三种不同提取溶剂对黄芩苷提取效果的影响毕业论文.doc

摘要摘要 本文研究了不同提取溶剂对黄芩苷提取效果的影响 具体内容摘要如下 使用超 声波法从干燥的黄芩根中提取黄芩苷 提取过程分别采用不同的提取溶剂 不同提取 溶剂选择水 60 乙醇 60 甲醇为实验材料 分别提取出黄芩苷粗品后 对提取出来 的黄芩苷粗品进行分离纯化 用紫外分光光度法对黄芩苷的浓度和质量进行测定 从 而测出每种溶剂中黄芩苷的提取率 然后对三种不同溶剂的提取率进行分析和比较 分析不同提取溶剂对黄芩苷提取效果的影响 以确定提取黄芩苷可使用的最佳的提取 溶剂 通过实验分析黄芩苷的最佳提取溶剂为乙醇 甲醇次之 最后为水 关键词关键词 黄芩苷 黄芩根 不同溶剂 超声波提取 紫外分光光度法 Abstract On the basis of a lot of literatures we studied different extraction effect of the different extraction solvent Specific summary as follows extract baicalin from the root of Scutellaria baicalensis with ultrasonic wave extraction baicalin extraction process using different extraction solvent we choose methanol ethanoland water as the extraction solvent When the baicalin are extracted we separated and purified them from compound Baicalin were analysed and determined by UV Spectrophotometry We also worked out the extraction efficiency of baicalin and made a comparation among different extraction efficiency Finally we confirmed that ethanol is the best extraction solvent the second is methanol the last one is water Key Words Baicalin Ultraviolet spectrophotomeg Ultrasonic wave extraction The root of Scutellaria baicalensis Different extraction solvent 目录目录 第一章第一章 绪论绪论 1 1 1 概述 1 1 2 黄芩中的化学成分 2 1 2 1 黄酮和黄酮醇类 2 1 2 2 挥发油类 2 1 3 黄芩的临床应用 2 1 4 黄芩苷的理化性质 2 1 5 黄芩苷的药理作用 3 1 5 1 抗氧化 3 1 5 2 抗菌及抗病毒 3 1 5 3 抑制醛糖还原酶活性 4 1 5 4 其它 4 1 6 黄芩苷的提取方法 4 1 6 1 水煎煮法 4 1 6 2 微波提取法 4 1 6 3 超声波提取法 5 1 7 黄芩苷的分离纯化方法 5 1 8 黄芩苷含量的测定方法 5 1 9 本论文的研究内容及研究意义 6 第二章第二章 不同溶剂提取黄芩苷不同溶剂提取黄芩苷 7 2 1 超声波提取原理 7 2 2 实验部分 7 2 2 1 以水为提取溶剂 7 2 2 2 以 60 乙醇为提取溶剂 8 2 2 3 以 60 甲醇为提取溶剂 9 第三章第三章 紫外分光光度法测黄芩苷含量紫外分光光度法测黄芩苷含量 11 3 1 实验仪器与试剂 11 3 2 实验部分 11 3 2 1 黄芩苷标准溶液的制备 11 3 2 2 测出所测溶液吸光度 12 3 3 实验结果及讨论 12 结论结论 14 参考文献参考文献 15 附录附录 16 致谢致谢 20 第一章第一章 绪论绪论 1 1 概述概述 黄芩又名香水草 山茶根 土金茶根 空心草 多年生草本植物 双子叶植物纲唇形 科植物 是一种药用植物且药用效果较好 受到中药方面学者的青睐 研究发现 其 药用成分主要存在于根部 主根长大 略呈圆锥状 外皮褐色 经过十几年的辛苦努力 学者们已从黄芩中分离得到多种黄酮类化合物 如黄芩苷 黄芩素 汉黄芩苷 汉黄 芩素等等 还有甾醇类化合物 糖类化合物和氨基酸等成分 其中黄酮类化合物被确 认为是最主要的药用有效成分 黄芩始载于东汉 神农本草经 列为中品 陶弘景 本草经集注 曰 圆者名子芩 为 破者名宿芩 其腹中皆烂 故名腐肠 苏颂 本草图经 谓 今川蜀 河东 陕 西近郡皆有之 苗长尺余 茎干粗如箸 叶从地四面作丛生 类紫草 高一尺许 亦 有独茎者 叶细长青色 两两相对 六月开紫花 根如知母粗细 长四五寸 二月 八月采根暴干 以上所述植物形态与今所用黄芩基本一致 黄芩具有清热燥湿 泻火解毒 止血安胎等作用 为清凉解热药 主治肺热咳嗽 血热妄行 湿热下痢 胎动不安 动脉硬化 高血压 植物神经官能症等症 黄芩产于河北 辽宁 山西 山东 内蒙古 黑龙江等地 我国大约有一百多种 植物属于黄芩属 根可入药的只有十多种 药用疗效较好的有粘毛黄芩 内蒙 山西 河北 山东 丽江黄芩 云南 滇黄芩 云南 四川 甘肃黄芩 甘肃 川 黄芩 四川 等 1 黄芩生长于石砾质或粘土质山坡 山顶草地 丘陵坡地 草原 常见于较干旱的 荒山坡 土岗以及草原型石砾质山地阳坡 黄芩喜温和气候 喜光 耐旱 怕水涝 耐寒 成株地下根部能耐 30 低温 适 宜于中性或偏碱性 土质疏松 肥沃土壤生长 在低洼积水或雨水过多的地方生长不 良 易造成烂根死亡 1 2 黄芩中的化学成分黄芩中的化学成分 1 2 1 黄酮和黄酮醇类黄酮和黄酮醇类 黄酮类成分为黄芩中的主要的化学成分 从黄芩中获得黄酮和黄酮醇类化合物四 十多种 最主要的黄酮类成分有黄芩苷 Baicalin 黄芩素 Baicakin 汉黄芩苷 Wogonoside 和汉黄芩素 Wogonin 黄芩新素 I II 去甲汉黄芩素 7 甲氧基黄 芩素 7 甲氧基去甲汉黄芩素 其中黄芩苷作为黄芩药材的主要有效成分 在黄芩植 株根 花 叶 茎等器官中均有分布 但含量上却有明显差异 其中根部的黄芩苷含 量最高 其次是花 叶 茎 2 因此 黄芩苷主要分布在根中 本试验所用原料为黄 芩的根部 1 2 2 挥发油类挥发油类 杨得坡等利用气相一质谱联用方法对中药黄芩根的挥发性成分进行了分析研究 鉴定了 19 种挥发性成分 17 种为首次发现 其中烯类成分有旷藿香烯 愈创木烯 异戊二烯等 酮类成分有薄荷酮 番薄荷酮等 酯类成分有癸基 己基 邻苯 二甲酸 酸二酯 邻苯二甲酸二异己酯等 其中异戊二烯是植物次生代谢过程中合成萜类化合 物的基本单位 一般来说 在植物体内很难发现其存在 另外邻苯二酸酯 26 1 则是 赛璐璐和化妆品工业常用的活性物质 3 1 3 黄芩的临床应用黄芩的临床应用 1 用于湿温发热 胸闷 口渴不欲饮 以及湿热泻痢 黄疸等症 2 用于热病高热烦渴 或肺热咳嗽 或热盛迫血外溢以及热毒疮疡等 此外 本品又有清热安胎作用 可用于胎动不安 常与白术 竹茹等配合应用 1 4 黄芩苷的理化性质黄芩苷的理化性质 黄芩苷主要来源于唇形科植物黄芩的干燥根 结构式如下图 黄芩苷为淡黄色针晶体 熔点为 223 225 18D 123 c 0 2 吡啶 水 易 溶于 N N 二甲基甲酰胺 吡啶中 可溶于碳酸氢钠 碳酸钠 氢氧化钠等碱性溶 液中 但在碱液中不稳定 渐 变暗棕色 微溶于热冰醋酸 难溶于甲酸 乙酸 丙 酮 几乎不溶于水 乙醚 苯 氯仿等 1 5 黄芩苷的药理作用黄芩苷的药理作用 黄芩苷 Baicalin 的生物活性非常显著 不但具有抑菌 利尿 抗炎 抗变 态及解痉作用 并且 还具有较强的抗癌反应等生理效能 在临床医学 上已占有重 要地位 除此以外 黄芩苷还能吸收紫外线 抑制黑色素的生成 因此也 可以应 用于化妆品的生产中 1 5 1 抗氧化抗氧化 由于黄芩苷能清除羟自由基和烷自由基 因此可抑制由他们引起的线粒体脂质 过氧化以及卵磷脂体代谢和对抗过氧化氢引起的细胞损伤 即具有抗氧化的作用 1 5 2 抗菌及抗病毒抗菌及抗病毒 黄芩苷在低于细胞毒浓度时可抑制T 细胞和艾滋病毒 在 HIV 1 被细胞开 始吸附时可阻止其复制 也可干扰HIV 1 攻击靶细胞 因此黄芩苷具有抗 HIV 1 病毒的作用 另外黄芩苷的抗菌谱十分广泛 它对痢疾杆菌 白喉杆菌 链球杆菌 葡萄球菌 绿脓杆菌 肺炎双球菌等均有抑制作用 程国强等以临床眼 科常见病原菌为实验菌种 研究黄芩苷的体外抗菌作用 得出黄芩苷对所有病原菌 均有不同程度的抑菌和杀菌作用 4 熊英对黄芩苷抗白念珠菌的作用机制进行研 究发现其在体外抗白念珠菌的作用较强 5 总之 黄芩苷抗菌作用强 抗菌谱广 受到医学界的广泛关注 1 5 3 抑制醛糖还原酶活性抑制醛糖还原酶活性 张家庆等研究发现黄芩苷对醛糖还原酶有明显的抑制作用 刘长山经过研究也发 现黄芩苷能抑制醛糖还原酶活性 降低尿白蛋白排泄率 有助于早期糖尿病的治疗 6 1 5 4 其它其它 黄芩苷还有镇静 解热 保肝利胆等作用 可用于治疗肝炎 对急性黄疸型肝炎 急性无黄疸型肝炎及慢性肝炎均有疗效 并对免疫 心脑血管 消化 神经等系统均 有保护作用 1 6 黄芩苷的提取方法黄芩苷的提取方法 1 6 1 水煎煮法水煎煮法 水煎煮法是提取中药成分的最古老的方法 即将原料加水煎煮取煎出液的方法 此法能够提取植物中的大部分有效成分 且简单易行 只需将一定量的药材粉碎后 置于适宜的煎煮器中 加水浸没药材 反复煮沸 每次 1 2 小时 然后分离煎出液 每次分离出的煎出液合并到一起即可 此法优点是简单易行 对提取仪器没有要求 在水浴锅或电炉上均可进行 缺点是煎出液杂质多 后处理复杂 煎煮时间长 浪费 时间 提取率低 1 6 2 微波提取法微波提取法 微波与无线电波 红外线 可见光一样都是电磁波 微波是指频率为 300MHz 300KMHz 的电磁波 即波长在 1 米到 1 毫米之间的电磁波 通过微波来 实现提取 干燥剂灭菌等的方法称为微波法 微波法提取的原理 微波能够对物 料进行立体的并且是穿透性的加热 在微波场中 由于各种物料吸收微波能力的差异 使得萃取体系中的某些组份被选择性加热 从而使得物质内部产生能量差 被萃取的 物质得到足够的动力从体系中分离 微波法提取的优点是没有高温热源 消除温度梯 度 大大提高了中药中有效成分的提取率 还能有效保护物料中的有效成分 而且节 省提取时间 只用几分钟就可完成提取过程 7 1 6 3 超声波提取法超声波提取法 超声波指频率高于 20KHz 人的听觉阈以外的声波 超声波能够在提取溶剂中产 生机械效应 空化效应和热效应 通过增大溶剂分子的运动速度 增大溶剂的穿透力 以提取植物有效成分 提取原理是 这些效应共同配合 能够有效的破坏植物的细胞 壁和细胞膜结构 使细胞破碎 释放出细胞中的内容物 将有效成分释放到提取溶剂 中 并与有效成分充分接触 融合 加速有效成分在提取溶剂中的溶解和混合 因此 此法可用于植物活性成分的提取 而且效率高 可明显缩短提取时间 还可保护有效 成分不被破坏 超声提取的特点是 提取时不需加热 避免了其他方法长时间加热对有效成分的 破坏 而且也节省了能源 超声波提取提高了有效成分的提取率 有利于中药资源 的充分利用 提高了经济效益 溶剂用量少 节约了溶剂 提取物有效成分含量高 由于这些优点 超声波技术在中药制剂提取工艺中的应用越来越受到关注 是目 前为止较为先进而且应用较为广泛的中药提取方法 1 7 黄芩苷的分离纯化方法黄芩苷的分离纯化方法 上述提取法得到的中草药提取物仍然是混合物 需进一步除去杂质 进行分离 纯化 可采用酸碱沉淀法进行 酸碱沉淀法就是利用提取液中某些成分能在酸或碱中 溶解 当加碱或酸调整溶液的 pH 值后 所需成分又变回不溶物而析出 最后可以通过 离心把这些化合物分离出 但是应该注意 酸度 碱度都不宜过高 否则 所要分离 的物质会生成其他物质 1 8 黄芩苷含量的测定方法黄芩苷含量的测定方法 采用紫外分光光度法对黄芩苷含量进行测定和分析 紫外分光光度计工作原理 紫外分光光度计基本工作原理是 利用一定频率的紫 外 可见光照射被分析的有机物质 引起分子中价电子的跃迁 它将有选择地被吸 收 在紫外可见光的范围内 对于一个特定的波长 吸光度与试样中该成分的浓度成 正比 根据吸光度与已知浓度的标样的比较进行定量分析 紫外分光光度法原理 在相同吸收波长处 溶液的浓度与吸光度成正比 先用标 准品绘制一个标准曲线 然后根据所测得的吸光度的值带入标准曲线的线性方程 得 出待测溶液的浓度 最终计算出所得的黄芩苷粗品中的黄芩苷含量 1 9 本论文的研究内容及研究意义本论文的研究内容及研究意义 本论文的主要工作是对不同提取溶剂对黄芩苷的提取效果的影响进行比较 从而 确定最适于用于提取黄芩苷的溶剂 也是一种对黄芩苷提取上的优化 用分光光度法 计算出黄芩苷的得率 比较 分析不同溶剂对黄芩苷的提取效果 这是一种目前较为 常用也比较准确的方法 黄芩是我国传统常用的中药材 以其较高的药用价值和良好 的药用效果越来越受到广大药学工作者的关注 而其主要成分 黄芩苷的提取率的提 高成为相关科学家的研究重点 虽然产生了许多新的提取方法 但目前黄芩苷的提取 率依然很低 所以对黄芩苷的提取进行优化具有重要意义 第二章第二章 不同溶剂提取黄芩苷不同溶剂提取黄芩苷 中药材的提取过程是固 掖扩散过程 该过程分为 浸润 溶解 扩散和置换四 个阶段 在温度度 原料表面积 原料内外浓度差以及原料粒径相同的情况下 溶剂 的极性 粘度等物性影响到植物组织中不同物质的提取速度和溶出度 不同的提取溶 剂具有不同的极性及粘度 因此对物质的提取速度与溶出度也不同 从而影响提取效 果 本论文使用三种不同的溶剂 分别为水 60 乙醇 60 甲醇 然后对黄芩苷的提 取率进行比较 确定最佳的提取溶剂 2 1 超声波提取原理超声波提取原理 将药品放进超声波清洗仪后 开启 超声波的震动会产生机械效应 空化效应 以及热效应 乳化 扩散和击碎效应 这些效应共同配合 能够有效的破坏植物的细 胞壁和细胞膜结构 使细胞破碎 释放出细胞中的内容物 将有效成分释放到提取溶 剂中 并与有效成分充分接触 融合 加速有效成分在提取溶剂中的溶解和混合 因 此 此法可用于植物活性成分的提取 而且效率高 可明显缩短提取时间 还可保护 有效成分不被破坏 2 2 实验部分实验部分 2 2 1 以水为提取溶剂以水为提取溶剂 2 2 1 12 2 1 1 实验仪器与试剂实验仪器与试剂 超声波清洗仪 频率为 40khz 最大功率为 120kw 分为高低两档 高档为 120kw 低 档为 60w 粉碎机 水浴锅 高速离心机 布氏漏斗 SHB III 循环水式多用真空泵 电子天平 离心管 10ml 50ml 精密 PH 计 移液枪 200ul 1ml 玻璃棒 三角 瓶 烧杯 滤纸 双层纱布 烘箱 黄芩根样品 无水乙醇 1mol l 盐酸 1mol l 氢 氧化钠 蒸馏水 2 2 1 22 2 1 2 实验方法实验方法 将黄芩根用烘箱彻底干燥后 用粉碎机粉碎 称取适量黄芩根粉碎样 置于 50ml 大离心管中 加入十倍量的蒸馏水 盖上盖子并拧紧 防止液体漏出 室温下置于超 声波清洗仪中 离心管应完全浸没于水中 盖上超声波清洗仪的盖子 超声波清洗仪 调至低档 超声时间设为 30 分钟 打开开关 三十分钟后 打开盖子 取出离心管 用双层纱布过滤 取滤液 将滤渣重新放入到离心管中 再加入 10 倍量的蒸馏水 同 样超声提取 30 分钟 三十分钟后 再过滤 弃滤渣 合并两次滤液 用移液枪向滤液 中加入 1mol l 稀盐酸调 PH 值为 1 2 使用精密 PH 计的方法为 首先把复合电极装在 电极杆上 将电极插头插入仪器后部的测量电极插座内 将温度传感器接在传感器插 口处 若进行手动设置 则无需接传感器 然后用蒸馏水清洗电极 电极用蒸馏水洗 净后 用滤纸吸干 然后将电极放入第一个标准溶液中 按 pH pH 标定 键使仪器 处于 pH 测定状态 待读数稳定后再按下 pH pH 标定 键 使仪器处于 pH 标定状态 并按 键使显示值为当时温度下标准溶液的 pH 值 再按一下 确认 键确 认 再用蒸馏水清洗电极后 再用被测溶液清洗两次以上 将电极置于被测溶液中 按 pH 标定中的温度设定方法进行温度设定 使温度值为被测样品此时的温度 按 pH pH 标定 键使 pH 测定指示灯亮 用玻璃棒搅拌溶液使之均匀 待读数稳定 后 显示值即为被测样品的 pH 值 滴入稀盐酸 直至 PH 计上的示数在 1 和 2 之间 然后将调节 PH 值后的滤液放在水浴锅中加热 80 度保温 30 分钟 三十分钟后 常温离心 6000r min 40min 弃上清 取沉淀 向沉淀中加入 12ml 蒸馏水 再用移液 枪加入适量 1mol l 的氢氧化钠调节 PH 值为 7 然后加入等体积的乙醇 充分搅拌 用 布氏漏斗和真空泵抽虑 取滤液 再向滤液中滴入 1mol l 稀盐酸 调节 PH 值为 1 和 2 之间 然后将溶液静置 12 16 小时 常温下离心 6000r min 40 分钟 弃上清液 取沉淀 即为黄芩苷粗品 置于烘箱中 50 度烘干 24 小时后 即为黄芩苷粗品的干燥 品 此时可以称量黄芩苷粗品的干重 做四份平行样 表表 2 12 1 黄芩苷粗品干重黄芩苷粗品干重 12 3 4 样品重 2 00052 00062 00112 0009 黄芩苷粗品 干重 0 0220 0430 0370 045 2 2 2 以以 60 乙醇为提取溶剂乙醇为提取溶剂 2 2 2 12 2 2 1 实验仪器与试剂实验仪器与试剂 超声波清洗仪 频率为 40khz 最大功率为 120kw 分为高低两档 高档为 120kw 低档为 60w 粉碎机 水浴锅 高速离心机 布氏漏斗 SHB III 循环水式多用真空泵 电子天平 离心管 10ml 50ml 精密 PH 计 移液枪 200ul 1ml 玻璃棒 三角瓶 烧杯 滤纸 双层纱布 烘箱 黄芩根样品 无水乙醇 1mol l 盐酸 1mol l 氢氧化钠 蒸 馏水 60 乙醇 2 2 2 22 2 2 2 实验方法实验方法 称取适量黄芩根粉碎样 置于 50ml 大离心管中 加入十倍量的蒸馏水 盖上盖子 并拧紧 防止液体漏出 室温下置于超声波清洗仪中 离心管应完全浸没于水中 盖 上超声波清洗仪的盖子 超声波清洗仪调至低档 超声时间设为 30 分钟 打开开关 三十分钟后 打开盖子 取出离心管 用双层纱布过滤 取滤液 将滤渣重新放入到 离心管中 再加入 10 倍量的蒸馏水 同样超声提取 30 分钟 三十分钟后 再过滤 弃滤渣 合并两次滤液 用移液枪向滤液中加入 1mol l 稀盐酸调 PH 值为 1 2 然后 将调节 PH 值后的滤液放在水浴锅中加热 80 度保温 30 分钟 三十分钟后 常温离心 6000r min 40min 弃上清 取沉淀 向沉淀中加入 12ml 蒸馏水 再用移液枪加入适 量 1mol l 的氢氧化钠调节 PH 值为 7 然后加入等体积的乙醇 充分搅拌 用布氏漏斗 和真空泵抽虑 取滤液 再向滤液中滴入 1mol l 稀盐酸 调节 PH 值为 1 和 2 之间 然后将溶液静置 12 16 小时 常温下离心 6000r min 40 分钟 弃上清液 取沉淀 即为黄芩苷粗品 置于烘箱中 50 度烘干 24 小时后 即为黄芩苷粗品的干燥品 此时 可以称量黄芩苷粗品的干重 做四份平行样 表表 2 22 2 黄芩苷干重黄芩苷干重 1 2 3 4 样品重 克 2 00962 00022 00072 0085 黄芩苷粗品干 重 克 0 0710 0690 0810 094 2 2 3 以以 60 甲醇为提取溶剂甲醇为提取溶剂 2 2 3 12 2 3 1 实验仪器与试剂实验仪器与试剂 超声波清洗仪 频率为 40khz 最大功率为 120kw 分为高低两档 高档为 120kw 低档 为 60w 粉碎机 水浴锅 高速离心机 布氏漏斗 SHB III 循环水式多用真空泵 电子天平 离心管 10ml 50ml 精密 PH 计 移液枪 200ul 1ml 玻璃棒 三角瓶 烧杯 滤纸 双层纱布 烘箱 黄芩根样品 无水乙醇 1mol l 盐酸 1mol l 氢氧化钠 蒸 馏水 60 甲醇 2 2 3 22 2 3 2 实验方法实验方法 称取适量黄芩根粉碎样 置于 50ml 大离心管中 加入十倍量的蒸馏水 盖上盖子 并拧紧 防止液体漏出 室温下置于超声波清洗仪中 离心管应完全浸没于水中 盖 上超声波清洗仪的盖子 超声波清洗仪调至低档 超声时间设为 30 分钟 打开开关 三十分钟后 打开盖子 取出离心管 用双层纱布过滤 取滤液 将滤渣重新放入到 离心管中 再加入 10 倍量的蒸馏水 同样超声提取 30 分钟 三十分钟后 再过滤 弃滤渣 合并两次滤液 用移液枪向滤液中加入 1mol l 稀盐酸调 PH 值为 1 2 然后 将调节 PH 值后的滤液放在水浴锅中加热 80 度保温 30 分钟 三十分钟后 常温离心 6000r min 40min 弃上清 取沉淀 向沉淀中加入 12ml 蒸馏水 再用移液枪加入适 量 1mol l 的氢氧化钠调节 PH 值为 7 然后加入等体积的乙醇 充分搅拌 用布氏漏斗 和真空泵抽虑 取滤液 再向滤液中滴入 1mol l 稀盐酸 调节 PH 值为 1 和 2 之间 然后将溶液静置 12 16 小时 常温下离心 6000r min 40 分钟 弃上清液 取沉淀 即为黄芩苷粗品 置于烘箱中 50 度烘干 24 小时后 即为黄芩苷粗品的干燥品 此时 可以称量黄芩苷粗品的干重 做四份平行样 表表 2 32 3 黄芩苷干重黄芩苷干重 1 2 3 4 样品重 克 2 00902 00082 00262 0031 黄芩苷粗品干 重 克 0 0620 0530 0680 071 第三章第三章 紫外分光光度法测黄芩苷含量紫外分光光度法测黄芩苷含量 3 1 实验仪器与试剂实验仪器与试剂 紫外可见分光光度计 黄芩苷标准品 50 乙醇 待测黄芩苷样品 3 2 实验部分实验部分 3 2 1 黄芩苷标准溶液的制备黄芩苷标准溶液的制备 称取黄芩苷标准品 50mg 用 50 乙醇定容至 50ml 制成浓度为 1mg ml 的标准储备 液 然后用移液管分别移取上述标准溶液 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0 置入 100ml 容量瓶 中 用 50 乙醇定容成浓度分别为 0 01mg ml 0 02mg ml 0 03mg ml 0 04mg ml 0 05mg ml 的溶液 用紫外分光光度 计测定上述溶液的吸光度 并绘制吸光度 溶液浓度标准曲线 如下图所示 吸光度 浓度标准曲线 0 0 05 0 1 0 15 0 2 0 25 0 3 0 010 020 030 040 05 溶液浓度 mg ml 吸光度 0 254 0 228 0 202 0 176 0 149 图图 3 13 1 吸光度吸光度 溶液浓度标准曲线溶液浓度标准曲线 根据标准曲线 求出线性方程为 y 2 6286x 0 123 3 2 2 测出所测溶液吸光度测出所测溶液吸光度 将提取出的黄芩苷粗品溶于 5ml 的浓度为 50 的乙醇中 在稀释 100 倍使溶液变 成 500ml 测出每组溶液的吸光度 将所测得的吸光度的吸光度值带入线性回归方程 算出溶液浓度 进一步算出粗品中黄芩苷含量 3 3 实验结果及讨论实验结果及讨论 表表 3 1 待测溶液吸光度待测溶液吸光度 1 2 3 4 水 0 1490 2160 1870 217 60 乙醇 0 2320 2290 2390 305 60 甲醇 0 2230 2180 2290 231 根据吸光度 测得粗品配置成的溶液中黄芩苷质量如下表 表表 3 23 2 待测溶液含黄芩苷质量 待测溶液含黄芩苷质量 g g 1 2 3 4 水 0 00490 01770 01220 0178 60 乙醇 0 02070 02020 02210 0346 60 甲醇 0 01900 01810 02010 0205 黄芩苷质量 黄芩苷得率计算公式为 黄芩苷得率 100 通过此公式计算黄芩 黄芩样品质量 苷得率如下表所示 表表 3 33 3 黄芩苷得率黄芩苷得率 1 2 3 4 平均值 水 0 2449 0 8847 0 6097 0 8896 0 6522 60 乙醇 1 0301 1 0099 1 1046 1 7227 1 2168 60 甲醇 0 9457 0 8996 1 0037 1 0234 0 9681 实验结论 通过图 2 可明显的比较出 以 60 乙醇为提取溶剂时黄芩苷的提取率最高 甲醇次之 提取率最少的是水 所以乙醇是提取效果较好的提取溶剂 0 0 002 0 004 0 006 0 008 0 01 0 012 0 014 1234 溶剂类型 黄芩苷得率 系列1 系列2 系列3 图图 3 23 2 黄芩苷得率比较黄芩苷得率比较 结论结论 本文研究了用不同提取溶剂提取中草药黄芩中黄芩苷对提取效果的影响 结论如下 1 本文以黄芩苷得率为指标 采用超声波法提取黄芩苷 因为超声波法简单省时且 提取率明显高于传统提取技术 而且无需高温加热 因此不会破坏中药中的有效 成分 提取过程分别采用不同的提取溶剂 分别为蒸馏水 60 的乙醇 60 的甲 醇 并把三种溶剂的提取率进行比较 发现乙醇的提取率最高 甲醇次之 水提 取率最低 2 采用紫外分光光度法测定黄芩苷含量 最大吸收波长为 278nm 回归方程为 y 2 6286x 0 123 该方法简单快捷 准确率高 参考文献参考文献 1 李欣 黄璐琦 邵爱娟等 黄芩种质资源的研究概况 J 世界科学技术一中医 药现代化 2003 5 6 2 张春风 黄芩苷在黄芩植株体内积累规律的研究 J 中华中医药学刊 2004 27 5 3 杨得坡 张小莉 中药黄芩挥发性化学成分的研究 J 中药新药与临床药理 1999 10 4 4 程国强 冯年平 唐琦文等 黄芩甙对眼科常见病原茵的体外抗茵作用 M 中 国医院药学杂志 2001 21 6 5 张文平 熊英 傅英嫒 黄芩苷对白念珠菌 DNA 合成的抑制作用 J 赣南医学 院学报 2004 24 5 6 刘长山 醛糖还原酶抑制剂和糖尿病慢性并发症的研究进展与争 J 1995 22 9 7 李芳 戴跃玲 廖克俭 微波辅助乙醇回流法提取黄芩苷 J 辽宁 辽宁化工出版 社 2010 39 1 8 郭孝武 张福成 超声提取对黄芩甙成分提出率的影响 J 中国中药杂 志 1994 19 6 9 王佩琪 王成明 卢静华 正交试验法优选超声提取黄芩苷的研究 J 中国药 学刊 2004 22 11 10 孙益林 徐 兵 黄芩中黄芩苷提取工艺研究 J 吉林中医药 2009 29 5 12 赵世初 王连心 洪志强 孟庆刚 黄芩苷提取和测定方法研究 J 中医药学 刊 2006 24 3 13 程齐来 杨韶平 黄志勤 黄芩苷提取工艺中提取溶剂的研究 时珍国医国药 2007 18 10 14 MiymcIli Y Tomimofl T Studies on thc constituents ofscutcllada species X VII Phenol glycosides ofthe root ofScutellaria baicaleinsis georgi NatMed 1995 49 3 15 Liu IX Durhan D6 Richards RM et a1 Baicalin synergy with betalactum antibiotics against methiciIlin resistant staphylococcus aureus and other beta lactum resistant aureus J J Pharmaeol 2000 52 3 附录附录 实验相关照片实验相关照片 图图 1 1 粉碎机粉碎粉碎机粉碎 图图 2 超声超声 30 分分 图图 3 过滤取滤液过滤取滤液 图图 4 调节调节 PH 值值 图图 5 水浴加热水浴加热 30 分钟分钟 图图 6 离心离心 40 分钟分钟 图图 7 7 离心后取沉淀离心后取沉淀 致谢致谢 在论文业已完成 即将告别美好大学生涯之际 我真诚地向四年来在学习和生活 中帮助过我的所有老师 同学 朋友和亲人致以最衷心的感谢 我首先向尊敬的导师张东向教授表示由衷的敬意与感激 感谢张老师在课题的设计 完成中给予的精心指导 还要真诚感谢本实验室的学长李升林 焦战 史绍林以及学 姐徐爽 李洪波这段时间以来对我的精心指导和帮助 另外还要感谢 425 实验室的同 学给予的友情帮助 另外也向多年来一直在背后全心全意支持我学习的家人表示深深的谢意 最后 感谢各位老师对论文的批阅和指正 谢谢 袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆 肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂 芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀 蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈 羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇 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