药物分析药物的含量测定方法与验证（精品） .ppt

药物分析 第四章药物的含量测定方法 主讲 秦大伟 companylogo 前言 药物的含量测定 是指药物中所含的主成分的量 是评价药物质量的重要指标 定义 companylogo 前言 药物的含量测定 化学 物理学 生物学 微生物学方法 基础 在规定条件下选用适当微生物测定某物质含量的方法 被测定的物质可以是某些生物生长所必需的维生素 氨基酸等 也可以是抑制某些微生物生长的抗生素 农药等 常使用的有液体稀释法和固体平板扩散法 利用某些生物对某些物质如维生素 氨基酸 的特殊需要 或对某些物质如激素 抗生素 药物等 的特殊反应来定性 定量测定这些物质的方法 化学反应 如uv光吸收特性 浊度 companylogo 前言 药物的含量测定 基于化学或物理学原理的含量测定 分两类 基于生物学原理的效价测定 基础 生物检定法 微生物检定法 酶法 目标 本章的目标 含量测定 p40 效价测定方法 凡以生物学方法或者酶学方法对药品中的特定成分以标准品为对照 作量反应平行线测定方法进行的生物活性 活力 测定 量反应平行线测定方法 同时测定供试品和标准品的剂量反应曲线 且两条反应线必须具有平行性 即供试品和标准品的活性只有量的区别 并无质的区别 companylogo 前言 药物的含量测定 容量分析法 三种分析方法 光谱分析法 色谱分析法 特点 操作简单 结果准确 耐用性高 但专属性差 特点 特点 简便快速 灵敏度高 有一定的准确度 但专属性稍差 灵敏度与专属性都高 有一定的准确度 但结果需要对照品 适用于准确度与精确度要求较高的样品测定 适用于灵敏度要求较高 样本量较大的分析项目 适用于专属性和灵敏度要求较高的复杂样品 companylogo 第一节定量分析方法的分类与特点 容量分析法 定义 将已知浓度的滴定液 标准物质溶液 由滴定管滴加到被测药物的溶液中 直至滴定液与被测药物反应完全 通过适当的方法指示 然后根据滴定液消耗的浓度和被消耗的体积 按化学计量关系式计算出被测药物的含量 亦称 滴定法 通过指示剂颜色变化 或者电子设备的电位或电流突变来指示滴定终点 滴定终点和计量点不一致 就会引入滴定误差 应该尽量避免 特点 适用范围 1 方法简便易行 所用仪器价廉易得 操作简便快速 广泛应用于化学原料的测定 较少应用于药物制剂的测定 2 方法耐用性高 影响测定的试验条件与环境因素少 3 测定结果准确 误差低于0 2 满足准确度高样品 4 方法专属性差 对相近杂质干扰缺少选择 适用于主成分含量较高的样品分析 companylogo 第一节定量分析方法的分类与特点 容量分析法有关计算 滴定度 每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物质量 中国药典 用毫克 mg 表示 例如 用碘量法测定维生素c的含量时 中国药典 规定 每1ml碘滴定液 0 05mol l 相当于8 806mg的维生素c c2h8o6 companylogo 第一节定量分析方法的分类与特点 被测药物 滴定液 容量分析法有关计算 滴定度计算 用b来滴定a 滴定液反应的质量 被测药物反应的质量 被测药物的摩尔质量 滴定液的摩尔质量 companylogo 第一节定量分析方法的分类与特点 容量分析法有关计算 滴定度计算 用b来滴定a 滴定液 待测液 等于1ml 浓度乘体积 nb 计算有一个从质量到物质的量 再到浓度再到滴定度的转变过程 浓度mb companylogo 第二节定量分析方法的特点 示例一计算vc的滴定度t 碘量法测定vc含量 m c6h6o6 176 13 c i2 0 05mol l mb 0 05mol l 1 1 ma 176 13 companylogo 第二节定量分析方法的特点 示例二异烟肼的滴定度 溴酸钾法测定异烟肼含量 m c6h7n3o 137 14 c溴酸钾 0 01667mol l a b companylogo 第二节定量分析方法的特点 直接滴定法 间接滴定法 直接滴定法 在实际工作中 滴定液的浓度可能与药典规定的浓度并不一致 所以应该进行校正 companylogo 第二节定量分析方法的特点 直接滴定法的含量计算方法 直接读取 药典规定 自己标定 取样量 companylogo 第二节定量分析方法的特点 间接滴定法 不直接对待测物进行滴定 而采用间接途径滴定 生成物滴定法 剩余量滴定法 被测药物与化合物a作用生成化合物b 再用滴定液滴定化合物b 也称回滴法 本法先加入定量过量滴定液a与药物作用 再用滴定液b与剩余的滴定液a反应 然后再进行含量计算 companylogo 第二节定量分析方法的特点 间接滴定法的生成物滴定法 注意滴定度t的计算 先计算t 再计算含量 请看下例 正确求a和b companylogo 第二节定量分析方法的特点 示例三葡萄糖酸锑钠的含量测定 sb5 2s2o32 本法先用葡萄糖酸锑钠与碘离子反应生成碘 再用碘与硫代硫酸钠反应生成碘离子 相当于是用硫代硫酸钠在滴定葡萄糖酸锑钠 因此要找出它们两者的量反应关系 也就是a和b 滴定度t的计算示例如下 companylogo 第二节定量分析方法的特点 间接滴定法的生成物滴定法 注意滴定度t的计算 请读取 请校正 companylogo 第二节定量分析方法的特点 间接滴定法的剩余量滴定法 也称回滴法 本法先加入定量过量滴定液a与药物作用 再用滴定液b与剩余的滴定液a反应 然后再进行含量计算 计算的关键在于求出滴定液a应用于药物反应的实际量 companylogo 第二节定量分析方法的特点 间接滴定法的剩余量滴定法 也称回滴法 本法先加入定量过量滴定液a与药物作用 再用滴定液b与剩余的滴定液a反应 然后再进行含量计算 计算的关键在于求出滴定液a应用于药物反应的实际量 常涉及化学反应 加热 分取等操作等步骤 使测定误差显著增加 空白试验校正 没有药物存在时的滴定 方法步骤与有药物存在时相同 计算公式相应修正如下 companylogo 第二节定量分析方法的特点 间接滴定法的剩余量滴定法 也称回滴法 本法先加入定量过量滴定液a与药物作用 再用滴定液b与剩余的滴定液a反应 然后再进行含量计算 计算的关键在于求出滴定液a应用于药物反应的实际量 常涉及化学反应 加热 分取等操作等步骤 使测定误差显著增加 没有药物存在时 滴定液a全部与滴定液b反应 药物存在时 剩余滴定液a全部与滴定液b反应 浓度校正作用 exampleasfollows companylogo 示例四司可巴比妥钠的含量测定 第二节定量分析方法的特点 取本品约0 1g 精密称定 置250ml碘瓶中 加水10ml 振摇使溶解 精密加溴滴定液 0 05mol l 25ml 再加盐酸5ml 立即密塞 并振摇1min 在暗处放置15min后 注意微开瓶塞 加碘化钾试液10ml 立即密塞 摇匀后 用硫代硫酸钠滴定液 0 1mol l 滴定 至终点时 加淀粉指示液 继续滴定至蓝色消失 并将滴定得的结果用空白试验校正 本法用溴与司可巴比妥钠反应 再用硫代硫酸钠反滴定溴 属反滴定法 并用空白试验校正 滴定液a为溴 b为硫代硫酸钠 含量计算只需先求溴滴定度 再求出硫代硫酸钠空白试验v0体积与样品测定体积vs companylogo 示例四司可巴比妥钠的含量测定 第二节定量分析方法的特点 已知 司可巴比妥钠m 260 23 司可巴比妥钠与溴反应摩尔 1 1 w 0 1022g 硫代硫酸钠浓度校正因子 1 038 供试品滴定vs 15 73ml 空白试验滴定v0 23 21ml it sveryeasy companylogo 第二节定量分析方法的特点 notice 本公式适用于空白校正情形 本公式适用于没有做空白校正情形 见上例 见下例 见p146 companylogo 第二节定量分析方法的特点 习题一剩余碘量法测定异烟肼含量 异烟肼在弱碱性溶液中 加定量过量的碘滴定液 0 1mol l 氧化 反应完成后 酸化 剩余碘滴定液用硫代硫酸钠滴定液 0 1mol l 滴定 以淀粉为指示剂 companylogo 第二节定量分析方法的特点 习题二非那西丁含量测定 精密称取本品0 3630g加稀盐酸回流1小时后 放冷 用亚硝酸钠液 0 1010mol l 滴定 用去20 00ml 每1ml亚硝酸钠液 0 1mol l 相当于17 92mg的c10h13o2n 请计算非那西丁的含量 companylogo 第二节定量分析方法的特点 光谱分析法 药典收载 紫外可见分光度法 原子吸收分光光度法 红外分光度法 荧光分析法 火焰光度法 本章讲叙 紫外可见分光度法 荧光分析法 companylogo 第二节定量分析方法的特点 紫外可见分光度法 基于物质对紫外区 200 400nm 和可见光区 400 760nm 的单色光辐射建立起来的光谱分析法 朗伯 比尔定律 基础 companylogo 第二节定量分析方法的特点 紫外可见分光度法 方法特点与适用范围 1 简便易行 本法使用的仪器价格比较低廉 操作简单 易于普及 2 灵敏度高 本法灵敏度可达10 7 10 4g ml 适用于低浓度试样分析 3 准确度较高 本法误差在2 5 之间 适用于对测定结果的准确度要求较高的样品 4 专属性较差 本法通常不受一般杂质的干扰 但对结构相近的有关物质缺乏选择性 本法比较少应用于原料药的含量测定 可用于制剂的含量测定 更多的应用于生物制剂的定量检查 本法紫外区须选用石英比色皿 比色皿一般为1cm 吸光度在0 3 0 7之间为宜 选用最大吸收光波长 companylogo 第二节定量分析方法的特点 紫外可见分光度法含量测定方法 4种方法 对照品比较法 吸收系数法 计算光度法 比色法 companylogo 第二节定量分析方法的特点 紫外可见分光度法含量测定方法 对照品比较法 分别配制供试品溶液和对照品溶液 对照品溶液的中所含被测药物的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100 10 所用溶剂量两者相同 在规定的波长下测定吸光度 按下式计算结果 companylogo 第二节定量分析方法的特点 1 对照品比较法 紫外可见分光度法含量测定方法 对照品比较法 p16 将cx用上述公式替代 即可通过实验求出各种含量 见书例 对应于稀释体积浓度 companylogo 第二节定量分析方法的特点 1 对照品比较法 紫外可见分光度法含量测定方法 对照品比较法 p16 制剂的标示量 系指每一支 片或每一个单位制剂中含有主药的重量 或效价 或含量或装量 p16 将cx用上述公式替代 即可通过实验求出各种含量 见书例 companylogo 第二节定量分析方法的特点 紫外可见分光度法含量测定方法 吸收系数法 吸收系数法 引入吸光系数的含量计算方法 companylogo 第二节定量分析方法的特点 溶液 片剂 紫外可见分光度法含量测定方法 吸收系数法 g ml mg转化单位 请看例题 companylogo 第二节定量分析方法的特点 紫外可见分光度法含量测定方法 吸收系数法 例题 示例 盐酸氯丙嗪注射液的含量测定 精密量取本品适量 约相当于盐酸氯丙嗪50mg 置200ml量瓶中 加盐酸溶液 9 1000 稀释至刻度 摇匀 精密量取2ml 置100ml量瓶中 用盐酸 9 1000 稀释至刻度 摇匀 在254nm下测定吸光度 按盐酸氯丙嗪的吸收百分系数计算 即得 过程推导 注射液 选溶液公式 如下 companylogo 第二节定量分析方法的特点 紫外可见分光度法含量测定方法 吸收系数法 d为供试品溶液的稀释体积 共稀释了200ml 100 2 10000ml 2ml companylogo 第二节定量分析方法的特点 吸收系数法 companylogo 第二节定量分析方法的特点 吸收系数法 固体试剂公式推导如下 companylogo 第二节定量分析方法的特点 3 计算分光光度法4 比色法 可能有实验 it sverysimple 看书 companylogo 特点 灵敏度高 可达10 10 10 12g ml要求低浓度下测定须做空白测定荧光弱的药物可衍生化后测定 第二节定量分析方法的特点 二 荧光分析法 companylogo 第二节定量分析方法的特点 三 色谱分析法 1 hplc 1 1内标法 as 内标物质峰面积或者峰高ar 对照品的峰面积或者峰高cs 内标物质浓度cr 对照品浓度 companylogo 第二节定量分析方法的特点 as 内标物质峰面积或者峰高ax 供试品的峰面积或者峰高cs 内标物质浓度f 校正因子 companylogo 第二节定量分析方法的特点 三 色谱分析法 1 hplc 示例一炔诺酮的含量测定 照高效液相色谱法 附录 d测定 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 以甲醇 水 65 35 为流动相 检测波长为244nm 理论塔板数按炔诺酮峰计算不低于1500 炔诺酮峰与内标物质峰的分离度及主成分峰后一杂质峰与主成分峰的分离度均应符合要求 内标溶液的制备取黄体酮约25mg 精密称定 置25ml量瓶中 加甲醇溶解并稀释至刻度 companylogo 第二节定量分析方法的特点 测定法取本品约25mg 精密称定 置25ml量瓶中 加甲醇溶解并稀释至刻度 摇匀 精密量取此溶液2ml与内标溶液3ml 置10ml量瓶中 加甲醇稀释至刻度 摇匀 取20 l注入液相色谱仪 记录色谱仪 记录色谱图 另取炔诺酮对照品适量 精密称定 同法测定 按内标法以峰面积计算 即得 companylogo 2 gc 第二节定量分析方法的特点 示例松节油的含量测定 照气相色谱法 附录 e测定 色谱条件与系统适用性试验用聚乙二醇 peg 20m为固定相 涂布密度为20 柱温为90 c 理论塔板数按 蒎烯峰计算应低于1500 校正因子测定取正丁醇适量 精密称定 加石油醚 30 60 c 制成每1ml含20mg的溶液 作为内标溶液 另取 蒎烯对照品约30mg 精密称定 置10ml棕色量瓶中 精密加入内标溶液2ml 加石油醚 30 60 c 至刻度 摇匀 吸取1 l注入气相色谱仪 计算校正因子 companylogo 第二节定量分析方法的特点 测定法取本品约35mg 精密称定 置10ml棕色量瓶中 精密加入内标溶液2ml 用石油醚 30 60 c 溶解并稀释至刻度 摇匀 吸取1 l注入气相色谱仪 测定 即得 本品含 蒎烯 c10h16 不得少于70 companylogo 外标法 标准加入法 companylogo 第二节定量分析样品的前处理方法 不经有机破坏 经有机破坏 直接测定 配位滴定法氧化还原滴定法 水解后测定 酸水解碱水解 经还原分解后测定 湿法破坏 凯氏定氮法 干法破坏 高温灼烧法氧瓶燃烧法 companylogo 第二节定量分析样品的前处理方法 一 直接测定法 葡萄糖酸钙edta配位滴定富马酸亚铁邻二氮菲 硫酸铈滴定葡萄酸锑钠间接碘量法 二 经水解后测定法 适用范围 金属原子不直接于碳原子相连或某些c m键结合不牢固的有机金属药物 companylogo 第二节定量分析样品的前处理方法 1 碱水解法 银量法返滴定 2 酸水解法 适用范围 含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物 edta配位滴定 companylogo 第二节定量分析样品的前处理方法 三 经还原分解后测定法 适用范围 碘原子直接与芳环连接的含碘有机化合物 碘他那酸 companylogo 第二节定量分析样品的前处理方法 三 经有机破坏的分析方法 含氮 硫 硫柳汞 氯化钠的生物制品 含氮有机合成药物测定的前处理和生物制品中金属元素测定时生物基质的去除 h2so4 hno3h2so4 hclo4h2so4 h2so4hno3 kmno4 分解剂 消化剂 辅助分解剂 凯氏定氮法 测定含有氨基和酰胺结构的药物结构 一 湿法破坏 companylogo 第二节定量分析样品的前处理方法 原理 将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热 药物分子中有机结构被 消化 成co2和h2o 有机结合的氮转化为无机氮 与过量的硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵 经碱化后释放出氨气 随水蒸气馏出 用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后 再用酸或碱滴定液滴定 常量法 含氮量25 30mg半微量法 含氮量1 0 2 0mg companylogo 第二节定量分析样品的前处理方法 凯氏烧瓶 k2so4 提高消解温度 cuso4 加快消解速度 硫酸 碱液 硼酸 吸收液 甲基红 溴甲酚绿指示剂 硫酸滴定空白校正 先用强酸水解 再用含碱硫代硫酸钠中和 最后用碱释放出氨气 并蒸馏出之 companylogo 二 干法破坏 1 高温灼烧法 用于含卤素 含磷药物和药物中砷盐的检查 常加入无水碳酸钠 硝酸镁 氢氧化钙 氧化锌等辅助灰化 2 氧瓶燃烧法 第二节定量分析样品的前处理方法 系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密闭的密闭的燃烧瓶中充分燃烧 使有机结构部分彻底分解为co2和h2o 待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物 被吸收于适当的吸收液中 再根据其性质和存在方式选择方法进行分析 companylogo 第二节定量分析样品的前处理方法 燃烧时待测物转化成不同价态的无机物以供测定 滤纸包装样品 companylogo 第三节药品分析方法的验证 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则药物稳定性试验指导原则缓释 控释制剂指导原则微囊 微球与脂质体制剂指导原则细菌内毒素检查法应用指导原则 目的 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求效能指标 评价分析方法的尺度 效能指标包括 精密度 准确度 检测限 定量限 选择性 线性与范围 耐用性 companylogo 第三节药品分析方法的验证 一 准确度 accuracy 系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度 一 含量测定方法 回收率 recovery 回收试验 加样