,( yunnan instit ute of materia medica . kunming , 650111 , china)abstract : the rp2hplc was developed to determine t he content of gastrodin in yunnan defferent areas rhizoma gastrodiaeon c18 column , wit h met hanol2water ( 30 70) as mobile phase , detection wavelengt h at 270nm and external2standard quantitative met hod. the sample was extracted by met hanol2vltrasonic extraction met hode , and get its clear liquid part after being centrifugued ,t hen filtrated wit h 4m filter filmt to romove a huge amount of impurities and reach t he baseline separation. the average recovery of spots ( n = 5) was 98. 5 % ( rs d = 1. 87 %) . the rs d of reproducibility test was 1. 53 % ( n = 5) , which provided an accurate andsensitive quantitative determining met hod of for rhizoma gastrodiae.key words : rhizo ma gast ro diae ; gast ro din ;co ntent deter minatio n ; hpl c1前言天麻为兰科植物天麻 ( gast ro dia elata bl . ) 的 干燥块茎 ,主产于云南 、四川 、贵州等地 ,是我省最 重要的大宗中药材之一 。民间长期用于治疗偏头 痛 、中风手足不遂 、筋骨疼痛 、腰膝沉重 、小儿诸惊 等症1 。现代研究证明其具有显著的 抗 惊 厥 、催眠和扩张血管的作用 , 临床主要用于神经衰弱及 其 综 合 症 、血 管 神 经 性 头 痛 、经 前 期 紧 张 等 病除主产地昭通地区外 , 其他一些自然条件适宜的地区也把天麻的种植作为一项地方脱贫的重点项 目来抓 。云南省农村科技服务中心为此做了大量 工作 , 在我省的洱源县 、会泽县等地 , 扶持农户进 行了大量人工栽培试验和培训 , 本试验正是基于 中心提供的样品进行的 。试验采用高效液相色谱法对我省不同产地的 天麻进行 了 有 效 成 分 天 麻 素 含 量 的 测 定 , 为 药材栽培试验提供一些参考数据 。症2。民间也经常作为保健品使用 。近年来随着人民生活水平的提高 ,天麻的用量稳步增长 ,我省2bartak p. deter minatio n of phenols by spm ej . j chro mato gra. 1997 ,767 ( 1 + 2) :2752279 .魏复盛等 1 水和废水监测分析方法指南 m 1 北京 : 中国环境 科学出版社.方瑞斌 ,张维昊. 固相微萃取在分析化学中的应用 j . 云南化 工 ,1997 , ( 3) :9212 .方瑞斌 ,张维昊等. 石墨碳纤维吸附基质的固相微萃取装置的研制及应用j . 云南化工 ,1997 , ( 4) :22224 .贾金平 ,何翔. 固相微萃取技术与环境样品前处理 j . 化学进 展 ,1998 ,10 ( 1) :74284 .方瑞斌等. 碳素基 体 的 固 相 微 萃 取 吸 附 质 的 研 究 j . 色 谱 ,1999 ,17 ( 5) :4532454 .( 收稿日期 :2001204209)6374526 云南化工2001 年第 3 期2仪器 、试剂与实验用品2 . 1仪器美国 p e 公司高效液相色谱仪 ,l2250 型泵 ,l2290 型紫外可变波长检测器 , 数据积分仪 ; 美国 p e公司 l amda2 型紫外分光光度计 ; cq250 超声波仪(上海超声波仪器厂) 。5色谱条件色谱柱 : c18 中科院大连物化所 ( 200 mm 4 . 6 mm ,10 m) ;柱温 : 室温 ; 流动相 : 甲醇2水 ( 30 70) ;流速 : 2 . 0 ml / min ; 纸速 : 5 cm/ min ; 检测波长 : 270nm ;保留时间 :7 . 67 . 8 min 。6 标准曲线的绘制准确吸取对照品溶液 1 ,2 ,3 ,4 ,5 ,6 ,7 ,8 l ,按 上述色谱条件测定 ,以进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐 标 , 绘 制 标 准 曲 线 , 回 归 方 程 为 y = 95980 x +2828 , r = 0 . 9999 。天麻素在 1 . 2012 . 50 g 范围 内与峰面 积 呈 良 好 的 线 性 关 系 。标 准 品 及 样 品 的 hpl c 图谱见图 2 、图 3 。2 . 2试剂甲醇(色谱纯 ,上海化学试剂总厂) ,自制重蒸馏水。 对照品天麻素 (中国药品生物制品检定所出品) 。试验样品云南 省 大 理 州 洱 源 县 ( ) 、曲 靖 地 区 会 泽 县2 . 32 . 4( ) 、昭通地区鲁甸县 ( ) 栽培试验品 ,经鉴定 ,为兰科植物天麻 ( gast ro dia elata bl . ) 的干燥块茎各两 批 ,粉碎 ,过 80 目筛 。3供试品溶液和对照品溶液的制备3 . 1对照品溶液精确称取天麻素对照品 ( 80 干燥 1 h) 10 mg ,置 10 ml 容量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇 匀 ,即得 (每 1 ml 中含天麻素 1 mg) 。3 . 2供试品溶液的制备精确称取经 80 干燥后的天麻样品粉末约 1 . 0 g ,置 10 ml 容量瓶中 ,精确加入甲醇 5 ml ,称定重 量 ,超声处理 30 min ,静置 24 h ,振摇后再超声处理15 min ,再称定重量 ,用甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,静置 。取上清液离心 ,并用 4 m 滤膜过滤 ,即得 。图 2 天麻素标准品 hpl c 图谱4最大吸收波长的选择取对照品溶液 ,用流动相稀释后 ,用紫外分光光 度计测定 ,测得天麻素最大吸收波长为 279 nm 、270nm 、221 nm ,本试验选定 270 nm 为测定波长 。天麻素的吸收波长谱见图 1 。图 3 天麻样品 hpl c 图谱7稳定性试验表 1 稳定性试验结果放置时间 ( h)峰面积 ( a ) 平均峰面积 ( a )r s d ( %)061224482 725491 236497 653476 664488 3681 . 4248493 562图 1 天麻素紫外吸收波长谱准确吸取同一标准品溶液 5 l ,间隔一定时间2001 年第 3 期王京昆等 : hpl c 法测定云南不同地区产天麻中天麻素的含量27 进行测定 ,进样 5 次 ,天麻素的 r s d = 1 . 42 % 。说明样品溶液在 48 h 内稳定 。稳定性结果见表 1 。取 3 个产地的各 2 批天麻样品 , 共计 6 批 , 按3 . 2 法处理 ,制成供试液 。准确吸取对照品液 5 l 、 供试品液 10 l ,在上述色谱条件下进样和测定 ,按照干燥品计算样品中天麻素含量 ,测定结果见表 4 。8重复性试验对同一批样品 ( ) ,分别称样 5 次 ,照 3 . 2 法处 理 ,测定天麻素含量 ,试验结果见表 2 。11回收率回收率试验结果见表 5 。表 5 回收率试验结果9精密度试验准确吸取对照品溶液 5 l ,重复样品 5 次 ,5 次 测得峰面积值的 r s d = 1 . 11 % ,试验结果见表 3 。表 2 重复性试验结果回收率 ( %)样品( g)样品含量( mg)加入量( mg)测得量( mg)测得值平均值 r s d0 . 518 220 . 880 . 451 . 2997 . 0样品号样品量( g)峰面积( a )天麻素含量 平均含量0 . 503 470 . 860 . 481 . 3197 . 8r s d( %)( %)( %)0 . 492 350 . 840 . 451 . 2697 . 7 98 . 5 1 . 8711 . 017 52159 3250 . 1690 . 520 910 . 514 140 . 890 . 870 . 500 . 411 . 371 . 3098 . 6101 . 621 . 005 76159 6370 . 17431 . 018 90160 5480 . 1730 . 1701 . 5340 . 981 36153 0060 . 168 5 0 . 994 38 152 170 0 . 167 12 讨论及说明天麻素是天麻中的主要有效成分 ,有化学合成 产品上市 , 主治神 经 衰 弱 、失 眠 等 病 症 , 在中 国 药典2000 年版中天麻素作为控制天麻质量主要定量 指标3 ,已 进 行 了 收 载 。与 药 典 方 法 相 比 较 , 本 实 验的测定方法在流动相配制的简便性和对色谱柱的 保护等方面有一定的优越性 ,避免了长期使用缓冲 液流动相对色谱柱柱效的影响 。用于试验的药材都是云南省农村科技服务中心 提供的栽培试验品 ,所提供数据仅供参考 ,不代表该 地区天麻的整体质量水平 。表 3 精密度试验结果放置时间 ( h)峰面积 ( a )平均峰面积 ( a )r s d ( %)1481 6262493 4573488 933482 7931 . 2545470 598479 35110样品的含量测定表 4 6 批天麻样品含量测定结果参考文献江苏新医学院. 中药大辞典 ,上册m 1 上海 :上海科学技术出版社 ,1986 ,315 .国家医药管理局天津药物研究院 1 全国植