HPLC法测定头孢曲松钠和有关物质含量的改进.docx

hplc法测定头孢曲松钠和有关物质含量的改进 周劲康康田制药( 中山) 有限公司，广东 中山 528415摘要: 目的 对 hplc 法测定头 孢曲松钠和有关物质含量的方法进行改进 。方 法 选 用 thermo bds hypesil c18 ( 250 mm 4 6mm，5 m) 色谱柱，流动相为甲醇-0 2% 磷酸 ( 30 70) ，检 测 波 长 为 254 nm; 流 速 为 1 0 ml / min。结 果 本 品 中 头 孢 曲松钠含量测定线性范围为 4 580 6 870 ng( r = 1 000) ，平均回收率为 99 7% ( sd = 0 5% ，n = 6) ; 检测限和定量限分别为 0 09 ng 和 0 31 ng。结论 该改进后的测定方法更快速、准确，重复性好; 检测结果同中国药典( 2010 年版) 的比较，基本一致。关键词: 头孢曲松钠; 含量测定; 有关物质; hplc; 改进中图分类号: 927 2文献标志码: a文章编号: 1673 4610( 2014) 08 0580 04improvement of content determination method of ceftriaxonesodium and its elated substances by hplczhou jinkangkontam pharmaceuticals ( zhongshan) co ，ltd，zhongshan，guangdong 528415，chinaabstract: objective to improve the content determination method of ceftriaxone sodium and its related substances byhplc methods the thermo bds hypesil c18 ( 250 mm 4 6 mm，5 m)column was used，and the mobile phasewas composed of methanol-0 2% phosphoric acid solution ( 30 70) ，the detection wavelength was 254 nm; and the flowwas 1 0 ml / min esults the method is suitable to determine the content of ceftriaxone sodium and its related substancesthe main peak and the other impurities peaks could be separated efficiently by this method ceftriaxone showed a goodlinearity in the range of 4 580 6 870 ng ( r = 1 000) ; and the average recovery was 99 7% with sd of 0. 5% ( n = 6) ，the lod and loq were 0 09 ng and 0 31 ng conclusion this improvement method is more simple，more accurate andreproducible，and the determination result is the same as the described method in china pharmacopoeia ( 2010) key words: ceftriaxone sodium; content determination; related substance; hplc; improvement头孢曲松钠是一种广泛应用于临床的第三代头孢菌素类药物，为国家基本药物。在中国药典( 2010 年 版) 1和近年相关文献2 4 中，其含量测定和有关物质的检测，均采用乙腈-水流动相体系和 c18 液相色谱柱进 行; 现笔者尝试采用甲醇-水为流动相体系和 c18 色谱柱 对其的测定方法进行优化，结果表明主峰与杂质峰的分 离度符合规定的要求; 并且降低了流动相溶剂的毒性。孢 曲 松 钠 原 料 批 号:(111021043，120421029，120421036) ;注 射 用 头 孢 曲 松 钠 ( 批 号:120512，120518，120523 ) ;甲 醇 为 色 谱 纯 ( 安 徽 时 联full-time) ; 水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。1 2仪器高效 液 相 色 谱 仪: 日 本 岛 津 lc-2010cht 高 效 液相色谱仪。11 1实验材料与仪器材料头孢 曲 松 标 准 品 ( 中 国药品生物制品检定 所，22 1实验方法与结果色谱条件thermo bds hypesil c18 ( 250 mm 4 6 mm，5 m)130480-200903，纯度: 83 7% ) ，头孢曲松反式异构体标准品( 中国药品生物制品 检 定 所，130660-201001 ) ; 头色谱柱; 流 动 相: 甲 醇-0 2% 磷 酸 ( 30 70 ) ; 流 速: 1. 0ml / min; 检测波长: 254 nm; 柱温: 25 ; 进样量: 20 l。作者简介: 周劲康，制药工程师，主管药师、注册执业药师，注册质量工程师，tel:e-mail: frankie0330126 com5802014 年 08 月第 24 卷第 08 期 今日药学2 2含量测定2 2 1含量测定标准品溶液的制备 精 密 称 取 头 孢曲松标准品适量，加水溶解并制成每 1 ml 含 0 22 mg的溶液，即得头孢曲松标准品溶液。按上述“2 1”项下色谱条件进行检测，见图 1。图 3 系统适用性溶液稳定性试验 取同一批号( 批号: 120523) 制成2 2 6的供试品溶液，按一定的间隔时间内，按 上 述“2 1 ”项下色谱条件 连 续 进 样。8 h 内 的 峰 面 积 的 sd 为 13% ( n = 6) ，表明头孢曲松钠溶液在 8 h 内相对稳定。图 1 头孢曲松标准品溶液重复性试验 取同一批号样品( 批号: 120523)2 2 76 份，按上述“2 1 ”色谱条件进行测定，结果 重 复 性 良好，含量为 93 9% ，sd = 0 4% 。2 2 2含量测定供试品溶液的制备 精 密 称 取 本 品25 mg，置于 20 ml 量 瓶 中，加水溶解后至刻度，摇 匀，精密吸取 2 ml，置 于 10 ml 的 量 瓶 中，加 水 到 刻 度 摇匀，滤过，取续滤液，即得。按上述“2 1”色谱条件进行检测，见图 2。2 2 8加样回收率试验精密称取已知含量的样品 ( 批号: 120523) 6 份( 详见表 1) ，分别置 20 ml 量瓶中，精密加入上述头孢曲松标准储备液 5 ml，加水至刻度，摇匀，精密吸取 2 ml，置于 10 ml 的量瓶中，加水到刻度摇匀，滤过，取续滤液，即得，按 上 述“2 1 ”项 下 色 谱条件进行测定，结果见表 1。表 1 加样回收率试验结果样品取样量( mg)加入标准品量( mg)回收率( % )平均数( % )sd( % )13 2112 5611 7813 1212 9213 2799 32100 2199 2499 58100 1799 36图 2 头孢曲松钠供试品溶液11 4599 70 52 2 3系统适用性溶液的制备取头孢曲松标准品 和头孢曲松反式异构体标准品适量，加水溶解并制成 每 1 ml 分别含 0 22 mg 的溶液，即得头孢曲松系统适 用性溶液; 按上述“2 1”色谱条件进行检测，见图 3。2 2 4线性关系考察 取头孢曲松标准品 0 131 4 g，精密称 定，置 50 ml 量 瓶 中，加 水 至 刻 度，摇 匀，制 得2. 29 mg / ml 头孢曲松标准储 备 液。分别精密吸取上 述头孢曲松标准储备液加水稀释成不同浓度的头孢曲松线性关系考察溶液( n = 6) : 0 229，0 458，2 29，1145，229，343 5 g / ml。按上述“2 1”项下色谱条件进行测定，以峰面积的积分数值为纵坐标，进 样 量 为 横 坐标，绘制标准 曲 线，计算得回归方程: y = 2 750 5 +124 2，r = 1 000( n = 6) ，说明头孢曲松进样量在 4 580 6 870 ng 范围内线型关系良好。2 2 9样品测定和同中国药典( 2010 年版) 方法检按“2 1 ”的含量测定方法 和中 国 药测结果 的 比 较典( 2010 年版) 含量检测的方法，对不同生产批号的 样品进行含量测定，计算头孢曲松的含量，结果见表 2。表 2含量检测结果比较按中国药典( 2010 年版) 检测结果按本分析方法检测结果品种批号含量( % )含量( % )头孢曲松钠原料11102104312042102912042103612051212051812052391 692 394 492 594 493 991 792 294 192 394 394 1精密度试验 精密吸取样品( 批号: 120523) 溶2 2 5注射用头孢曲松钠液 20 l，按上述“2 1”色谱条件连续进样 6 次，测定头孢曲松的峰面积，其 sd 为 0 1% 。581pharmacy today 2014 08 vol 24 no 082 3有关物质检测ml 中和，再加水至刻度摇匀，作为碱降解溶液。2 3 1有关物质供试品溶液的制备 取含量测定的供2 3 3 4氧化降解试验精密吸取上述头孢曲松钠 试品溶液，作为 0 22 mg / ml 的头孢曲松钠有关物质供试品溶液，按上述“2 1”项下色谱条件进行测定，见图 4。储备液 2 ml 置于 20 ml 量瓶中，加 30% 双氧水溶液 1ml，室温放置 2 h 后，再加水至刻度摇匀，作 为 氧 化 降解溶液。2 3 2有关物质对照溶液的制备精密吸取上述有 关物质供试品溶液 1 ml，置 100 ml 的量瓶中，加水稀释，摇匀，制成 2 2 g / ml 头孢曲松钠有关物质对照溶液，按上述“2 1”项下色谱条件进行测定，见图 5。2 3 3 5光照降解试验 精密吸取上述头孢曲松钠储备液 2 ml 置于 20 ml 量中，置 4 000 lux 的光照下，室温放置 2 h 后，再加水至刻度摇匀，作为光照降解溶液。2 3 3 6高温降解 试 验精密吸取上述头孢曲松钠 储备液 2 ml 置于 20 ml 量瓶中，置 40 温度下放置2 h 后。取出放冷，再加水至刻度摇匀，作 为 高 温 降 解溶液。2 3 3 7将上述 5 种溶液按上述“2 1”项下色谱条件 进行测 定，记录色谱图至主峰的 保 留 时 间 的 3 5 倍。 各图谱中的杂质峰与主峰分离效果良好。2 3 4检测限和定量限的测 定取头孢曲松标准品 图 4 有关物质供试品溶液溶液，按浓度稀释法进样分析( 分别按 10 、100 、1 000 、10 000 、100 000 倍 稀 释 ) ，测 定 色 谱系统基线噪音。以信噪比为 3 1 为检测限，信噪 比 为 10 1 为 定 量 限。经过检测，该检验方法的检测限 为 0 09 ng; 定 量 限 为0 31 ng。2 3 5精密度试验 取上述头孢曲松钠溶液，按上述“2 1”项下色谱条件进行测定，连续进样 6 次，其 sd为 0 3% 。图 5 有关物质对照溶液稳定性试验 取同一批号头孢曲松钠原料( 批2 3 62 3 3专属性试验号: 120421036) 制成有关物质供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8 h 后 进 样 测 定。结果供试品溶液的最大杂质的 限度的 sd 为 0 7% ，总 杂 限 度 的 sd 为 0 7% 。表明该有关物质供试品溶液 8 h 内相对稳定。2 3 3 1头孢曲松钠储备液的制备取 头 孢 曲 松 钠原料( 批号: 120421036) 0 115 2 g，精密称定，置 50 ml量瓶中，加水溶解后至 刻 度，摇 匀，制 得 2 2 mg / ml 头孢曲松钠储备液。2 3 3 2 酸降解试验 精密吸取上述头孢曲松钠储备 液 2 ml 置 于 20 ml 量 瓶 中，加 0 2 mol / l 盐 酸 溶 液 5 ml，室温放置 2 h 后，加 0 2 mol / l 氢氧化钠溶液 5 ml 中和，再加水至刻度摇匀，作为酸降解溶液。2 3 7重复性试验取同一批号的头孢曲松钠原料 ( 批号: 120421036) 6 份，按上述“2 1”项下色谱条件进行测 定。 结果最大杂质 的 限 度 为 0 1% ，sd 为 03% ; 总杂的限度为 0 6% ，sd 为 0 2% 。2 3 8有关物质测定现取不同批号的头孢曲松钠 原料和注射用头孢曲松钠，分别按上述“2 1”项下色谱条件和中国药 典( 2010 年 版) 的分析方法进行有关 物质测定，结果见表 3。2 3 3 3碱降解试验精密吸取上述头孢曲松钠储 备液 2 ml 置于 20 ml 量瓶中，加 0 2 mol / l 氢氧化钠溶液 5 ml，室温放置 2 h 后，加 0 2 mol / l 盐酸溶液 5表 3 有关物质检测结果按中国药典( 2010 年版) 检测结果按本分析方法检测结果品种批号最大杂质( % )总杂质( % )最大杂质( % )总杂质( % )1110210431204210291204210361205121205181205230 20 20 10 20 10 10 40 60 60 50 30 30 20 10 10 20 10 10 40 50 60 60 20 2头孢曲松钠原料注射用头孢曲松钠5822014 年 08 月第 24 卷第 08 期 今日药学3 4色谱柱的适用性该方法 采 用 phenomenex luna c18 ( 2503讨论mm 4 63 1流动相的选取本方法采用甲醇-0 2% 磷酸溶液作为流动相，大大降低了所用 流 动 相 的 毒 性。并 且 采 用 1 0 ml / min 的流速，主峰的保留时间仅为 6 min 左右，主峰与相邻的杂质峰分离效果良好。mm，5 m) 和 kromasil c18 ( 250 mm 4 6 mm，5 m)色谱柱进行检验，主峰和相关的杂质峰分离效果良好。与中国药典( 2010 年版) 测试结果的比较通过分别用头孢曲松钠原料和头孢曲松钠按本文 的方法与中国药典( 2010 年版) 的方法进行检测比较， 两者含量和有关物质的测试的结果没有显著性差异。3 3系统适用性参数的优化通过本方 法 的 优 化，主峰的分离度符 合中 国 药典( 2010 年版) 的 要 求; 主 峰 的 拖尾因子有了明显的 优化，均在 0 95 1 05 的范围内。3 2( 收稿日期: 2013 06 15)( 上接第 579 页)实验发现，用改良的混合脂肪酸甘油酯制备的栓剂外观光滑、硬度适宜、溶出快。与普通混合脂肪酸甘油酯 制备的栓剂对比发现其更有优势。笔者认为由于改良的 混合脂肪酸甘油酯中引入了适量单甘酯及非离子型表面 活性剂，其亲水性及溶出方面都得到了改善。进一步稳 定性考察发现，当自研产品 1 在 30 、相对湿度 65% 条件下储存 6 个月时，其外观及溶出度未发生明显变化。鉴于目前美国药典、英国药典和欧洲药典对栓剂溶出度均有不同程度的要求，而中 国 药 典目 前仅为融变时 限，笔者认为随着中 国新药研发体系的 日趋完善，溶出度评价也终将成为栓剂的重要指标，受 到人们广泛关注。8gauthier c，dumoulin y，powell d，et al mesalamine sup-positoryp us: 20130231310 a1 2013 04 10 prepa-ration and in vitro evaluation of naproxen suppositories prep-aration and in vitro evaluation of naproxen suppositories9 国家药典委员会 中华人民共和国药典m 二部 北京: 中国医药科技出社，2010: 348 34910 the united states pharmacopeial convention the unitedstates pharmacopeia 35 / the national formulary 30 mbeijing: chemcial industry press，2006: 3499 350011 british pharmacopoeia commission british pharmacopoeiavolume iii s british: the stationary office press，2013: 106612 the japanese army editorial board the japanese pharma-copoeias sixteen edition tokyo: the interior prov-ince health b